杂交油菜宁杂11号种子纯度SSR标记快速检测方法(英文)

[目的]建立杂交油菜宁杂11号种子纯度SSR标记快速检测方法。[方法]本研究以杂交油菜新品种宁杂11号为研究对象,利用SSR分子标记技术建立杂交种纯度快速检测方法,同时结合田间种植鉴定作为对比验证。[结果]筛选出共显性标记引物Na10-E02,建立了杂交油菜宁杂11号种子纯度SSR标记快速检测方法:种子利用夜间萌发,碱裂解法快速提取DNA,PCR反应2 h,电泳1.5 h,简化的银染法染色10 min,从获取样品种子到出检测结果只需要不到一天的时间,一个熟练科技人员每个工作日至少可以完成6×96=576粒种子的检测量。利用这套技术对生产中大面积制种的9个样品纯度检测结果与田间种植鉴定的实际纯度结果极显著正相关,相关系数达到0.984(P0.01)。[结论]表明这套技术可以用于宁杂11号杂种纯度的快速准确鉴定。     

转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测

W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR（TAIL-PCR）扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G＋C含量为31.27％、A＋T含量为68.73％;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G＋C含量为32.6％、A＋T含量为67.4％,表明该T-DNA整合在富含AT区.序列比对结果发现,该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A.而右边界则缺失了包括RBborder在内的62个碱基.结果表明：转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无载体序列的整合.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计了2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485和405 bp的预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1％ W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达0.1％.可对W-4的转基因事件进行特异性检测.     

油菜抗除草剂性状的遗传及利用

以抗草甘膦油菜“Q3”和MICMS保持系“宁B6”、“宁B7”及恢复系“宁R1”、“宁R3”为亲本材料,配制杂交组合,研究抗性遗传。结果表明,油菜对草甘膦的抗性为显性性状,由1对基因控制,抗草甘膦基因在F_2和BC_1群体遵循孟德尔分离规律。因此,应用杂交、回交育种方法将CP_4 gox双价基因转育到油菜推广品种中是可行的。     

甘蓝型油菜品种间籽粒产量及产量性状杂种优势分析

应用双列杂交设计,研究了遗传来源不同的12个甘蓝型油菜品种间66个双列组合的单株籽粒产量及产量性状的杂种优势。分析结果,21个组合单株籽粒产量具有超高亲优势,超高亲优势率为70 24%(30 70%～218 10%)。产量性状中,8个组合千粒重表现超高亲优势(3 57%～20 48%),其中7个组合为低千粒重亲本组合;47个组合单株角果数具有超高亲优势,平均超高亲优势率为28 02%(0 93%～97 87%);13个组合的每角粒数有超高亲优势,平均超高亲优势率为11 67%。结果表明,甘蓝型油菜品种间籽粒产量超高亲杂种优势明显,可利用的杂种优势潜力较大;杂交油菜籽粒产量的杂种优势主要源自单株角果数的杂种优势,每角粒数和千粒重对籽粒产量的杂种优势贡献较小。文中讨论了甘蓝型油菜品种间杂种优势利用的可行途径。     

甘蓝型油菜无花瓣近等基因系的选育研究初报

近等基因是研究作物性状表现与功能的重要材料。利用高代群体分离法，育成了2对无花瓣油菜近等基因系，即NIL－PL01和NIL－APL01及NIL－PL02和NIL－APL02。近等基因系间除花瓣存在差异外，其它主要农艺性状基本一致，NIL－PL02和NIL－APL02具有浅紫色叶片和茎秆标记。NIL－PL01和NIL－APL01品质性状为双低，NIL－PL02和NIL－APL02为中芥高硫。利用随机引物对基因组DNA扩增结果表明，NIL-PL01和NIL－APL01之间多态性差异较小，遗传南质性达98．6％，该材料正用于筛选与花瓣性状紧密连锁的分子标记。     

甘蓝型油菜二体附加系92Ⅰ1096附加染色体的遗传研究

应用细胞学方法研究了甘蓝型油菜二体队９２Ⅰ１０９６和甘蓝型 采整倍体品种宁沿 １０号及其杂种的体细胞染色体数及花粉母细胞减数分裂过程中的染色体配对行为。结果：甘蓝型油二体附加系９２Ⅰ１０９６的体细胞染色体数稳定在２ｎ＝４０条。它与宁油１０号间的正反交杂种体细胞染色体数为２ｎ＝３９条。表明二体附加系９２Ⅰ１０９６的两条外源的同源附加染色体通过雌雄配子的传染机会相等。花粉母细胞减数分裂中期（ＭＩ）,杂     

“双低”油菜基因资源的利用及不同杂交方式的选育效果

对油菜“双低”基因资源的品质性状进行分离、提纯并鉴定其综合性状,是开展双低育种的先决条件.筛选出双低单低性状基本稳定、综合性状良好的品种或其株系,可作为基础材料加以利用.应用双复交方法有利于加速综合多种亲本的性状,增加基因互换的机率,从而提高选择效果,这是双低育种中值得采用的一种杂交方法.业已发现芥酸与硫代葡萄糖苷里彼此独立遗传.因此,应将杂种后代中出现的双低结合型、低硫中芥型及中硫低芥型株系做为选择与培育的重点,并分别采用分株自交、“半粒”测定、分株繁殖及回交等方法.进一步定向选育.     

油菜乙酰乳酸合酶突变体S638N的酶学特性及其对ALS类除草剂的抗性

在对油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因Bn ALS1R克隆与功能验证基础上,为比较抗性基因编码的乙酰乳酸合酶突变体S638N酶学特性及其对ALS类除草剂抗性与野生型的差异,构建基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达S638N和野生型的重组融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析表明,S638N和野生型均能表达出约74 k D的特异性重组蛋白。纯化目的蛋白,在不同温度和pH条件下,测定S638N和野生型的酶活性。结果显示,温度和pH对突变酶活性的影响与野生型相同,表现为先升后降,在37℃、pH 7.0条件下催化活性均最高。同时,该突变酶的酶学动力学参数Km和Vmax与野生型没有显著差异,其对3个辅助因子的响应曲线也与野生型类似,缺少其中任何一个辅助因子均使突变酶S638N基本都没有活性。然而,突变酶S638N对IMI类除草剂抗性显著高于野生型,而对Su类除草剂敏感性和野生型相同。因此,突变酶S638N具有对IMI类除草剂的专一抗性,但未改变酶学反应特征。     

甘蓝型油蔬兼用双低油菜宁油16号的选育

甘蓝型双低油菜品种宁油16号系采用品系间杂交育种选育而成，子粒芥酸含量1．32％，硫苷含量28．67μmol／g，含油率40．46％。宁油16号丰产性好、抗倒性强、耐病性强，适合于长江中下游冬油菜区种植。