猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析

猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株N基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株N基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%～99.8%,氨基酸同源性为96.1%～100%。TGEV-FJ株N基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Western blot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Sus scrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。     

新型鸭呼肠孤病毒σC基因原核表达及其抗原性的初步研究

应用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒σC基因,分析σC蛋白的抗原性。根据已登录的新型鸭呼肠孤病毒（NDRV） NP03株S1基因序列,针对σC基因设计并合成1对特异性引物,用RT-PCR扩增该基因,并将此片段克隆到原核表达载体 pET-30a （＋）上,将序列正确的重组质粒命名为 pET-NDRV-σC ,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,1.0 mmol·L -1 IPTG 37℃诱导表达。结果显示,RT-PCR扩增得到966 bp的目的片段;表达产物经 SDS-PAGE分析,获得了与预期相符的约41.3 ku的条带,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting 分析显示,重组蛋白能与 NDRV 阳性血清发生反应。本试验首次应用原核表达系统获得NDRV σC蛋白,并证明其具有免疫反应性。     

非洲猪瘟研究新进展

由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)导致的非洲猪瘟是猪的一种急性传染病,严重危胁全球养猪业.自1921年以来,非洲猪瘟在全球60多个国家发生、扩散、流行.并于2018年8月进入我国,快速传播并广为分布,给我国养猪业带来了巨大的灾难.为了更好地防控非洲猪瘟,本文从ASF病原学、临...     

番鸭呼肠孤病毒在番鸭体内的动态分布和排毒规律

应用RT-PCR技术检测番鸭呼肠孤病毒在人工感染番鸭体内的动态分布和排毒规律.结果显示在感染后ld可在肝、脾脏、法氏囊、胸腺和盲肠扁桃体中检出病毒RNA,表明病毒首先入侵免疫器官;随后其他器官中逐渐检测到病毒.高峰期为攻毒后7～14 d,所有器官中均能检测到病毒,此时也是病毒感染发病最严重的时间.感染后14 d,在肺和...     

二苯醚类除草剂与草甘膦的混用技术

随着免耕技术以及大田定向喷雾等技术在国内的推广,草甘膦、百草枯等灭生型除草剂由于其具有杀草谱广、防效突出的优点在国内得到广泛推广。但是随之而来的问题是：多年连续使用这些除草剂造成草相在人为压力下加速演替过程,致使多种抗性杂草的泛滥。世界十大恶性杂草之一的马齿苋与铁苋菜在连年使用草甘膦的地块已经成为优势草种。而二苯醚类除草剂普遍对马齿苋和铁苋菜都有较好的防治效果,在实践中大家开始摸索着推广草甘膦与乙羧氟草醚的混用技术。而且在实践中有人注意到一个问题,铁苋菜某些亚种使用草甘膦效果很不理想,在铁苋菜较大时单用乙羧氟草醚也难收到较好效果,但是在两者混用时却收到了较理想的防治效果。而且在荆州公安地区有人用乳氟禾草灵与草甘膦混配发现对铁苋菜（当地称”茶叶草”）效果更优。也有人认为草甘膦是内吸传导型除草剂,吸收需要一定时间,而二苯醚类除草剂如乙羧氟草醚、乳氟禾草灵、氟磺胺草醚等都是触杀作用为主的除草剂,光照下迅速起效,破坏和杀死植物组织,不利于草甘膦的吸收和传导,两者混用应当降低了草甘膦的防治效果。与实践经验相悖。我们用药时又应当何去何从呢？     

大蒜饲料添加剂

大蒜含有丰富的营养成分,又有强烈的杀菌作用,在饲料中添加少量大蒜,能提高家禽的产蛋率,预防家畜腹泻,防止反刍动物积食和膨胀病。在鸡饲料中掺入大蒜添加剂后,可改善肉用仔鸡的鸡肉风味;大蒜添加剂用于鱼饲料时,可防止鱼类遭受病害,提高生长速度;用于钓饵,能提高鱼的上钩率。下面根据国外专利资料,介绍大蒜饲料添     

贝壳粉和甲壳质饲料添加剂

贝壳和甲壳是地球上最丰富的有机资源之一。贝壳粉碎后即可用作饲料添加剂;甲壳经过酸、碱处理后提取出甲壳质,可用作含乳清饲料的添加剂,能改善动物对乳糖的消化能力。根据国外专利,下面介绍一下贝壳粉和甲壳质饲料添加剂的应用。一、蛋壳强化饲料添加剂在普通的蛋鸡饲料中大多采用石灰石作为钙质添加剂,这种石粉添加剂对于提高蛋壳强度是有效的。但是,蛋鸡摄入的钙中未被身体吸收的部分钙却会引起产蛋率下降。日本石山雅右研制的一种蛋壳强化剂可以避免上述问题。这种添加剂是由牡蛎壳粉、氨基酸、动物油脂、紫苜蓿、维生素和磷酸镁组成的。牡蛎壳粉为蛋壳提供钙源,     

微生物发酵床大栏养殖猪群管理的研究

开展微生物发酵床大栏养殖1500头猪群管理的研究.以猪日龄为核心,观察体重范围、平均体重、日增重、饲喂天数、日采食量范围、日均采食量、阶段采食量、累计采食量、料重比、累计料重比等,建立了一套猪群生长状况动态模型,包括：（1）建立了猪体重（y）与日龄（X）模型为y= 0.7589x-19.883（P^2= 0.9937）,（2）建立了猪增重（y）与日龄（x）幂指数关系模型为y= 1.0395x^0.5051（P^2= 0.8854）,（3）建立了日均采食量（y）与日龄（x）模型为y= 0.0235x-0.3343（P^2= 0.9917）,（4）建立了猪料重比（y）与日龄（x）线性关系模型为y= 0.022x ＋ 0.4278（P^2= 0.9885）等,作为理论值,判别特定日龄下猪生长状况.当猪体重、猪增重、日均采食量、猪料重比实际值低于理论值时,必须寻找原因,加强猪的管理.对微生物发酵床大栏养殖1500头猪群,60～77日龄生长阶段的日均采食量观察,可以看出在60～65日龄发酵床猪日均采食量低于理论值,表明发酵床养殖初期,猪还有个适应过程,到了70～75日龄发酵床猪日均采食量高于理论值,表明猪已适应发酵床养殖,特别在75 日龄发酵床猪日均采食量提高21%,表明发酵床养猪更加有利于猪的生长.微生物发酵床大栏养殖猪群的主要病害有：皮炎（痘状斑疹）、拉稀（消化道疾病）、咳嗽（呼吸道疾病）、僵猪（营养不良）、眼病（眼结膜炎）、外伤（拐脚）,未发现烈性传染病.从发酵床养猪发生的病害看,整体发病情况比较低,各种病害的发病率不超过10%,治疗的难度也不大,只要加强垫料管理,注意喂食,保障水质干净,许多的病害可以自愈.     

微生物发酵床大栏猪舍育肥猪群管理隔离栏结构设计

微生物发酵床育肥猪大栏养殖系统单栏同期养殖育肥猪1500头,因猪群过大,管理难度很大。由于猪个体大小、健康、抗病、竞争能力的不同,取食、饮水、运动、睡卧、争斗等行为难以观察,无法分类管理,造成小猪更弱,弱猪更不健康,病猪漏治,引起猪群体管理的缺位。作者设计了微生物发酵床大栏猪舍育肥猪群管理隔离栏结构,提出猪群渐进分栏管理方法,将微生物发酵床大栏猪舍猪群管理隔离栏分成8个区域,其中位于微生物发酵床的两侧4栏作为隔离栏,主要功能是用于隔离病、弱、小、差的猪。主体栏分割为4个渐进隔栏,分别隔离大小不同的育肥猪。在管理上,利用渐进隔栏对不同类型的猪进行分类管理,将大小相同的猪归到同一栏,将病、弱、小、差的猪归到隔离栏,动态地管理不同类型的猪。待育肥猪长至75kg左右,猪群的健康状态稳定,可以打开所有的栏门,让各栏贯通,猪群有更大的运动空间。利用这一方法,可提高病猪的治疗能力,促进弱猪的康复能力,提升同期猪群的管理水平,为微生物发酵床育肥猪大栏养殖系统健康运行提供基础。