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为研究牛支原体(M. bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M. bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基因,在完成测序后构建NOX-1基因原核表达载体pET-NOX-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达。表达产物纯化后进行酶活测定并免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,继而应用Western blot及间接ELISA对NOX-1在M. bovis内的分布进行初步定位。结果显示,M. bovis临洮株NOX-1基因全长1365 bp,重组质粒经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白His-NOX-1的分子量约为50 kDa;重组蛋白酶促反应最适酶促温度为30℃、pH为7.5,双倒数法求得重组蛋白Km和Vmax分别为256.41μmol/L、34.25μmol/(L·min);Western blot及间接ELISA结果表明His-NOX-1在M. bovis细胞膜上和细胞浆中均有分布且胞浆含量较高。本研究结果为进一步研究M. bovisNOX-1的生物学功能奠定了一定的基础。 相似文献
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关于生态林经营管理的思考 总被引:2,自引:0,他引:2
在分析当前生态林经营面临的问题和困难的基础上,从生态林经营的管理体制、组织形式、经营方式、配套政策等方面提出改革建议。 相似文献
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目的:评估广东省临床实验室实施尿液沉渣分析检查规范化工作情况。方法:对广东省内365间临床实验室进行问卷调查,分析各实验室对5个浓度尿液质控品的测定结果。结果:(1)广东省县级以上医院有74.8%仍用普通玻片(或加盖玻片)直接镜检进行尿液沉渣分析检查,只有25.2%的医院采用商品化尿液沉渣检测系统。(2)被调查的实验室在尿液沉渣分析检查的日常工作中符合我国血液学和体液学专家委员会公布《尿液沉渣检查标准化的建议》只占27.9%,不符合占72.1%。(3)全省临床医学实验室对5个浓度尿液质控品的实验室间测定结果非常离散,CV达92%~200%。结论:广东省临床实验室开展尿液沉渣分析检查规范化工作仍然十分不足。商品化尿液沉渣检测系统有助于标准化尿液沉渣显微镜分析,但不同系统的结果差异仍然较大。 相似文献
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