桑青枯雷尔氏菌MR111的GspF基因的获取与结构分析

Gsp F是细菌Ⅱ型分泌系统的内膜平台的重要蛋白,利用PCR扩增技术,获得了桑青枯雷尔氏菌MR111的含有该类基因功能性结构域的Gsp F基因。NCBI在线BLASTP分析发现,该基因与雷尔氏菌属来源的同源基因的一致性在90%以上;在聚类分析中,首先所有雷尔氏菌属同源基因聚合在同一分支,后与皮氏罗尔斯顿菌的同源基因聚合。基因结构分析表明,该基因有2个由α螺旋组成的具有高度相似性的、跨膜胞质结构域,揭示该基因可能参与细菌的跨膜分泌。     

一株碱性果胶酶产生菌的分离与培养条件研究

以果胶为唯一碳源,从蚕沙中分离碱性果胶酶产生菌,为提高家蚕对桑叶果胶成分的消化吸收提供参考。结果表明:从蚕沙中筛选到一株产碱性果胶酶克雷伯氏菌(Klebsiella sp.),菌落灰白色,边缘整齐,16S rDNA序列与Klebsiella sp.SPC06相似性达99%。研究获得菌株培养的最佳碳氮源为葡萄糖和酵母粉,最适生长温度35℃,pH值为8.0,最优培养条件下的生长曲线显示,培养15 h进入对数生长期,35 h后进入稳定生长。钙离子为辅助剂时酶活性最高,达48.50 U·mL~(-1),显示了一定的应用潜力。     

CHD蛋白家族两类染色质域CD1和CD2的进化差异研究

[目的]研究CHD蛋白家族2类染色质域CD1和CD2的进化差异。[方法]对获得的19个CHD蛋白基因的2类染色质域CD1和CD2进行氨基酸序列多态性、GC含量、密码子偏性差异和相对进化速率分析,并构建NJ系统进化树,研究不同CHD基因之间和CD1、CD2之间的发生关系。[结果]发现2类染色质域之间存在进化的差异是由所受选择性压力的不同造成的,其中CD1由于功能上的选择压力小而比CD2进化的快。[结论]在不同的物种和基因中CD1和CD2的进化差异存在普遍性。     

高效表达dsRNA大肠杆菌BL21 RNase Ⅲ- 的构建

为了寻找一种简洁、高效的dsRNA获得方式,降低RNAi技术的生产应用成本。应用PKD46介导的重组系统,将PKD46转入大肠杆菌BL21菌株体内,在L-阿拉伯糖的诱导下,产生重组蛋白,使宿主菌具有同源重组的能力,应用两端具有RNase Ⅲ基因40 bp同源序列的PCR产物对其染色体上的RNase Ⅲ基因进行了基因敲除,并在具有卡那霉素的LB平板上筛选到重组菌株。获得了一株能够利用IPTG诱导高效合成dsRNA的BL21 RNase Ⅲ-菌株,为进一步降低RNAi技术的生产应用成本奠定了基础。     

细胞色素P450新家族的第一个基因CYP337A1的分子克隆与序列分析

依据家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择了主要与抗性相关的CYP3集团（clan）中具有完全编码框并含有P450基因特征结构域的1条序列为研究对象,用RT-PCR方法对其进行了克隆.结果表明,该基因ORF为1 467 bp,编码489个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为56.60 KDa,等电点为8.64.只有1个内含子,外显子/内含子边界处符合GT-AG规则.与美国棉铃虫的CYP321A、邪恶按蚊的CYP6P9的相似性（identity）相对较高,分别为34%、32%,低于同一家族成员氨基酸相似性应高于40%的规定,从而被细胞色素P450委员会命名为新家族的第一个基因CYP337A1（GenBank登陆号：EF415297）.     

畸形桑叶中病毒的鉴定及其小RNA特征分析

从安康市桑园采集了68份畸形桑树叶片样品, 利用PCR扩增检测鉴定其中存在4种病毒, 分别是桑花叶型萎缩病相关病毒(mulberry mosaic dwarf-associated virus, MMDaV)?桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll associated virus, MMLRaV)?桑花叶萎缩类病毒(mulberry mosaic dwarf viroid, MMDVd)和桑潜隐病毒(mulberry cryptic virus, MuCV), 存在复合侵染?对4种病毒复合侵染桑叶进行小RNA深度测序和分析, 结果显示其中的sRNA来自MMDaV?MMLRaV?MMDVd?MuCV 4种病毒, 与RT-PCR检测结果一致?进一步分析sRNA长度和5′-末端序列, MMDaV sRNA长度以24 nt最多, 其他病毒sRNA主要为21 nt?MMDaV基因组链sRNA 5′-末端以A和T为主, MuCV以C最多, MMLRaV和MMDVd一致, 均以T最多?     

桑树MaPP2-B15基因的克隆、表达与序列特征分析

为了研究桑树的PP2-B15同源基因及其作用,利用桑树基因组数据库以及tblastn检索,获得桑树同源基因序列。据此设计引物,进行RT-PCR扩增和克隆测序,获得桑树的同源基因MaPP2-B15长度为818 bp。生物信息学分析结果显示,MaPP2-B15基因有3个外显子,编码271个氨基酸,含有F-box结构和韧皮部蛋白结构域,且该结构及其氨基酸组成在各物种间比较保守。RT-PCR分析显示,该基因在桑树叶片、叶柄、叶脉和枝条韧皮部中均有表达,可能参与了桑树的多种生物学功能。     

不同粒度桑叶粉硒元素的体外溶出研究

利用电感耦合等离子体质谱法（Inductively Coupled Plasma – Mass Spectrometry,ICP-MS）对桑叶粗粉、细粉、超微粉硒元素在人工胃液和人工肠液中溶出进行比较分析。结果表明,粒度能够影响硒元素的测出量,粗粉、细粉、超微粉硒元素的测出量分别为182.3 μg·kg^-1、360.2 μg·kg^-1和706.0 μg·kg^-1,消化液中的溶出结果显示,人工肠液的溶出率高于人工胃液,且随着桑叶粉粒度的减小硒的溶出量增大。动力学模型拟合发现,人工胃液中,粗粉、超微粉的最优拟合模型分别为零级和威尔布模型,人工肠液中,粗粉、细粉、超微粉的最优拟合模型分别为威尔布、一级、零级模型。     

蒙桑肌动蛋白基因的克隆与序列测定

为蒙桑基因表达与调控模式的研究以及蒙桑资源的利用提供参考,进行了蒙桑肌动蛋白(actin)基因的克隆与序列测定。结果表明:蒙桑actin基因mRNA序列大小为1 699bp,其中基因编码区1 134bp(GenBank登录号:KF031062),编码的377个氨基酸残基与其他植物的一致性在98%以上。该基因和川桑基因组中其他4个actin基因外显子数量和长度相同,但内含子差异极大,其CDS与桑树Morus010751(EXC30503)的一致性达到98%,氨基酸一致性为100%。聚类分析将其归为Class II类,与来自桑属和毛果杨的actin基因最先聚合在同一分支。