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应用RT-PCR方法分段扩增DHV-NA株cDNA,并进行基因组全序列测定及同源性等分析。结果显示DHV-NA株基因组全长7 692 bp(不包括PolyA),5'和3'非编码区长度分别为626 bp和316 bp,有1个单一开放阅读框架(ORF,627~7 376 nt),编码2 249个氨基酸;与I型DHV(DHV-Ⅰ)参考株比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.3%~96.9%和97.8%~98.8%;与新型DHV(N-DHV)90D株比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为72.6%和82.3%。表明NA株与DHV-Ⅰ参考株遗传进化关系较密切,而与N-DHV遗传关系较远。 相似文献
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目的:探讨水杨酸钠对低剂量庆大霉素造成耳毒性刺激的反应。方法:5周龄SD大鼠44只,随机分为4组。庆大霉素(GM)组:腹腔注射庆大霉素150mg/kg,1次/d;水杨酸钠(SA)组:腹腔注射水杨酸钠150mg/kg,1次/d;(GM+SA)组:同时腹腔注射庆大霉素和水杨酸钠,剂量同上。连续给药14d。在此期间,分别在第7、10、14天时间点检测受试大鼠听性脑干反应(ABR)阈值(Click),并以未进行腹腔注射给药的大鼠(0d)作为对照组。结果:GM组大鼠在第7天开始出现听力损失,第10天时出现明显的听力损失,而第14d的听力阈值较第10天时间点进一步下降,与对照组相比有统计学意义(P0.05);SA组大鼠在第7、10、14天的听力阈值与对照组无统计学意义(P0.05);GM+SA组大鼠在第7、10、14天的听力阈值与对照组无统计学意义(P0.05))。结论:腹腔注射水杨酸钠可拮抗庆大霉素的耳毒性,能够对药物性耳聋起到一定的保护性作用。 相似文献
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猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株N基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株N基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%~99.8%,氨基酸同源性为96.1%~100%。TGEV-FJ株N基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Western blot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Sus scrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。 相似文献
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为建立鸡黄病毒(CFV)分子生物学检测方法,本研究以虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物EMF1/VD8作为鉴别引物,以CFV分离株CJD-05为模板,建立了检测CFV的RT-PCR方法。RT-PCR扩增产物测序结果显示,其扩增片段为708 bp,而该方法对其它禽类病毒病原核酸的扩增结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性。扩增的特异性片段与GenBank中CFV、鸭黄病毒和鹅黄病毒序列同源性达到100%、98%和99%。对参考病毒进行梯度稀释检测,该方法检测CFV的敏感度可达10-3TCID50/0.1 mL。采用所建立的RT-PCR方法对2009年福建省部分鸡场的112份临床样品进行检测,结果显示37份为CFV阳性。本研究建立的RT-PCR方法可以作为CFV在临床检测和分子流行病学调查的一种检测方法。 相似文献
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