应用酵母双杂交系统初步筛选IBDV VP2结合蛋白

用RT-PCR扩增VP2 cDNA并克隆入诱饵载体pSos,与鸡法氏囊cDNA文库中分离的质粒DNA共转化cdc25H,筛选阳性酵母克隆;用酵母质粒DNA转化大肠杆菌,提取质粒再分别与诱饵载体pSosVP2共转化酵母细胞,利用酵母双杂交系统对阳性克隆进行验证.对阳性克隆的插入片段进行序列分析,根据生物信息学分析结果初步确定IBDV VP2结合蛋白编码基因.结果显示,经酵母双杂交共筛选出48个候选阳性克隆,分别转化酵母菌,经酵母双杂交验证后,获得阳性克隆19个.进一步的序列分析显示,在19个插入序列中,共编码8种不同的多肽,分别是Ras超家族中的RRAS2、Rit1和N-Ras,肿瘤相关蛋白TCTP和PARP14,抗病毒Mx蛋白,LAMB3蛋白以及蛋白激酶PRKX.VP2候选结合蛋白的获得为IBDV受体、诱导细胞凋亡或逃逸宿主抗病毒机制等研究奠定了基础.     

鼠层粘蛋白α5链E3、LG4、LG5片段的克隆及表达

从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性     

非洲猪瘟病毒无标签重组B602L抗原制备与鉴定

为了获得无标签重组抗原用于非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测,本研究将B602L与类弹性蛋白多肽(ELP)基因进行融合表达,利用简单、经济的相变循环(ITC)纯化ELP-B602L融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,再用ITC回收重组B602L蛋白;用抗体阳性猪血清对重组B602L进行鉴定;以重组B602L蛋白为包被抗原进行ELISA鉴定。结果显示重组大肠杆菌能正确表达ELP-B602L融合蛋白,纯化融合蛋白纯度大于85%;TEV蛋白酶活性包涵体切除ELP标签的效率大于90%,回收的重组B602L蛋白纯度大于90%,能与抗体阳性猪血清反应;以重组B602L蛋白为包被抗原建立的ELISA与抗体阳性血清反应为阳性,与抗体阴性血清反应为阴性,OD450值与血清稀释倍数具有线性相关性。     

浅谈动物检疫工作中如何加强生产经营者的主体责任

动物及动物产品生产经营者作为动物检疫工作的行政相对人,在防控动物疫病、保障畜产品安全方面具有不可推卸的责任和义务。文章分析了当前动物检疫工作中存在的生产经营者主体责任缺失、经营责任难落实、责任追查难度大等问题,提出了建立行政相对人承诺制度、明确申报检疫主体、强化屠宰企业(场、点)主体责任、加强动物贩运人员管理、加强主体责任宣传告知等一系列建议,重点要强化生产经营者是动物及动物产品安全第一责任人的意识,正确引导其依法经营。     

一例牙鲆淋巴囊肿病例的诊断及病毒MCP基因遗传进化分析

2019年1月,山东省某牙鲆鱼场出现疑似淋巴囊肿病例。患病鱼体表长有灰白色菜花样瘤状物,死亡率超过30%,给养殖场造成了较为严重的经济损失。为确定发病原因,对该鱼场病死鱼进行了病理组织学诊断和病毒检测,并对病毒MCP基因进行了序列测定及遗传变异分析。结果显示：眼观及组织学病变符合淋巴囊肿病的病变特征;所检测到的病毒与选定的参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为78.7%~99.9%和86.8%~100%。MCP基因遗传进化分析显示,检测到的病毒与LCDV-C、JF00Kuma、JF03Yoshi、JF03GunNeA、JF、LCDV-K1等毒株同属于淋巴囊肿病毒基因II型,且与我国分离株LCDV-C有较高的同源性。经综合诊断,确定该流行病由淋巴囊肿病毒基因II型所致。该研究为该病的综合诊断及流行病学调查提供了新资料,为下一步进行该病毒相关分子生物学研究以及疫苗制备等提供了理论依据。     

兽药环境风险评估研究进展

随着畜禽集约化养殖数量增加,兽药被广泛用于治疗疾病或作为促生长剂添加到动物饲料中,中国2010-2017年兽用抗菌药的销售量从31 500 t增长到56 800 t。兽药的不合理使用、畜禽养殖过程中废弃物处理不当以及药物经过动物机体代谢后以原形药或代谢物随粪尿排出体外是兽药造成环境污染的主要原因。兽药进入环境后发生迁移转化造成了严重危害,包括抗生素耐药菌或耐药基因的产生、兽药在动植物源性食品和饮用水中的暴露间接影响人类健康、对非靶标动物的生态毒性等。作者就兽药在环境中的暴露、转归及对生态环境的主要影响进行了论述,并对药物的环境风险评估的重要性进行了阐述,针对降低兽药环境风险的措施提出了建议,以引起人们对兽药环境风险评估的关注和重视。     

30个紫花苜蓿品种对苜蓿花叶病毒病的田间抗性初步研究

为了比较不同紫花苜蓿品种对病毒病的抗性,对30个紫花苜蓿品种的病毒病发病情况进行了田间调查,利用小RNA深度测序技术结合RT-PCR技术检测鉴定各紫花苜蓿品种中的病毒种类,并测定了各紫花苜蓿品种的发病率、病情指数、相对株高、相对单株干重、相对茎秆直径、相对叶面积、相对叶长和相对叶宽,综合比较各紫花苜蓿品种的抗性,并对部分指标进行系统聚类分析。结果表明:30个紫花苜蓿品种均只受到苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)的侵染,所有紫花苜蓿品种的田间发病率均超过94%,病情指数范围为31.53～55.50;30个紫花苜蓿品种中,抗性较强的品种有1个,为射手2号,抗性一般的品种有6个,其余23个品种的抗性较差,分别占供试品种的3.33%,20.00%和76.67%;聚类分析结果表明,抗性较强的射手2号与其他紫花苜蓿品种的亲缘关系较远,与其杂交有可能产生较大的杂种优势。     

猪2型链球菌的分离鉴定及其致病性分析

为了解猪2型链球菌的致病性强弱、生长繁殖特性及耐药性变化,试验通过细菌分离鉴定、生化试验、生长曲线、OD_(600)值与其活菌数相关性曲线、药敏试验、小鼠致病性试验、病理组织学观察等方法对分离得到的猪2型链球菌进行研究。结果表明:病猪体内分离得到的链球菌经鉴定为猪2型链球菌,将其命名为TA01株;TA01株在6～8 h繁殖达到最高峰,8 h后活菌数逐渐下降;活菌数和OD_(600)值的相关性方程为y=24.659x-1.076 1,R~2=0.996 7;TA01株对青霉素、红霉素、氟苯尼考、苯唑西林敏感,对环丙沙星、多黏菌素B、克林霉素耐药;小鼠致病性试验显示,3.6×10~9cfu/只组的10只小鼠在48 h内全部死亡,且死亡小鼠呈急性脓毒败血症病变,通过Reed-Muench公式计算TA01株的LD_(50)为1.137×10~8cfu/只;病理组织学检查可观察到明显的蓝染菌团,且伴有明显的中性粒细胞浸润。说明TA01株为猪2型链球菌强毒株,与我国已分离报道的链球菌菌株相比,TA01株具有毒力强、增殖快的特性。     

消毒剂的正确应用

消毒剂的正确应用王景顺杨征刚（河北省石家庄市机械化第二养鸡场石家庄０５００６１）鸡场只有根据自己的实际情况,建立健全消毒制度,正确使用消毒剂,认真搞好消毒工作,常抓不懈,才能保持鸡群周围环境干净卫生,减少病原微生物传播,有效地控制传染病的发生,保证鸡...     

太湖白鹅球虫病并发大肠杆菌病的诊治

球虫病与大肠杆菌病都是鹅的常见疾病,两者时常并发。现将临诊病例介绍如下：1发病概况1998年春季,一养殖户的42日龄鹅群中部分鹅表现伏地、下痢、便血等症状。畜主用氯霉素拌料治疗3d后无效,病鹅数继续增多,并出现死亡。后又改用2．5％氟呢酸粉饮水治疗2d,仍未控制病情的发展。整个过程发病率约SO％,病死率约40％。2临诊症状病鹅精神萎顿,食欲减退甚至废绝,缩颈、垂翅、伏地、木能站立;粪便稀薄,颜色呈黄白色,有时有棕褐色或红色液体排出。部分病鹅甩头,并有食物从口中甩出。3病理变化对4只鹅剖检后发现,鹅体瘦弱;其中2只鹅…