出口果园中香梨黑斑病疫情监测及发生规律研究

[目的]对库尔勒地区出口果园中香梨黑斑病菌(Alternaria alternate)分生孢子和病害发生情况进行监测,明确该病害在香梨生长期间的发病规律.[方法]香梨生长季节,在出口果园放置真菌孢子捕捉器,捕捉A.alternate的分生孢子,同时采集花和果实,进行镜检、分离培养和PCR检测鉴定.结合当地气象因子及香梨黑斑病菌监测和病原菌鉴定结果,探索该病害的发生规律.[结果]果园中A.alternate分生孢子的数量变化有较明显的规律性;花期病菌孢子数量较少,从果实膨大期至果实成熟期,病菌孢子数量增速较快,果实采摘期病菌孢子量达到最大.果园病菌孢子量的多少与温湿度有关,气温在28℃左右以及相对湿度在60;左右时病菌孢子数量达到最大.A.alternate从花期开始侵染香梨,在果实生长期至成熟期繁殖扩散.从结果期开始发病,并逐渐严重,果实采摘期发病最重.[结论]通过在出口果园不同时期捕捉A.alternate孢子,并对花和果实中的该病菌进行检测,查明了该病菌分生孢子在果园中的消长过程,明确了病害发生期和发病严重度与果园孢子量和气象因素等之间的关系,掌握了香梨黑斑病在当地的发生规律.     

新疆加工型辣椒一种新的细菌性叶斑病病原的鉴定

2014—2015年在新疆沙湾县加工型辣椒Capsicum annuumL.上发现一种细菌性叶斑病。为明确其病原种类,采用组织分离法分离病原菌,依据柯赫氏法则进行致病性测定,并对菌株进行16S rDNA和持家基因rpoD及gry B的扩增、序列测定和系统发育分析,对其进行鉴定。结果表明,获得的8个细菌菌株间致病力无明显差异。致病细菌与已报道的黄褐假单胞菌Pseudomonas fulva菌株的16S rDNA、rpoD基因、gry B基因的同源性分别达到了99.1%~99.9%、99.4%~99.5%和97.6%~100.0%。结合革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、生理生化反应、寄主范围等特征,将病原菌鉴定为黄褐假单胞菌。该病原菌通过人工接种还能侵染番茄、茄子、马铃薯、黄瓜、西瓜、甜瓜、四季豆、豆角、豇豆、白菜、萝卜、胡萝卜及芹菜等多种植物。     

基于DPO引物的SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测葡萄卷叶伴随病毒3号

葡萄卷叶病是葡萄上一种重要的病毒病,在国内分布较为普遍,引起该病的葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)是由多种病毒单独或复合侵染造成.已报道的GLRaVs至少有5种,其中GLRaV-3是葡萄卷叶病毒属Ampleovirus典型成员(Ling et a1.,2004).目前,检测GL-RaV-3的方法主要有指示植物法、酶联免疫吸附法、分子生物学检测法等,而这几种技术均存在不足.SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR技术关键要避免引物之间、引物与其它模板之间的非特异性互作干扰.由于DPO引物自身以及引物之间很少形成二级结构且对退火温度不敏感等特点(Chun et al.,2007),因此,本研究结合SYBR Green和DPO引物的各自优点,建立一种特异性强、灵敏度高的GL-RaV-3检测方法,以期为葡萄卷叶病毒的快速检测及预防提供技术支持.     

新疆加工型辣椒细菌性斑点病的发生和病原鉴定

 新疆加工型辣椒主要产区巴音郭楞蒙古自治州发生了一种严重危害辣椒的细菌性病害。从发病辣椒叶片中分离细菌,通过烟草过敏性反应、马铃薯软腐试验和接种辣椒等致病性测定,确定了13个致病菌株,各菌株之间致病力无明显差异。通过菌体形态、培养性状观察、生理生化反应、寄主范围测定,结合16S rDNA和rpoD基因扩增、序列测定和系统发育分析,将病原菌鉴定为丁香假单胞菌丁香致病变种(Pseudomonas syringae pv. syringae)。病原菌人工接种还能侵染番茄、茄子、马铃薯及黄瓜、四季豆、白菜、萝卜、芹菜等植物。P. syringae pv. syringae引起加工型辣椒细菌性斑点病在国内属首次报道。     

西瓜细菌性果斑病菌Taq Man探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

根据西瓜细菌性果斑病菌（Acidovorax avenae subsp．citrulli）与相关细菌16SrDNA序列差异，设计出对西瓜细菌性果斑病菌具有稳定点突变特异性探针Aac—probe，利用该探针对23种供试菌株进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明，只有西瓜细菌性果斑病菌能检测到荧光增强信号，其它细菌无荧光增强信号。该方法特异性强，灵敏度高，重复性好，可有效地应用于西瓜细菌性果斑病菌的检测。     

不同营养和培养条件对向日葵茎溃疡病菌生长特性的影响

[目的]研究向日葵茎溃疡病菌(Phomopsis helianthi)生态适应性中的营养和培养条件,以期建立常规生物学检测方法,以便有效采取检疫处理措施.[方法]不同营养和培养条件下(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度和光照),对该菌培养7d,测量其菌落直径大小和观察其生长状况.并用SPSS 12.0软件进行相应的计算处理、统计分析.[结果]向日葵茎溃疡病菌在PDA、CMA培养基上生长较好,在改良的查彼培养基和WA培养基上生长较慢.该病菌能充分利用酵母膏和硝酸钾.在6～34℃均能生长,最适生长温度为23～26℃.适宜生长pH 3.0～12.0,最适pH 5.0～10.0.在全光照培养条件下有助于菌丝的生长.[结论]通过不同营养和培养条件下的生长情况,可知该病菌的最适生长条件,有助于对该病菌进行有效的检疫处理.     

袖珍西瓜栽培技术

袖珍西瓜是普通食用西瓜中果形较小的一类，在保温性能较好的日光温室进行秋冬季栽培，“两节”前后上市销售，经济效益较为可观。2004年乐都县进行设施栽培试种，取得了成功。     

中国北方番茄细菌性溃疡病菌的rep-PCR基因指纹图谱分析

对来自全国若干省市的番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)的33个菌株进行rep-PCR分析。结果表明,用引物BOX分别扩增出6～15条多态性条带,条带大多数集中在500～2800bp之间;用引物ERIC扩增的条带不清晰,可能是反应条件不适合,也可能是其不适合对番茄细菌性溃疡病菌进行多态性分析;BOX-PCR表明番茄细菌性溃疡病菌菌株具有丰富的遗传多态性和较大的遗传变异,对产生的指纹图谱进行分析:在遗传距离为0.18时,测试的33个菌株可划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ等7个遗传相似组群,其中Ⅵ组群包含的菌株最多。研究还表明番茄细菌性溃疡病菌的遗传分群与菌株的地理来源关系密切,但与该病的发病年份上没有必然联系,这也从另一侧面说明了该病害是土壤带菌引起的。     

李属坏死环斑病毒新疆分离物运动蛋白基因片段的克隆与序列分析

为进一步揭示李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)新疆巴旦木分离物的分子特征、遗传变异及其与宿主之间的相互关系,采用RT-PCR方法扩增并克隆了4个PNRSV新疆巴旦木分离物运动蛋白(move protein,MP)基因片段,并进行了测序及序列同源性分析。结果表明,4个新疆巴旦木PNRSV分离物MP基因片段分别为259、258、254、260 bp;其核苷酸和氨基酸序列与已报道的PNRSV分离物的同源性分别为72.7%~91.7%和75.6%~92.9%,表现出明显差异,其中与美国分离物CH9同源性最高,分别达88.8%~91.7%和82.6%~92.9%;而与同属03亚组的苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,Ap MV)同源性较低,仅为51.2%~58.1%和52.3%~61.9%;新疆PNRSV各分离株之间MP基因核苷酸序列同源性较高。系统发育树显示,4个新疆巴旦木PNRSV分离物与Ⅰ组代表毒株PV32的核苷酸序列同源性达88.4%~91.3%,并与Ⅰ组分离物聚集成簇,表明PNRSV新疆巴旦木分离物属于引起严重症状的Ⅰ组株系,且Ⅰ组中各分离物之间表现出一定的寄主相关性,而Ⅱ组和Ⅲ组中各分离物之间未表现出明显的寄主相关性。     

香梨黑斑病菌在不同培养条件下生长特性的研究

[目的]对不同培养条件下香梨黑斑病菌(Alternaria alternata)的生长特性进行研究,以期明确该病菌的生物学特性.[方法]在不同培养条件(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照条件)下,培养香梨黑斑病菌7d,测量其菌落直径大小,观察其菌丝及分生孢子生长状况,用SPSS 18.0软件对相关数据进行统计分析.[结果]香梨黑斑病菌在PSA、PCA培养基上生长较好,在理查氏培养基上生长较慢.最佳碳源为可溶性淀粉和蔗糖;能够充分利用蛋白胨;在15～ 35℃温度范围内均能生长,最适生长温度为25～ 30℃.在pH为4.5～9.0之间均生长,最适pH5.0～8.0.在全光照培养条件下有利于菌丝的生长,在全黑暗条件下,有利于分生孢子的产生.[结论]通过研究该病菌在不同培养条件下的生长情况,明确了该病菌的最适生长条件,为建立该病菌常规生物学检测方法提供理论依据.