海蜇Frizzled1基因的克隆及在无性繁殖中的表达

采用RACE技术解析了海蜇(Rhopilema esculentum)Frizzled1基因的cDNA和基因组结构:Re-Fzd1基因的全长cDNA为2387 bp,其中编码区为1761bp,编码586个氨基酸的多肽。SMART分析表明,Re-Fzd1基因具备Fzd家族共同的结构特征,包括:一个由23个氨基酸组成的信号肽,一个位于N-末端富含10个保守半胱氨酸残基的半胱氨酸富集域(CRD),一个含有7个跨膜片段的跨膜结构域,以及一个含有5个重要的磷酸化位点的C端尾巴。多序列比对表明,Re-Fzd1基因与刺胞动物贝螅(Hydra echinata)、水螅(Hydra vulgaris)、半球美螅水母(Clytia hemisphaerica)和海葵(Nematostella vectensis)Fzd1具有高度相似性,与来自脊椎动物人(Homo sapiens)、鼠(Mus musculus)、爪蟾(Xenopus laevis)和斑马鱼(Danio rerio)的Fzd1、Fzd2和Fzd7家族基因也具有较高的同源性。基于N-J法,将人、鼠、爪蟾、斑马鱼和果蝇(Drosophila melanogaster)所有Fzd家族基因系统进化分析显示,除果蝇外,所有Fzd家族成员聚类成4个类群,11个亚家族,海蜇Re-Fzd1基因首先与刺胞动物门的Fzd1聚类在一起,然后与脊椎动物Fzd1、Fzd2和Fzd7三个家族聚成一个类群,表明脊椎动物Fzd1、Fzd2和Fzd7家族可能与刺胞动物门的Fzd1起源于同一个共同祖先。Re-Fzd1基因组序列中不含有内含子。实时荧光定量PCR结果显示,Re-Fzd1基因在海蜇无性繁殖的4个发育阶段均有表达,其中,表达量最高的横裂体阶段是表达量最低的稚水母阶段的3.67倍。整体原位杂交显示,在海蜇横裂体时期,Re-Fzd1原位表达在触手、基座及发生横裂的部位。这些结果都表明,Re-Fzd1不但参与了海蜇的早期发育过程,还调控了海蜇无性繁殖的发生。     

魔芋愈伤诱导的多因子正交试验

研究花魔芋(Amorphophallus albus)愈伤组织诱导的最佳激素组合培养条件。以魔芋叶柄为外植体,采用4因素3水平正交试验研究2,4-D、NAA、6-BA与KT 4种激素对魔芋愈伤组织诱导的影响。结果表明,2,4-D、NAA、6-BA与KT对魔芋叶柄外植体膨大与愈伤组织形成具有显著效应。利于外植体膨大的最优激素组合为MS+3.0 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L NAA+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT;利于愈伤组织积累的最优激素组合为MS+1.0 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L NAA+0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT。试验优化的激素组合条件下魔芋外植体膨大与愈伤诱导有较佳的表现,可用于花魔芋的培养。     

VP2蛋白Cys-402、Cys-214对猪细小病毒VLPs影响的初步研究

试验以猪细小病毒VP2 Cys-402(A)、Cys-214(B) 定点突变体为基础,将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠,通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响,旨在寻找利于外源基因插入的病毒样颗粒内部位点.电镜和小白鼠核酸免疫试验结果表明:Cys-214对病毒样颗粒的组装和免疫原性的发挥是必需的,其突变后不能促使VP2形成病毒样颗粒,更不能在免疫后的小白鼠血清中监测出相应抗体的存在;而Cys-402的突变并不干扰病毒样颗粒的形成和免疫原性的发挥.由此可以推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点.     

猪伪狂犬病病毒gD基因的生物信息学分析

自测12条PRV不同毒株的gD全序列连同GeneBank中登录的9条gD基因全序列共21条基因序列,使用生物软件对它们的基因序列的同源性、突变区域的定位、遗传进化关系、酶切位点的差异、密码子偏爱性,氨基酸序列的同源性、蛋白质亲水性、抗原表位分析、三级结构预测等生物信息学的内容进行预测和分析.结果表明:PRV-gD基因的开放阅读框的核苷酸长度在1 197～1 215 nt之间,氨基酸长度在399～405个之间,核酸同源性在97.3%～100%之间,氨基酸的同源性在89.8%～98.8%之间,在核酸820～837位有个高变重复区,不同毒株基因均对GC极为偏爱.在遗传进化关系上将我国PRV流行分为四川、华北、东南3个区域.毒株间基因内酶切位点、蛋白质亲水性、抗原表位和蛋白质高级结构预测等内容的分析结果十分相似,说明PRV-gD基因具有很高的保守性.     

腹泻仔猪中猪圆环病毒2型的检测及生物信息学分析

为研究仔猪腹泻中猪圆环病毒2型(PCV2)的生物信息,参考Gen Bank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计并合成一对特异性引物,从四川地区猪场送检的腹泻仔猪病料中扩增PCV2全长基因序列,回收PCR产物。将其插入PMD19-T载体,构建了重组质粒,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。将测序结果及推导的氨基酸序列与国内外的不同分离株进行生物信息学分析。结果表明,分离株基因组全长为1 767 bp,分离的三株基因组与Gen Bank上已发表的PCV2分离株之间的核苷酸同源性分别为1#94.7%~89.6%、2#94.7%~89.3%、3#96.4%~86.8%,氨基酸序列同源性为1#97.9%~95.7%、2#97.1%~95.5%、3#98.4%~94.8%,说明四川地区腹泻仔猪病料中PCV2的变异相对保守。     

天然雌核发育普安鲫种质资源的保护及利用

天然雌核发育普安鲫是贵州省特有的鱼类种质资源,通过分析其种质资源现状和生物学特性,阐述了普安鲫种质资源的保护价值,保护存在的问题,保护区的规划,开发利用的措施和建议.对普安鲫种质资源的研究与应用,为普安鲫及贵州鱼类种质资源的保护和可持续利用提供借鉴.     

缺钾对黄瓜幼苗光合作用和氮素代谢的影响

本试验以黄瓜幼苗为材料,研究了缺钾对光合作用和氮素代谢的影响。结果表明,缺钾显著抑制黄瓜的净光合速率和生长及硝酸还原酶活性,随着缺钾程度的提高,铵态氮含量升高,硝态氮含量降低。     

副猪嗜血杆菌四川株的分离鉴定与耐药性分析

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,Hps）引起的猪的多发性浆膜炎和关节炎,主要临床症状为呼吸困难、咳嗽、发烧、被毛粗乱,发病后期可见关节肿大、跛行等症状;部分血清型可导致脑膜炎,引起共济失调。病理剖检可见胸膜炎、渗出性心包炎、纤维素性肺炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎,同时伴有胸腔积液、腹腔积液、关节积液等。该病于1910年由Glasser首次发现,因此又被称为猪革拉瑟病（G1asser’s disease）。     

H3N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)四川分离株(A/Swine/Sichuan/01/2006)的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET32-NS1.将该质粒转化进大肠杆菌RosettaTM,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE电泳表明融合的NS1蛋白得到了大量的表达,该融合蛋白的相对分子质量约为43 500.Western-blotting结果显示该蛋白能与阳性血清发生特异性反应具有很好的免疫反应原性.结果表明,所建立的ELISA方法与几种常见猪群传染病病原无交叉反应,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可进一步优化应用于临床SIV的检测.     

试论萧县实现棉花高产优质高效栽培的对策

本文剖析了萧县棉花生产现状及存在问题,提出了实现棉花高产优质高效的对策。