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为表达猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因,本研究根据GenBank登录的PCMV gB基因序列设计1对引物,以感染PCMV猪肺细胞总DNA为模板,采用PCR扩增得到gB基因片段,克隆于pMD-18T并进行核苷酸序列测定。利用DNAStar分析gB蛋白的抗原表位,选择抗原表位富集的2个基因片段(命名为PCMVgB1和PCMVgB2)分别克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒并转化Rosetta(DE3)宿主菌。结果显示:扩增的gB基因与GenBank登录的PCMV gB基因的核苷酸同源性在97.6%~98.9%之间,推导的氨基酸同源性在97%~98.6%之间。经IPTG诱导的含pET-gB1和pET-gB2重组质粒的宿主菌可表达重组gB1和gB2蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为62ku和36ku。Western blot和间接ELISA结果表明,重组gB1和gB2蛋白均具有反应原性。 相似文献
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规模猪场生产信息管理主要是指一个猪场运转资料的记载,如:疾病信息,母猪、公猪的档案信息等。这在养猪事业日益发展的今天已显得尤为重要。本人曾担任规模猪场场长4年,现主要从事动物传染病的教学与研究工作。与养猪朋友交流经验 相似文献
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为有效防控某鸡场70日龄肉鸡出现发病死亡的情况,对发病鸡群进行临床诊断、细菌分离及PCR鉴定以确定病原体;对分离菌进行药物敏感性检测以确定病鸡药物治疗方案。结果表明:鸡群存在大肠杆菌感染;分离菌对人用庆大霉素、新霉素、多粘菌素B、阿米卡星、头孢曲松比较敏感,对人用阿莫西林不敏感,对鸡场提供的兽药庆大霉素不敏感,对兽用阿莫西林克拉维酸钾、头孢噻呋钠、硫酸新霉素、硫酸阿米卡星敏感;通过使用敏感兽用抗菌药物并提高鸡舍温度、更换新的垫料成功控制了发病情况。说明兽医在进行细菌药物敏感性评价时,用人用药敏纸片和商品化的兽药得出的结果可能存在明显差异,同时也说明了使用药物的同时结合改善环境对于成功防控鸡群大肠杆菌感染具有重要的作用。 相似文献
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兽医传染病诊断实践是一门实践性很强的动物医学类专业实习课程,教学方法对实习效果有较大影响。针对目前教学实习过程中存在教学实习体系不健全,实验室诊断与临床诊断脱节,甚至没有临床诊断的问题,笔者提出了与养殖企业合作建立远程辅助教学实习平台,与兽医第三方检测机构合作开发新的实习基地,以及人为造病,模拟真实的发病状态的三点解决方案。新的教学实习办法将更加适合现在的养殖新模式和教学新形式,从而使学生能够更加全面地学习和掌握兽医传染病诊断方法。 相似文献
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利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)ETM编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)qb,构建成重组质粒pETmE^ms,并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mE^ms基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a(+)d?未突变的E^ms基因却不能表达,说明E^ms基因的RNA酶活性是影响该基因在Escherichia coli中表达的因素之一. 相似文献
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从湖南耒阳某发病猪场采集到6头小猪进行细菌的分离,染色镜检后得到一株革兰氏阴性杆菌.使用细菌的通用对细菌进行PCR扩增后送测序得到一段序列.将该段序列经过Blast分析发现此次分离的菌株为副猪嗜血杆菌,为了进一步确认该菌株的血清型,使用Lasergene分析软件绘制和分析遗传进化树.结果表明,该菌株与GenBank中登录的部分副猪嗜血杆菌血清型的16S rRNA同源性为96.3%~99.0%,与GenBank登录号为AB078974以及AB078974的两株血清5型的菌株构成一个分支,同源性高达99.0%. 相似文献
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从免疫过rSpaA的猪的脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT–PCR技术反转录合成cDNA。设计兼并引物扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸PCR方法,将VH和VL通过Linker连接成重组单链抗体(以下简写为sc Fv)的基因片段。将sc Fv的基因连接至噬菌粒载体p Comb3Xss,将重组载体电转化至宿主菌XL1-Blue,并经辅助噬菌体M13KO7拯救,获得猪源噬菌体单链抗体库,库容约为2.5×106。以rSpaA为靶抗原,经免疫亲和筛选,获得8株特异性较好的阳性克隆。本研究结果可为制备抗红斑丹毒丝菌的重组sc Fv提供新途径,并为猪丹毒的免疫检测和综合防制提供材料基础。 相似文献
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为调查规模猪场保育仔猪的细菌感染情况,文章对湖南常德、怀化、郴州等地10个规模猪场80头病、死仔猪进行细菌分离和药敏试验。结果显示:共在70头仔猪病料中分离到细菌,分离率为87.5%(70/80),其中大肠杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌感染分别占52.5%(42/80)、48.8%(39/80)、30.0%(24/80)、15.0%(12/80),两种或两种以上细菌混合感染39头,占48.8%(39/80)。通过对分离菌株进行药敏试验,猪链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌对头孢曲松、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星较为敏感,而大肠杆菌则耐药严重,部分菌株对常用药物均耐药。可见规模猪场保育仔猪细菌混合感染情况较多,且耐药性严重的大肠杆菌为常见耐药菌之一。猪场应针对具体细菌感染情况采取针对性的用药方案,方可达到用药目的。该调查为湖南规模猪场保育仔猪细菌性疾病防控及指导用药提供了参考。 相似文献