利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用

为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用。并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK× pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明, eSRK与SCR蛋白能够相互结合, 为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。     

胭脂萝卜种子纯度的RAPD检测研究

用80个随机引物对胭脂萝卜及杂株（花心萝卜和白心萝卜）的总DNA进行了RAPD分析,发现引物S50可在胭脂萝卜和杂株（花心萝卜和白心萝卜）的RAPD图谱中形成多态性差异,可用于胭脂萝卜种子的纯度检测。对1份胭脂萝卜种子进行RAPD检测,其结果与田间形态鉴定结果一致。     

甘蓝耐热性鉴定研究

】对６个甘蓝材料进行田间耐热性鉴定和叶片３５℃～５４℃高温胁迫３０ｍｉｎ后电解质渗漏量及３８℃～４７℃高温胁迫以后植株叶片丙二醛（ＭＤＡ）含量测定表明,利用电解质相对渗漏量（Ｌ）达５０％时伤害温度（ＬＴ５０）的高低,能鉴定甘蓝材料耐热性,且与材料在田间的耐热性强弱一致。而耐热性强的材料在受热胁迫后其ＭＤＡ含量较低。     

应用RAPD标记鉴定结球甘蓝品种

利用RAPD标记对17个结球甘蓝品种进行了分析.结果显示较低浓度基因组DNA、高浓度Taq酶及一致的Mg2+浓度,有利于RAPD结果的稳定.所有品种经12个引物扩增后,发现利用其中4个引物在17个品种间所扩增出的多态性标记可将全部品种鉴别.17个品种的遗传多样性分析显示,秋冬甘蓝品种内的遗传差异较春甘蓝品种内更大.因此,为保持结球甘蓝多样性,将更多的遗传资源用于春甘蓝品种选育是必要的.     

肥料组合对茎瘤芥产量和营养品质的影响

采用田间试验研究了6种肥料组合对不同采收期茎瘤芥茎叶产量、营养品质和叶片养分的影响.结果表明,不同肥料组合中2个采收期除钙镁磷氯钾处理明显降低茎瘤芥茎叶产量(22.8%～54.6%)外,其余各处理对茎瘤芥茎叶产量有明显提高作用,以专用肥I(有机无机型)对茎瘤芥茎重提高作用最大.各处理除钙镁磷氯钾对茎营养品质主要表现为提高作用,其余处理可提高氨基酸和粗蛋白含量,降低Vc、可溶性糖、磷和钾含量.专用肥Ⅰ处理的茎瘤芥茎营养品质整体上优于专用肥Ⅱ(无机型)处理.普钙硫钾与磷铵硫钾处理的Vc含量差异不明显,可溶性糖和氨基酸含量以普钙硫钾为优,但粗蛋白、磷和钾含量以磷铵硫钾处理较好;普钙硫钾与普钙氯钾处理相比,Vc含量差异不明显,前者可溶性糖和氨基酸含量较优,但粗蛋白、磷和钾含量以普钙氯钾处理较好.除钙镁磷氯钾处理外,各肥料组合处理提高茎瘤芥叶片全氮含量,降低全钾含量,提高收获期全磷含量,叶片N/P,N/K,K/P变化幅度小.     

利用酵母双杂交系统鉴定羽衣甘蓝臂重复蛋白(ARC1)与结球甘蓝S位点受体激酶(SRK)激酶结构域的相互作用

S位点受体激酶(SRK)和臂重复蛋白(ARC1)是芸薹属植物自交不亲和反应的两种重要的信号元件,SRK-ARC1之间的互作决定着自交不亲和反应的进程。本研究利用PCR技术获得结球甘蓝(Brassicaoleracea var.capitata)SRK激酶结构域(SRKJ)的编码区以及羽衣甘蓝(B.oleracea var.acephala)ARC1基因不同片段长度的基因组DNA与编码区,分别构建以pGBKT7为载体的长度依次递减的ARC1a、ARC1b、ARC1c和ARC1d的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的SRKJ的重组猎物质粒,并将重组质粒转化酵母菌株进行蛋白质相互作用检测。结果显示:羽衣甘蓝ARC1存在5个连续的臂重复区,与结球甘蓝ARC1的氨基酸序列一致性达到98%;构建的重组表达载体在酵母细胞中无毒性和自激活作用产生;3个实验组Y2HGold[pGBKT7-ARC1a]×Y187[pGADT7-SRKJ]、Y2HGold[pGBKT7-ARC1c]×Y187[pGADT7-SRKJ]和Y2HGold[pGBKT7-ARC1d]×Y187[pGADT7-SRKJ]同时激活了4种报告基因AUR1-C...     

利用Cre/lox重组系统获得烟草TA29-Barnase基因工程雄性不育恢复系

结合F1杂种的生产原理,利用Cre/lox重组系统,建立了一种完全有别于Barnase/Barstar恢复途径的基因工程雄性不育恢复系.将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarloxTABn,通过农杆菌介导的叶盘转化法将其转入Wisconsin 38烟草获得了雄性不育转基因烟草植株.雄性不育转基因植株表现花药瘦小,不饱满,花粉量明显偏少,花粉畸形、皱缩、塌陷、极少萌发,自交无法正常座果结子.TA29-Barnase雄性不育转基因植株用来自pBinCre转基因植株的花粉授粉后则能正常结果结子.分别从pBinCre转基因植株C1与转基因雄性不育植株BN1、BN6杂交后代中筛选到23株、22株Kan和PPT双抗性植株,分子检测结果显示两个杂交组合后代中凡同时含Cre基因和Bar基因的F1植株,其TA29-Barnase雄性不育基因均被删除,删除效率达到100%.F1植株中的TA29-Barnase基因被删除后,育性被恢复,能正常开花结果.     

利用Cre/lox定位重组系统获得无选择标记GFP转基因烟草

【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性,以绿色荧光蛋白GFP为目的基因,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草后获得抗除草剂Basta的GFP转基因植株。GFP转基因植株叶盘二次转化导入重组酶Cre基因后,实现与GFP基因连锁的Bar基因表达盒剔除,剔除Bar基因的植株开花后自交使重组酶Cre基因分离,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【结果】将含Bar基因表达盒以及GFP基因表达盒的植物表达载体转化烟草Wisconsin 38后获得了抗除草剂Basta以及GFP荧光表达的转基因植株。随机抽取5株转基因植株二次转化导入Cre基因,所获得的再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,绝大多数单株对应叶盘在含8 mg•L-1 PPT（phosphinothricin）的筛选培养基上无法再生死亡,删除效率在76%～100%。对Bar基因删除后区域片段进行克隆测序分析显示,Bar基因表达盒已经被精确删除。Bar基因删除植株开花后自交,获得的自交后代进行NPTⅡ抗性检测,NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有GFP基因。【结论】利用Cre/lox系统获得烟草无选择标记的转基因植物是稳定可行的,可广泛应用于其它无选择标记转基因植物的培育。     

胭脂萝卜及种子繁殖技术

胭脂萝卜为十字花科萝卜属二年生蔬菜作物，是重庆市的一个地方品种。具有成熟较早(播种至收获70～90d)，抽苔晚不易空心，收获时间弹性大；耐寒、耐热、耐贮运，抗病力强；肉质根皮紫肉红色美，组织致密，质地脆嫩，辣味小，品质好；天然红色素的含量、品质、溶解性比其它红萝卜好，色价比国家标准高10倍以上，各项理化指标均符合(萝卜红国家标准)，是提取天然红色素的好原料等特点，深受消费者喜爱。胭脂萝卜除提取天然红色素外，主要用于做泡菜、酱腌菜及筵席雕花、配色的工艺菜。