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411.
应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】丝状支原体丝状亚种SC(Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC,MmmSC)是引起牛传染性胸膜肺炎(contagious bovine pleuropneumonia,CBPP)的病原体。成熟的脂蛋白LppQ N端是亲水性的,在自然感染和人工感染时,特异性免疫反应产生早,持续时间长,抗体滴度高,因此有理由相信脂蛋白LppQ N端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。【方法】由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸(Trp),而在细菌中则为终止密码子,故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRI Ⅹ的lppQ基因进行原核表达,利用重组抗原建立间接ELISA方法。【结果】序列分析表明,将lppQ基因第198位的A成功突变为G, 并将突变后的脂蛋白LppQ N端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,构建了原核表达载体。重组菌经诱导后,表达出了分子量约为42 kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白,纯化后蛋白质纯度高达95%,Western blot结果显示,重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0.35 ?g·ml-1,包被酶标反应板,优化反应条件,P/N为4.8(0.934/0.193)。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376,敏感性为95.8%(46/48), 特异性为98.9%(161/163)。应用间接ELISA和补体结合试验(CFT)对来自3个省自治区3 817头份牛血清进行了检测。【结论】Kappa值为0.63,两种方法存在中、高度一致性。 相似文献
412.
封育和放牧对黄土高原典型草原生物量的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
摘要:采用收割法和土柱法研究封育和放牧两种方式对黄土高原典型草原地上、地下生物量的影响。结果表明,1)与放牧区相比,封育显著提高了草原植被的盖度和高度,增加了生物量(地上和地下)。2)封育区与放牧区草地地下生物量的垂直分布均呈典型的倒金字塔型或T字形的锯齿状分布。地下生物量都随土层深度增加而降低、符合指数函数减小规律。3)地下各层生物量变化幅度很大,其中0~10 cm土层与20~30、30~40、40~50 cm土层差异达到极显著(P<0.01),与放牧区相比,封育区在0~50 cm各层的地下生物量都高于放牧区。4)地下生物量/地上生物量的值偏大,与当地干旱的气候有关。由于水分条件的不同,封育区地下生物量/地上生物量的值大于放牧区。 相似文献
413.
环境雌激素作为一类内分泌干扰物进入人和动物体内后能干扰机体内分泌系统的正常功能,通过多种机制表现出拟天然雌激素或者抗天然雄激素的作用。双酚A(bisphenol A, BPA)和酞酸酯(也称作邻苯二甲酸酯,Phthalic Acid Esters, PAEs)是具有雌激素类活性的环境内分泌干扰物,广泛存在于水环境中,并对水生动物,特别是鱼类的安全造成潜在威胁。本文总结了目前BPA和PAEs对鱼类毒性效应的研究成果,特别是内分泌干扰作用和生殖毒性,为评估这两类环境污染物对鱼类的影响提供参考。 相似文献
414.
基于DNA条形码技术的轮叶黑藻害虫——小筒水螟鉴定研究 总被引:1,自引:1,他引:0
根据DNA条形码序列信息和形态特征,对某严重危害虾、蟹塘轮叶黑藻的"卷叶虫"种类进行了种属鉴定分析。COⅠ基因序列信息显示,该"卷叶虫"幼虫和飞蛾的序列一致性为100%,为同一物种,飞蛾为"卷叶虫"幼虫的成虫。经Gen Bank数据库BLAST鉴定,为Parapoynx diminutalis,中文名为小筒水螟。幼虫全身长满刚毛、具卷叶行为,飞蛾呈浅白色、长有棕色斑块,上述特征与小筒水螟一致。综合上述依据,最终鉴定该"卷叶虫"为小筒水螟。 相似文献
415.
利用自制的硝化细菌菌剂促进移动床生物膜反应器(Moving bed biofilm reactor,MBBR)的挂膜启动,分析不同载体氨氮负荷、碳氮比条件下反应器运行状况,并进一步进行了实验室模拟循环水养殖草金鱼实验。结果显示,利用自制硝化菌剂能够完成整个移动床反应器的启动过程,在接种15 d后使循环出水氨氮稳定在1 mg/L以下。单位体积载体氨氮负荷实验表明,MBBR能够在100 mg TAN/(L填料·d)条件下,使出水满足一般水产养殖水质要求(氨氮0.5 mg/L,亚硝氮0.1 mg/L)。进水碳氮比在1以内时MBBR能够稳定高效运行。在实验室模拟循环水养殖过程中,经菌剂强化的MBBR能维持循环出水氨氮低于0.5 mg/L,亚硝氮低于0.05 mg/L。 相似文献
416.
选取胎次一致、体质量接近的25日龄杜×长×大三元杂交断奶仔猪12头,随机分为对照组和粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)组。2组仔猪均先用E.coli K88攻毒3d,然后给FMT组仔猪灌服金华猪粪便菌悬液3d,对照组灌服等量无菌磷酸钾缓冲液。结果显示:外源粪菌可以改善受体仔猪肠绒毛形态及大肠杆菌引起的肠绒毛损伤,可以抑制K88攻毒引起的肠道通透性增加,提高空肠、结肠中杯状细胞数目,也可相应提高MUC2、紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin)的蛋白表达水平。结果表明:粪菌移植可缓解E.coli K88攻毒引起的肠道损伤,改善肠道黏蛋白表达,并提高紧密连接蛋白表达从而增强肠道上皮屏障功能。 相似文献
417.
牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的特性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
牛支原体(M.bvis)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病.研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用.本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌BL21 (DE3)中,通过IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,该重组蛋白大小约为36 ku,将其命名为P33.纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.重组蛋白与胎牛肺细胞(EBL)作用,通过激光共聚焦显微镜观察到了明显的粘附作用,而ELISA试验证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附,从而证明该蛋白是牛支原体的一个粘附相关蛋白. 相似文献
418.
419.
从湖羊肺脏中分离绵羊肺炎支原体的鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
从新疆湖羊肺脏病料中分离出一株支原体XJ-3f,用其培养物人工感染80日龄健康绵羊,28d后剖杀,剖检可见肺表面肉粉色实变,显微病理变化为大灶性融合性肺炎。参考国际已知支原体16SrRNA序列,设计一对扩增700bp片段的通用引物,直接提取肺脏组织DNA进行PCR扩增并克隆、测序。将该序列与GenBank中33种支原体序列比较,结果证明该序列与绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia)标准株Y.98同源性为99.9%,而与山羊支原体山羊亚种(M.capricolum subsp.capricolum,Mcc)、丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.Capri,Mmc)、丝状支原体丝状亚种LC型(M.mycoides subsp.mycoides LC,M.mmLC)等同源率为81%。以感染羊血清和Y.98与从发病羊肺脏中分离出的三株支原体茵体蛋白进行Western blot,证明均与感染羊血清有特异性反应,且与Y.98相比无明显差异,故确定分离株为绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia)。 相似文献
420.