罗氏沼虾TLRs基因表达差异分析

[目的]探究罗氏沼虾Toll样受体(TLRs)基因(MrToll1、MrToll2和MrToll3)在不同组织中及感染溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)后不同时间鳃组织的表达量差异变化,为揭示罗氏沼虾TLRs在应对病害等免疫方面的表现和作用机理提供参考依据.[方法]利用实时荧光定量RT-PCR分别检测MrToll1、MrToll2和MrToll3基因在罗氏沼虾肌肉、鳃、肝胰腺、心脏、胃、肠、血淋巴、神经节、眼柄等不同组织中的相对表达量,并以同样方法检测罗氏沼虾感染溶藻弧菌后TLRs基因的相对表达量变化情况.[结果]罗氏沼虾MrToll1、MrToll2和MrToll3基因在各组织中广泛表达,但存在组织表达差异性.MrToll1和MrToll2基因在鳃组织中的相对表达量最高,分别是在肝胰腺中相对表达量的19.26和20.03倍;MrToll3基因在神经节中的相对表达量最高,是在肝胰腺中的10.13倍.感染溶藻弧菌悬液后,罗氏沼虾死亡率随时间的推移不断升高,至注射感染72 h时死亡率达峰值(64%),随后不再出现死亡.感染溶藻弧菌后罗氏沼虾MrToll1基因表达量呈先升高后下降的变化趋势,注射感染后24 h的表达量达峰值;Mrtoll2基因表达量呈下降—升高—下降—升高的波动变化趋势,注射感染后24 h的表达量达峰值;MrToll3基因表达量急剧下降,且维持在较低水平.[结论]罗氏沼虾MrToll1基因是鳃组织抵御细菌感染的主要应答基因,MrToll2基因可能参与鳃组织的其他免疫活动,MrToll3基因的调控机制尚未清晰.     

凡纳滨对虾繁育相关基因Allatostatin-AR的克隆与表达分析

咽侧体抑制素主要抑制昆虫咽侧体保幼激素的分泌,是昆虫体内重要的神经肽,在甲壳动物体内可能参与繁殖发育的调节。本研究利用RACE PCR技术对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)A型咽侧体抑制素受体(Allatostatin-A receptor,AST-AR)基因进行克隆,获得全长为2 650 bp的cDNA,包括1 425 bp的开放阅读框,1 170 bp 5''非编码区,55 bp 3''非编码区,编码474个氨基酸,形成具有7个跨膜区的不稳定亲水性蛋白。同源性和系统发育分析结果表明凡纳滨对虾AST-AR基因与斑节对虾(Penaeus monodon)、美洲龙虾(Homarus americanus)同源性最高,亲缘关系最近。氨基酸多重序列比对结果显示AST-AR氨基酸TM7后C末端精氨酸在不同物种之间高度保守。实时荧光定量PCR结果显示,AST-AR基因在雌、雄凡纳滨对虾多个组织(眼柄、脑、胃、肝胰腺、鳃、性腺、肠、肌肉)中均有表达,除脑组织外AST-AR基因在雌性凡纳滨对虾中相对表达量高于雄性。在幼体发育中,AST-AR基因的相对表达量随发育阶段上升,同时该基因在不同群体仔虾生长对比实验中表达量差异显著。据此推测AST-AR基因参与凡纳滨对虾的繁殖、幼体发育、幼虾生长到成虾,基因表达基本贯穿凡纳滨对虾的一生。     

发酵豆粕部分替代鱼粉后添加晶体赖氨酸对凡纳滨对虾肝胰腺代谢的转录调控

为研究发酵豆粕部分替代鱼粉后，饲料中赖氨酸(Lys)含量变化在凡纳滨对虾机体内的响应调控机制，在基础饲料中分别添加0%、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%的晶体赖氨酸配制5种等氮等脂的实验饲料，记为Lys0、Lys25、Lys50、Lys75和Lys100。选择初始体重为(2.0±0.1) g的凡纳滨对虾在室内水泥池中进行56 d的养殖实验。饲养结束后对生长性能、肌肉粗蛋白和脂肪含量、肝胰腺健康程度差异显著的Lys0组和Lys75组对虾肝胰腺进行了代谢组学和转录组学分析。结果显示，以Lys0作对照，Lys75组共检测出28个差异代谢物，其中有2个代谢物下调，26个代谢物上调；对注释到KEGG数据库中7种差异代谢物进行信号通路分析，筛选出4条比较重要的代谢通路，分别为甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢，花生四烯酸代谢，鞘脂类代谢和甘油磷脂代谢。Lys75组对虾肝胰腺中胆碱显著下调，γ-丁甜菜碱双加氧酶表达显著上调，己糖激酶基因和乙酰胆碱酯酶基因表达显著下调。研究表明，饲料赖氨酸水平的提高有助于对虾肝胰腺中脂肪酸的β氧化供能，起到节约蛋白质的作用，也能保护对虾肝胰腺健康，促进对虾生长...     

简易过滤装置对罗氏沼虾亲虾越冬池水质的净化作用

于1993年3－4月在南汇县东海水产养殖公司罗氏沼虾育苗厂，以自制简易循环过滤装置对罗氏沼虾亲虾池水质进行净化处理。经一个月的试验，试验池水的NH3-N、NO2-N与COD值分别为对照地的32％、33％与63％；此3种指标的去除率分别为44％－62％、58％－69％与16％－19％；碎螺狮壳、沙与石子等滤料的平均净化率为16g／m3·h，活性炭为6g／m3·h。简易过滤装置可有效地净化亲虾池水质，提高亲虾养殖密度与成活率。