TGEV与PEDV核衣壳蛋白双价基因原核质粒的构建与表达

运用DNA重组技术将猪传染性胃肠炎病毒核衣壳基因、猪流行性腹泻病毒核衣壳基因编码最大局部亲水性抗原决定簇基因片段进行串联,克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建预防仔猪冠状病毒性腹泻双价基因原核表达质粒.将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳结果显示,双价重组基因表达...     

应用胶乳凝集技术诊断番鸭小鹅瘟病

为建立番鸭源小鹅瘟病毒(GPV)快速检测方法,本研究采用GPV单克隆抗体(MAb)标记聚苯乙烯胶乳,建立了检测GPV抗原的胶乳凝集试验(LPA)。结果显示:LPA具有较好的敏感性,可以检出GPV最低毒价为1 000 TCI50/10μL;特异性强,仅与GPV产生特异性凝集反应,与其他相关鸭源病毒均无交叉反应;重复性和稳定性好,在4℃保存期达11个月;对人工感染病例的LPA检测结果与PCR符合率为93.3%;对临床18份疑似GPV病例进行检测,LPA和PCR符合率为94.5%。表明LPA具有简便、快速、特异、准确等优点,适用于基层快速诊断番鸭小鹅瘟病。     

番鸭小鹅瘟病直接荧光诊断试剂的研制

将抗番鸭GPV单抗腹水采用透析法标记异硫氰酸荧光素（FITC）,制备成抗GPV荧光抗体,研制检测GPV抗原的直接免疫荧光诊断方法。结果显示GPV荧光抗体仅与GPV阳性的组织切片或细胞呈现特异性荧光,与番鸭细小病毒（MPV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、鸭副粘病毒（DPMV）、鸭病毒性肝炎病毒（DHV）和正常番鸭组织切片不反应;与间接荧光方法的符合率为92．9％。表明GPV荧光抗体具有较好的特异性、敏感性和准确性,可用于临床快速诊断番鸭小鹅瘟病。     

禽新型黄病毒RT-LAMP检测方法的建立

根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立了一种适用于禽新型黄病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法。根据禽新型黄病毒E蛋白基因序列,在保守区设计了一套针对禽新型黄病毒基因8个区域的6条特异性引物,并对反应条件进行优化。结果表明该方法对NDRV、GPV、MDRV、NDV、ILTV、FPV均无扩增反应,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化观察;扩增反应只需要在常规水浴锅中进行,45min内可完成反应;该方法对禽新型黄病毒RNA的最小检测限为1pg,灵敏度是一步法RT-PCR方法的100倍。本研究建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合在基层进行禽新型黄病毒的快速检测。     

鸡黄病毒RT-PCR检测方法的建立

为建立鸡黄病毒(CFV)分子生物学检测方法,本研究以虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物EMF1/VD8作为鉴别引物,以CFV分离株CJD-05为模板,建立了检测CFV的RT-PCR方法。RT-PCR扩增产物测序结果显示,其扩增片段为708 bp,而该方法对其它禽类病毒病原核酸的扩增结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性。扩增的特异性片段与GenBank中CFV、鸭黄病毒和鹅黄病毒序列同源性达到100%、98%和99%。对参考病毒进行梯度稀释检测,该方法检测CFV的敏感度可达10-3TCID50/0.1 mL。采用所建立的RT-PCR方法对2009年福建省部分鸡场的112份临床样品进行检测,结果显示37份为CFV阳性。本研究建立的RT-PCR方法可以作为CFV在临床检测和分子流行病学调查的一种检测方法。     

铁苋菜超微粉对仔猪生长性能、血液生化指标及粪样菌群的影响

为研究铁苋菜超微粉对仔猪生长性能、血液生化指标及粪样菌群的影响,选取同一批次的28日龄健康、平均体重(10.75±0.82)kg的外三元断奶仔猪150头,随机分为5组,每组3个重复,每个重复10头,公母各半.3个铁苋菜超微粉组在基础饲粮中分别加入500 g/kg、1000 g/kg和2500 mg/kg的铁苋菜超微粉,...     

水杨酸钠对低剂量硫酸庆大霉素致聋的保护作用

目的:探讨水杨酸钠对低剂量庆大霉素造成耳毒性刺激的反应。方法:5周龄SD大鼠44只,随机分为4组。庆大霉素(GM)组:腹腔注射庆大霉素150mg/kg,1次/d;水杨酸钠(SA)组:腹腔注射水杨酸钠150mg/kg,1次/d;(GM+SA)组:同时腹腔注射庆大霉素和水杨酸钠,剂量同上。连续给药14d。在此期间,分别在第7、10、14天时间点检测受试大鼠听性脑干反应(ABR)阈值(Click),并以未进行腹腔注射给药的大鼠(0d)作为对照组。结果:GM组大鼠在第7天开始出现听力损失,第10天时出现明显的听力损失,而第14d的听力阈值较第10天时间点进一步下降,与对照组相比有统计学意义(P0.05);SA组大鼠在第7、10、14天的听力阈值与对照组无统计学意义(P0.05);GM+SA组大鼠在第7、10、14天的听力阈值与对照组无统计学意义(P0.05))。结论:腹腔注射水杨酸钠可拮抗庆大霉素的耳毒性,能够对药物性耳聋起到一定的保护性作用。     

蛋鸡混合型鸡痘的诊断与防治

2011年6月福州市罗源县某蛋鸡场蛋鸡出现产蛋下降,咳嗽、喘气,皮肤出现痘状干酪样物,喉气管有黄色干酪样物附着为主要特征的疫病。死亡率达10％。先后用强力霉素、恩诺沙星等抗生素治疗,但效果不明显。我们分别取发病蛋鸡和自然病死蛋鸡的皮肤痘状干酪样物、喉气管组织鉴定为鸡痘病毒感染,通过疫苗和药物治疗相结合控制了该病。     

MDRV和H9 AIV共感染对番鸭免疫反应的抑制作用

8日龄番鸭人工感染番鸭呼肠孤病毒（MDRV）和/或H9亚型禽流感病毒（H9AIV）,探讨病毒感染对番鸭免疫反应的影响。结果显示,H9AIV感染组番鸭发病率低（10%）,无死亡;显著抑制番鸭淋巴细胞增殖反应,抑制法氏囊和胸腺的发育,脾脏肿大,但不影响生长。MDRV单独感染番鸭发病率75%,病死率45%,对番鸭淋巴细胞增殖...     

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析

猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株N基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株N基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%～99.8%,氨基酸同源性为96.1%～100%。TGEV-FJ株N基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Western blot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Sus scrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。