绵羊regakine-1基因的克隆与序列分析

【研究目的】克隆并分析绵羊regakine-1基因;【方法】肠系膜淋巴结组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆、测序,并进行序列分析;【结果】克隆的绵羊regakine-1基因与牛的同源性为91%,推测的氨基酸序列信号肽为1~21aa,SCY结构域为29~87aa,结构特征与牛的相一致。【结论】克隆了绵羊regakine-1基因的ORF,并注册GenBank (AccessionEF617337)     

双歧杆菌在乳制品生产中存在的问题和对策

双歧杆菌对人体健康有着重要的作用，但是在乳制品生产中它的应用却受到了限制。本文就双歧杆菌的厌氧性，低耐酸性，营养要求严格等特点综述了其在乳制品生产中存在的一些问题，并针对各个问题提出了相应的解决办法或建议。     

半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响

为了研究半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响,选6只空怀奶山羊进行自身前后对照试验和8只妊娠奶山羊进行同胎次配对试验.结果表明,空怀奶山羊对照期乳腺的腺泡很少发育,几乎看不到乳导管,试验期乳腺有明显导管生长和少量腺泡发育;妊娠奶山羊对照组乳腺随着妊娠的进行有少量腺泡发育,腺导管有明显的生长,试验组乳腺有大量的腺泡发育,腺导管生长更明显,且有分泌物出现.试验期血浆中与乳腺发育相关的激素水平明显升高.以上结果提示半胱胺在一定程度上促进了奶山羊乳腺发育.     

乳脂肪球膜主要膜蛋白功能的研究进展

嗜乳脂蛋白（butyrophilin，Btn）、黄嘌呤氧化还原酶（XOR）和乳脂肪球表面生长因子8 （MFG-E8）是乳脂肪球膜的３种主要膜蛋白。最近的研究发现，Btn和XOR在乳脂肪的分泌阶段是必不可少的。而MFG E8在乳腺泌乳晚期及衰退期，对清除凋亡的乳腺上皮细胞起着重要作用。     

大豆黄酮对动物泌乳及有关内分泌影响

大豆黄酮对大鼠、猪和奶牛泌乳及有关内分泌影响的研究表明,大豆黄酮具有弱的雌激素样活性,可促进哺乳动物的乳腺发育和有关的内分泌活动,影响机体的代谢活动和乳汁成分。     

不同提取方法对决明子蒽醌类成分及抗氧化活性的影响

采用回流、索氏、微波及超声4种提取方法,测定4种决明子提取液中的游离蒽醌和总蒽醌的含量;采用DPPH、FRAP两种方法测定其抗氧化活性,并分析蒽醌类成分和抗氧化活性之间的关系。结果表明:在对游离蒽醌的测定中以索氏提取法最高(0.16%),与其他提取方法相比差异显著(P<0.05);在对总蒽醌的测定中,提取率为超声(0.63%)>微波(0.56%)>回流(0.49%)>索氏(0.47%);抗氧化活性测定发现,以回流液的抗氧化能力最强,其次是微波液,二者与超声液和索氏液相比有显著性差异(P<0.05);游离蒽醌的含量与抗氧化活性呈极显著负相关(P<0.01)。     

猪Musclin基因片段克隆与序列分析

【研究目的】克隆并分析猪musclin基因；【方法】肌肉组织提取总RNA，利用设计的引物进行RT-PCR，PCR产物与pMD19-T连接后转化E. coli DH5α，检测阳性克隆并测序；【结果】克隆的猪musclin基因片段与人、大鼠、小鼠同源性分别为86%、78%、75%，预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域；【结论】克隆了猪musclin基因片段并注册GenBank (Accession.EF369511)。     

不同发育期大鼠乳腺组织中孕酮受体的表达研究

为了探讨大鼠乳腺中孕酮受体(PR)的变化规律,试验采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的孕酮受体表达进行了半定量研究。结果表明,妊娠18 d的PR表达水平明显低于处女期和妊娠6,12 d (P<0．05),整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;在泌乳6 d时检测不到PR,泌乳12,18 d可检测到PR表达,泌乳 18 d的PR水平低于泌乳12 d,但差异不显著(P>0．05)。表明PR可能参与了乳腺细胞的发育和泌乳。     

重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区

蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠延伸拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)将中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1Eriocheir sinensismolt-inhibiting hormone-1(Ers-MIH1)成熟肽基因的编码区连接起来,克隆到pMD18-T载体中,随机挑取3个阳性克隆测序,测序结果与已知的Ers-MIH1基因编码区的序列相一致。从基因组DNA中克隆该基因的方法有效地解决了取材不便给研究中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因所带来的限制等问题。     

不同包被抗原检测PRRS抗体间接ELISA方法的建立

为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法,本研究利用RT-PCR方法分别扩增出PRRSV VR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因,将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中,成功构建重组质粒pET-32a-GP4、pET-32a-N和pET-32a-GP4-N。将3种重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出GP4蛋白、N蛋白和GP4-N融合蛋白,并对表达出的蛋白进行纯化。将3种已纯化的重组蛋白分别作为间接ELISA的包被抗原,通过不断优化反应条件,最终建立了检测抗PRRSV抗体的间接ELISA方法。分别使用该3种方法检测从河南省多个地区收集的200份猪血清样品中的抗PRRSV抗体,并与商品化试剂盒进行比较,结果显示,GP4蛋白做抗原时检测阳性符合率为82.7%,N蛋白做抗原时检测阳性符合率为87.2%,GP4-N融合蛋白做抗原时检测阳性符合率为85.5%;因此,N蛋白是间接ELISA方法检测抗PRRSV抗体的优势包被抗原。