不同营养和培养条件对向日葵黑茎病菌生长特性的影响

[目的]对向日葵黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi生态适应性中的营养和培养条件进行研究,以期建立常规生物学检测方法,以便采取有效检疫处理措施.[方法]不同营养和培养条件下(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照),对该菌培养7 d,测量其菌落直径大小和观察其生长状况.并用SPSS 12.0软件进行相应的计算处理、统计分析.[结果]向日葵黑茎病菌在PDA、HLA培养基上生长较好,在WA培养基上生长较慢.该病菌能充分利用可溶性淀粉和硝酸钾.在温度4-32℃均能生长,最适生长温度为24-28℃,适宜生长的PH4.0-8.0,最适PH5.0-7.0;在全光照培养条件下有助于菌丝的生长.[结论]通过不同营养和培养条件下的生长情况,可知该病菌的最适生长条件,有助于对该病菌进行有效的检疫处理.     

啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测

 近年来,四川省冕宁县大力发展樱桃产业,全县樱桃种植面积1 500 hm2,年产量已达到1 3000 t,是凉山有名的樱桃之乡。2009年开始,在部分樱桃园发现花变绿症状果树,随后发病面积逐年扩大,2011年发病面积已达总栽培面积的3%,发病果园病株率可达10%~40%,对冕宁县樱桃产业造〖HJ*2/3〗成潜在威胁。本研究针对植原体进化过程中的保守基因（16S rRNA和核糖体蛋白rp基因）,采用分子生物学方法对冕宁县采集到的表现花变绿症状的樱桃植株进行检测鉴定,以明确病原及株系的分类地位,为该病害的防治提供参考。     

两种除草剂对山东棉田杂草的药效试验

33％施田补EC和48％仲丁灵EC两种除草剂均可用于棉田杂草的防除。为验证两种除草剂对棉田阔叶杂草及莎草科杂草的防除效果,2008年对两种除草剂进行田间药效试验,结果如下。     

一种提取大豆疫霉菌菌丝体基因组DNA的新方案

大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)侵染大豆引起的大豆疫霉根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一.关于该病菌菌丝体基因组DNA的提取方法,目前国内外已经报道了很多,最常规的一种就是CTAB法,但其在提取前病原菌的培养上需要先在固体培养基上培养,然后再转至液体培养基中培养,整个过程耗时长、步骤繁琐、效率低、安全性低.试验直接以固体培养基上的菌丝体为原料,采用尿素提取液提取菌丝体基因组DNA的方法,耗时短,步骤简捷,提高了效率和安全性.     

实时荧光PCR检测瓜类蔓枯病菌的方法研究

[目的]建立瓜蔓枯病菌(Didy mella bryoniae)的实时荧光PCR方法,为瓜蔓枯病菌快速分子检测奠定基础.[方法]通过Genebank网上已公布序列,选取瓜蔓枯病菌beta-tubulin(tub2)基因作为目的基因,设计了特异性引物和Taq Man探针,并对该引物和探针的反应条件进行优化.[结果]采用研究所设计的引物和探针对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测,该引物和探针可高度灵敏地检测到瓜蔓枯病菌.采用实时荧光PCR方法,25μL体系中只要有8.9 pg的核酸量就可以被检测到,检测灵敏度达到356 fg/μL,比普通PCR灵敏度高10倍.[结论]采用研究所设计的引物和探针对田间采集的病株和未知样品的检测,验证了引物和Taq Man探针的特异性.     

菠菜霜霉病菌快速分子检测方法研究

[目的]菠菜霜霉病,由专性寄生病原菌Peronospora farinosa,sp.Spinaciae引起,是世界上菠菜Spinacia oleracea种植中最为重要的经济型病害.建立菠菜霜霉病菌快速分子检测方法.[方法]将菠菜霜霉病菌进行显微镜的形态鉴定;提取DNA、PCR扩增、克隆、酶切、测序、序列比对与分析;采用巢式PCR技术检测菠菜霜霉病:第一轮采用通用引物ITS1/ITS4,第二轮采用特异性引物SMPF/SMPR.[结果]该菌与霜霉属的形态特征描述一致,确定菠菜患有霜霉病;测序结果经Blast比对分析与Peronospora effusa同源性达100;;巢式PCR技术也特异性的检测到了菠菜霜霉病菌.[结论]建立针对菠菜霜霉病的快速分子检测技术.     

基于线粒体DNA cox2基因的甜菜霜霉病的分子检测技术

[目的]建立甜菜霜霉病菌检测技术.[方法]利用等位基因特异性PCR(AS-PCR)的原理,依据线粒体DNA(mtDNA)基因cytochrome coxidase subunit Ⅱ(cox2),运用卵菌门通用引物(P-COX2F/P-COX2R)扩增甜菜霜霉病菌及6种对照霜霉病菌的目的片段,测序,比对,根据等位基因特异PCR(AS-PCR)原理设计测甜菜霜霉病菌的特异性引物,并对该引物的特异性、灵敏度加以验证;分析同源性,构建系统发育树.[结果]通用引物扩增的甜菜霜霉病菌以及其他霜霉病菌片段大小约为630 bp,经比对,该霜霉病菌与Peronospora schachtii同源性达99;,并设计出特异性引物BSP-F/BSP-R,特异性引物BSP-F/BSP-R可以检测到10-2ng/μL的模板浓度.[结论]建立的甜菜霜霉病菌快速检测技术,为口岸的进出境监测与检测提供了科学依据.     

葡萄金黄化植原体16SrDNA检测与RFLP分析

[目的]对多种植原体16SrDNA基因序列进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析比较,以期区分葡萄金黄化植原体不同亚种,从而为葡萄金黄化植原体的鉴定提供新依据.[方法]用植原体通用引物R16mF2/R16mR1扩增7种不同植原体16SrDNA基因序列,得到约1.5 kb的DNA片段,将此片段克隆到PGM-T载体,并通过酶切鉴定,对重组阳性克隆进行核酸序列测定及同源性分析,利用限制性内切酶XmnⅠ、XspⅠ、TaqⅠ和Rsa Ⅰ对目的片段进行酶切电泳分析.[结果]所扩增2个不同亚种的葡萄金黄化植原体D型和C型序列同源性最高,达99.72;,但利用限制性内切酶可以将上述2个亚种从植原体榆树黄化组中区分.[结论]利用限制性内切酶分析通用引物R16mF2/R16mR1所扩增的基因片段,可以将葡萄金黄化植原体区分.     

大蒜内参基因筛选及AsACO基因对盐胁迫和促生菌的响应分析

【目的】筛选大蒜在盐胁迫下的稳定内参基因,并分析1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因（AsACO）对盐胁迫和促生菌的响应表达特性,为深入探究促生菌的促生机制及大蒜对盐胁迫的响应机制研究提供理论参考。【方法】以乐都紫皮大蒜为试材,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测5个内参基因ACT、UBC、HIS3、18S rRNA、TUB在盐胁迫下的表达稳定性,结合GeNorm、NormFinder和BestKeeper筛选出最稳定的内参基因,并分析恶臭假单胞菌UW4对盐胁迫下AsACO基因表达的影响。【结果】 5个候选内参基因引物的特异性强、无引物二聚体。GeNorm分析得出候选内参基因稳定性排名为18S rRNA=TUB>HIS3>UBC>ACT,NormFinder分析得出内参基因稳定性排名为18S rRNA>HIS3>TUB>UBC>ACT,BestKeeper分析得出内参基因稳定性排名为UBC>HIS3>18S rRNA>TUB>ACT,最终以几何平均数综合分析得出18S rRNA为最稳定的内参基因。以18S rRNA为内参基因,检测出AsACO基因表达具有明显的组织特异性,在叶片中的相对表达量明显高于根。整个处理过程中,盐胁迫明显诱导AsACO基因在不同处理时间及不同组织中表达上调,根和叶片中AsACO基因的相对表达量分别在2 d和12 h时达最高,较正常培养（CK）分别显著升高124.43%和238.34%（P<0.05,下同）,与盐胁迫处理相比,盐胁迫+浇施恶臭假单胞菌UW4处理显著降低AsACO基因在不同处理时间根和叶片中的相对表达量,其中在2 d和12 h时降幅较大,分别降低了112.08%和343.34%。【结论】18S rRNA是盐胁迫下大蒜中最稳定的内参基因。盐胁迫可诱导大蒜根和叶片中AsACO基因的上调表达,从而间接促进ACO和乙烯水平升高,加速由乙烯调控的细胞衰老,甚至死亡,但盐胁迫下恶臭假单胞UW4具有抑制AsACO基因表达的作用,以减少ACO和乙烯的合成,从而延缓大蒜细胞衰老,提高逆境耐受性。     

猪链球菌病和弓形体病混合感染的诊断报告

<正> 1987年7月25日,贛州市水西乡养猪专业户王站疗家中21头小猪全部发病,以发热、呼吸困难和败血症为特征。经临床观察和实验室诊断,确诊为猪链球菌病和弓形体病混合感染。