黄芪多糖对内毒素诱发奶牛实验性乳腺炎影响初探

选择同处于泌乳后期、日均产奶量相当的荷斯坦奶牛3头.每天早上挤奶后,于右后乳区经过乳头管灌注黄芪多糖20mL,左后乳区注入20mL生理盐水作为对照,连续10d.第11d早上挤奶后,两侧乳区均灌注含有100μg大肠杆菌内毒素的生理盐水10mL.分别于灌注黄芪多糖前、灌注内毒素前1h及灌注后3、6、9、12、24h采集两个乳区的乳样进行指标测定.试验结果表明,与灌注内毒素前相比,灌注PSS的对照乳区乳中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力在注入内毒素后9h时达到峰值(12.65U/mg protein),24h时乳中NAGase活力下降到灌注内毒素前的水平(P＞0.05);而施用了APS的试验乳区,在注入内毒素后,乳中的NAGase活力6h时达到峰值(16.79U/mg protein),9h时乳中NAGase活力已下降到灌注内毒素以前的水平(P＞0.05).总抗氧化能力(T-AOC)的测定结果表明,奶牛乳导管注入内毒素后,两种处理的乳区乳中的总抗氧化能力显著下降(P＜0.05),两种处理的乳区乳之间比较无显著差异(P＞0.05).     

双歧杆菌及其微胶囊化的现状研究

本文研究了双歧杆菌的生理保健作用，由于双歧杆菌微生态制剂产品不耐氧气、不耐胃酸的局限性，所以采用微胶囊技术来提高菌体的存活率。     

妊娠期小鼠下丘N-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达规律的研究

为探讨妊娠期小鼠下丘脑一垂体一卵巢轴中催乳素释放肽(PrRP)及其受体(PrRP-R)mRNA的表达规律,选用妊娠6、12、18 d小鼠(n=6),取下丘脑、垂体、卵巢组织,利用半定量PCR方法测定下丘脑-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达水平,另外利用放射免疫法(RIA)测定血浆孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平,探究下丘脑-垂体-卵巢轴PrRP和PrRP-R mRNA与血浆P、E2、PRL的相关关系.结果表明:妊娠期小鼠下丘脑、垂体、卵巢中都有PrRP、PrRP-R mRNA的表达,其中卵巢PrRP mRNA表达量较高,而下丘脑PrRP-R mRMA的表达量较高.妊娠期小鼠血浆P水平与垂体PrRP mRNA表达量呈显著负相关,而垂体PrRP mRNA与下丘脑PrRP-R mRNA表达量呈显著正相关,结果提示妊娠期m浆高水平的P可能通过抑制垂体PrRP mRNA的表达,进而作用于下丘脑参与妊娠相关调控.妊娠期小鼠血浆PRL水平与下丘腩、垂体、卵巢PrRP和PrRP-R mRNA的表达晕均无显著相关关系,提示血浆PRL水平可能小受上述组织PrRP的影响.     

PK-15细胞敲除TANK结合激酶1基因促进猪伪狂犬病病毒复制的研究

TANK结合激酶1(TBK1)是病毒感染时IRF3、IRF7磷酸化及Ⅰ型干扰素表达的关键酶,在抗病毒天然免疫应答和获得性免疫应答中发挥重要作用。为研究TBK1基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术构建猪TBK1基因稳定敲除PK-15细胞系,并利用CCK-8检测敲除TBK1对PK-15细胞活力的影响。然后利用流式细胞术检测PRV-GFP荧光强度,用RT-qPCR检测PRV-gB、PRV-gE、PRV-TK、IL-1β、IFN-β和ISG15的转录水平,用Westernblot检测PRV-gB和PRV-gE蛋白表达水平,以及通过滴度测定检测子代病毒的感染力,综合评价TBK1基因稳定敲除PK-15细胞对PRV病毒复制的影响。结果显示:T7E1检测结果显示TBK1基因外显子2区的3个sgRNA靶位点均切出了目的条带,选取编辑效率最高的TBK1-sgRNA1细胞系进行单克隆化培养,获取6株稳定敲除TBK1基因的单克隆细胞,随机选取4号细胞株进行CCK-8检测,结果显示敲除TBK1对PK-15细胞活力无影响。流式检测结果显示PRV-GFP感染阳性细胞占总PK-15细胞的56.89%,PRV-GFP感染阳性细胞占总PK-15-TBK1-/-细胞的77.95%,表明PK-15-TBK1-/-细胞可以促进PRV-GFP复制。RT-qPCR及WB检测显示该细胞系可以促进PRVmRNA转录和蛋白表达。滴度测定结果显示,PRV-QXX在PK-15细胞复制后TCID50为10^6.8TCID50·0.1mL^-1,而在PK-15-TBK1-/-细胞中复制后TCID50为10^8.5TCID50·0.1mL^-1。另外,RT-qPCR结果显示该细胞系可以抑制PRV感染引起的IL-1β、IFN-β和ISG15转录上调。以上结果表明TBK1基因敲除PK-15细胞系促进PRV复制,可能与IL-1β、IFN-β和ISG15转录水平抑制有关。     

急性内毒素损伤对奶山羊肝脏营养代谢的影响

本文旨在研究急性内毒素(LPS)损伤对奶山羊肝脏营养代谢的影响,初步探讨其作用机制。选取年龄、体重相近的关中奶山羊母羊18只,随机分为3组,分别作为对照组(CTL组)、试验Ⅰ组(TⅠ组)和试验Ⅱ组(TⅡ组),每组6只。TⅠ组、TⅡ组奶山羊分别按照100和200μg/kg BW的剂量从颈静脉注射LPS注射液30 mL,CTL组奶山羊注射相同体积的生理盐水。在注射后0、1、4、8、12、24 h从奶山羊的颈静脉采血,制备血浆以检测肝脏代谢功能及营养代谢相关指标。结果表明:注射LPS后肝脏代谢功能受到不同程度地损伤。血浆谷丙转氨酶活性平均值,TⅠ组显著高于CTL组(P<0.05),TⅡ组显著低于CTL组(P<0.05);血浆谷草转氨酶活性平均值,TⅠ组显著高于TⅡ组和CTL组(P<0.05),TⅡ组和CTL组之间差异不显著(P>0.05)。随着时间推移,血浆葡萄糖含量在CTL组基本稳定,在TⅠ组和TⅡ组出现较大波动,但其平均值各组间无显著差异(P>0.05)。血浆总蛋白含量平均值TⅠ组、TⅡ组显著低于CTL组(P<0.05)。随着时间的推移,血浆白蛋白含量在CTL组基本稳定,在TⅠ组和TⅡ组逐渐降低,其平均值各组间无显著差异(P>0.05)。血浆尿素氮、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和胆固醇含量平均值均表现为TⅠ组>TⅡ组>CTL组,除血浆低密度脂蛋白外,其他各指标均表现为TⅠ组、TⅡ组显著高于CTL组(P<0.05)。此外,TⅠ组血浆高密度脂蛋白和胆固醇含量平均值显著高于TⅡ组(P<0.05)。由此得出,LPS可引起肝脏损伤,进而对奶山羊肝脏营养代谢造成影响;LPS对奶山羊肝脏营养代谢的影响与LPS的剂量有关。     

绵羊Gastorkine-1基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,克隆并分析了绵羊Gastorkine-1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gas-torkine-1基因长619 bp,编码185个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82.0%,48.8%,85.4%,96.9%,推测的氨基酸序列信号肽为1~20 aa,BRICHOS结构域为54~150 aa,结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。     

猪甲状腺激素应答基因SPOT14(THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化

甲状腺激素应答基因（thyroidhormone responsive SPOT14,THRSP）是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用。为进一步研究猪SPOT14基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOT14（GenBank登录号:JF₉51726）的ORF片段与表达载体pET-28α（+）进行重组,获得的重组子pET-28α（+）-S14,转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL2l（DE3）感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS-PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1mmol/LIPTG诱导5h。将获得的包涵体用6xHisNi-NTA纯化柱纯化后,采用Western blot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达。重组质粒pET-28α（+）-S14在大肠杆菌BL21（DE3）中成功地得到了表达,不仅为SPOT14基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料。     

氨基酸螯合锌的应用效果

锌是动物机体内必需的微量元素。但以无机态的形式添加的锌吸收率低,且易和其它微量矿物质元素产生颉颃作用。有机态的锌添加剂主要是以氨基酸和锌为原料螯合而成的氨基酸螯合物,能较好的解决无机态锌在应用上的弊端。     

大豆黄酮对反刍动物血清睾酮和瘤胃消化代谢的影响

大豆黄酮对雄性湖羊及水牛血清睾酮和瘤胃消化代谢影响的研究发现：雄性湖羊连续 ７ ｄ 皮下注射大豆黄酮（ １００ ｍ ｇ／ｋｇ 体重）,血清睾酮水平明显增加; 雄性水牛经十二指肠瘘管灌注大豆黄酮（５００ ｍ ｇ／ｄ）,连续 １２ ｄ,血清睾酮（ Ｐ＜ ０．０５）、瘤胃细菌蛋白（ Ｐ＜ ０．０１）、挥发性脂肪酸（ Ｐ＜ ０．０５）和 Ｈ Ｎ３  Ｎ （ Ｐ＜ ０．０１）显著增加,但（ Ｃ２ ＋ Ｃ４ ）／ Ｃ３ 未见有明显变化。结果表明： 大豆黄酮可以提高血清睾酮水平,并改善瘤胃微生物消化代谢。     

猪源铁蛋白重链亚基纳米粒的制备

根据Gen Bank公布的铁蛋白重链基因序列,设计出1对特异性引物;提取猪心脏总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白重链亚基基因片段,经测序正确后,再将双酶切的纯化产物与PET32a原核表达载体相连接,构建重组质粒、把测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。将表达的重组蛋白用Ni~+离子亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物。将鉴定正确的铁蛋白产物置于透射电镜下观察其表征,以进一步鉴定铁蛋白纳米颗粒是否自组装成功。结果表明,本研究成功表达并纯化出了猪源铁蛋白重链亚基,而透射电镜下观察到了大量直径为10~13 nm的颗粒,说明重组猪源铁蛋白重链纳米粒自组装成功。