体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究

为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89 kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。     

稀释液中加入低密度脂蛋白对牛冷冻精液的影响

研究在传统稀释液的基础上,探索分析鸽蛋中提取的低密度脂蛋白(LDL)对牛精液的冷冻效果,以冻后精子活力、活率、顶体完整性、质膜完整性等作为质量评定指标,同时分析比较低密度脂蛋白、法国OptidylTM稀释液冻后精子参数,为牛冻精的基础研究提供理论依据,对生产中进一步提高牛冻精质量具有重要的指导作用. 1材料与方法 1.1LDL的提取     

海带多糖和红景天多糖对猪精子冷冻效果的影响

试验将不同浓度海带多糖和红景天多糖添加到猪精液稀释液中,探讨其对猪精液冷冻效果的影响,现报道如下.     

崇明白山羊血清生化指标的检测与分析

在相同饲养条件下,采用颈静脉采血方法研究了不同性别和生理阶段健康崇明白山羊的血清生化指标。结果表明:妊娠母羊的ALB、DBIL和UREA值最高,与其他6组羊差异显著;妊娠母羊的CHE和TP值最高,与成年母羊无显著差异,与其他5组羊差异显著;妊娠母羊的ALP最低,与哺乳母羊无显著差异,与其他5组羊差异显著;成年公羊、成年母羊和妊娠母羊的GGT、HBDH、LDH和Ca值较高,与其他4组羊差异显著;成年公羊的AST和ALT值最高,与成年母羊和妊娠母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;公羊的CK值高于母羊,且成年公羊与其他6组羊均无显著差异;成年母羊的AMY值最高,与成年公羊和妊娠母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;后备母羊的GLU值最低,与断奶小母羊和哺乳母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;后备母羊的CHOL值最低,与成年公羊和哺乳母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;成年公羊的TG值最高,与其他6组羊差异显著;后备母羊的Mg值最低,与其他6组羊差异显著;后备母羊的Fe和P值最低,与哺乳母羊无显著差异,与其他5组羊差异显著。该研究可为崇明白山羊饲养管理和疾病诊断提供参考。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

猪精液冷冻保存试验效果初报

六种常温保存液对猪精液进行预处理后,再利用三种冷冻液进行冷冻保存试验,研究常温保存液和冷冻液对猪精液冷冻保存的影响及它们之间的配合效应,以冷冻-解冻后精子活力作为评定标准。结果表明:六种常温保存液对冻后精子的影响存在显著差异(P=0.003);三种冷冻保护液对冻后精子活力的影响无明显差异(P=0.585),但与常温保存液之间表现出明显的配合效应(P=0.0001),可能与常温保存液和冷冻液的成分及它们之间的相互关系有关。试验说明所选用的三种冷冻基础液对精子活力的影响不大,但与常温保存液配合后却能表现出很强的影响力;就单独分析两种因素对精子活力影响而言,常温保存液的预处理占主导地位。     

高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响

为探究高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响，本试验采集5头健康状态良好的杜洛克公猪精液，以普通鸡蛋卵黄+Tris-柠檬酸-葡萄糖（TCG）冷冻基础稀释液为对照组，以添加高压均质处理的鸡蛋卵黄+Tris-柠檬酸-葡萄糖（TCG）冷冻基础稀释液为试验组；精液冷冻-解冻后观察精子活力、DNA完整性、线粒体膜电位变化、细胞凋亡率、多种Caspase活性；同时利用qRT-PCR检测相关凋亡功能基因的mRNA表达水平，并进行数据统计。结果表明，经高压均质处理后，猪精子冻后活力、活率和顶体完整率显著高于对照组（P<0.05），为87.64%、87.14%和66.61%，较对照组分别提高了12.58%、5.82%和12.48%；线粒体膜电位和DNA完整率显著高于对照组（P<0.05），为0.74和61.76%；精子凋亡水平显著减少（P<0.05），为37.74%；试验组的Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性为17.15、11.19和15.18，较对照组分别减少了6.17、2.18和3.51（P<0.05）；对照组的Bax、TNF-α、Caspase-9基因表达均明显高于试验组（P<0.05），Bcl-2基因表达量较试验组降低（P>0.05）。综上，高压均质鸡蛋卵黄能提高猪精子冻后质量，促进线粒体功能完整性、降低精子细胞早期凋亡水平和细胞内Caspase活性，同时降低凋亡相关基因mRNA表达量。     

3种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞线粒体分布和损伤的影响

本研究旨在探讨3种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻后线粒体的分布和超微结构变化的影响.通过透射电镜、Rhodamine-123 (R-123)荧光染色和体外发育观察,结果显示,(1)无论是FDA-DAPI复染存活率,还是孤雌激活卵裂率,CLV (Cryoloop vitrification)法(72.00%,7.22％)效果最好,OPS(Open Pulled Straw)法(60.00％,4.85％)次之,straw法(42.22％,0％)最低；(2)CLV法经R-123染色后,卵母细胞线粒体的正常分布率(52.24％)要比其它2组要高(OPS,48.65％；straw,37.68%),但三者之间没有显著差异(P＞0.05)；(3)透射电镜超微结构表明,冻后卵母细胞线粒体变得粗糙和模糊,有的线粒体嵴减少甚至消失.结果表明,冷冻过程中卵母细胞线粒体的分布和形态损伤严重,CLV法可提高冷冻速率,增强冻后卵母细胞的发育能力,降低冷冻造成的卵母细胞线粒体异常分布比例.     

毛喉素对猪卵母细胞降脂及冷冻保护效果研究

猪卵母细胞脂质含量高被认为是其冷冻效率低下的重要因素之一。本文通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加化学降脂剂毛喉素(forskolin),检测冷冻前后成熟卵母细胞的脂滴含量、脂滴超微结构、线粒体膜电位、活性氧水平、早期凋亡指标、冻后存活率及发育潜能变化等,研究其对猪卵母细胞降脂和冷冻保护的效果。结果显示,成熟过程中毛喉素处理可部分提高卵母细胞成熟率,但差异不显著(P>0.05)。尼罗红荧光染色显示,毛喉素处理后卵母细胞内脂滴数量及面积在冷冻前后均极显著低于未处理组(P<0.01);超微结构观察发现,经毛喉素处理的卵母细胞中非均质脂滴数量与均质脂滴数量的比例扩大,且比均质脂滴面积更大;冷冻后,卵母细胞中以非均质脂滴为主,脂滴变小变少,分布不均匀,毛喉素处理后非均质与均质间的脂滴数量比例进一步增加。毛喉素处理极显著上调冻后卵母细胞线粒体膜电位(1.04 vs. 0.51,P<0.01),减轻氧化应激,降低早期凋亡率(68.30%vs. 86.03%,P<0.01),从而有效提高了冷冻后卵母细胞的存活率(71.17%vs. 51.47%,P<0.01)和孤雌激活卵...     

成年克隆猪肺脏差异蛋白的鉴定与功能分析

分别采集成年克隆猪和正常繁殖猪(对照)的肺脏样品,利用双向电泳-质谱体系和Western blot方法的比较蛋白质组学技术对其蛋白进行分离、鉴定和验证,并结合生物信息学手段对相关差异蛋白进行功能分析,研究体细胞核移植(即克隆)操作在蛋白质水平上对克隆猪肺脏发育的影响。结果表明:体细胞核移植操作对克隆猪肺脏的发育有较大影响。与对照猪相比,克隆猪肺脏蛋白共有26个差异蛋白,其中半胱天冬酶凋亡前衔接蛋白、增殖细胞核抗原和核糖-5-磷酸异构酶等22个为上调蛋白,纤维蛋白原γ链、纤维蛋白原β链和血红蛋白α亚基等4个为下调蛋白,主要涉及抗氧化活性、翻译调节和催化活性等重要功能。