重组产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达与免疫保护力评价

为获得产气荚膜梭菌α毒素(CPA)的重组突变体,并评价其毒力和免疫原性,对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56位和第130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变。此外,在该基因5'端添加Th细胞表位(T)和鞭毛蛋白(flagellin)N末端编码序列,经人工合成获得基因片段GTFNCPAm4。将GTFNCPAm4克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rTF_NCPA_(m4)。利用Western blot方法检测rTF_NCPA_(m4)与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清的反应性,并检测该蛋白的卵磷脂酶和溶血活性以及对小鼠的毒力。随后,将重组蛋白与Montanide ISA 201佐剂以1∶1(V/V)的比例混合乳化,免疫家兔,检测兔血清的中和抗体效价。二免后21 d,对家兔通过耳缘静脉注射1个MLD剂量的A型产气荚膜梭菌毒素,以检测rTF_NCPA_(m4)对家兔的免疫保护效果。结果表明,rTF_NCPA_(m4)主要以包涵体的形式表达,且能与A型产气荚膜梭菌毒素产生血清反应;体外实验显示,rTF_NCPA_(m4)无卵磷脂酶和溶血活性;小鼠安全性实验显示,5.5 mg/kg剂量的rTF_NCPA_(m4)对小鼠无致死性;免疫重组蛋白后,每毫升的一免抗血清可中和10个MLD、二免抗血清可中和40个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔得到了100%(4/4)的保护。以上数据说明,表达的CPA重组突变体蛋白具有良好的安全性和免疫原性,为A型产气荚膜梭菌基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的实验数据。     

山羊痘病毒检测方法研究进展

就山羊痘病毒分离鉴定、电镜观察、ELISA试验、琼脂扩散试验、免疫荧光抗体试验、PCR试验等检测方法进行了综述,以期为山羊痘病毒的实验室诊断提供参考。     

风水学在园林景观中的运用

通过阐述园林建设中的风水学,分析了风水学在园林景观中的运用,提升园林景观设计效果。     

兽用生物制品菌(毒)种及种子批的释义

对兽用生物制品的生产用菌(毒)种、种子批的概念进行了诠释,以期为兽用生物制品生产企业建立完善的菌(毒)种种子批管理制度,建立种子批系统提供明晰的思路。     

蔬菜保护地土壤存在的问题及其应对措施

近年来随着辽宁省绥中县保护地蔬菜的迅速发展，保护地土壤障害问题日益突出，直接影响着蔬菜的产量与品质。笔者现结合调查情况，谈一谈保护地土壤存在的主要问题及其应对措施。     

鸭瘟灭活疫苗效力试验和安全试验

将已建立的鸭瘟病毒(DPV)AV1221株基础种毒经鸭胚繁殖、收集胚液病毒、0.2%甲醛溶液灭活后,与矿物油佐剂乳化制备了3批鸭瘟灭活疫苗.成鸭的免疫攻毒测定,疫苗最小免疫剂量为0.12 mL,确定使用剂量为每羽份0.5 mL.单剂量、单剂量重复和超剂量安全试验结果显示,疫苗不引起产蛋鸭的全身不良反应和明显的局部反应.疫苗的免疫攻毒试验结果表明,疫苗在不同品种的成鸭中,使用不同的免疫途径,均能诱导产生80%以上保护;在雏鸭中,经二次免疫也能够诱导产生80%以上保护.疫苗一次免疫鸭后,不同时间诱导产生的中和抗体滴度(GMT)分别是,7 d为1:3.2、10 d为1:4.6、14 d为1:8,21 d、30 d和60 d均为1:7;免后10 d可以产生80%攻毒保护,14 d和21 d可产生完全保护.疫苗的免疫持续期试验结果表明,成鸭经1次免疫后150 d,雏鸭经二次免疫后60 d均可维持80%以上保护.     

了解“免责”条款 减少车险纠纷

有的车主认为：投保容易理赔难、购买保险不划算。如果持有这种观点，将不利于机动车第三者责任强制保险的施行，也不利于农机安全生产长效机制的建立。分析其中原因，主要是一部分车主不了解机动车辆保险（以下简称“车险”）的“免责条款”，错误地认为购买了保险就要“包赔”，以致于发生了不少保险合同纠纷。     

马铃薯三膜覆盖栽培要点

马铃薯三膜覆盖(即采用地膜、小拱棚、大拱棚三层覆盖)大垄双行栽培是一种新型高产栽培模式,产品可比双膜覆盖栽培的提早上市7～10天,经济效益较好.     

河南猪隐孢子虫病流行病学调查及动物感染试验

为了掌握河南猪隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染情况,用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查了郑州、许昌、漯河和禹州等地市6个猪场共417份粪样,并进行了固始品种雏鸡和昆明系小白鼠和长大二元杂交仔猪的动物感染试验.结果表明,根据形态大小初步鉴定为小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum),平均感染率为10.95%,20日龄以前的仔猪未感染,21~40日龄的的仔猪感染率为12.20%,41~60日龄的仔猪感染率为21.19%;猪源隐孢子虫分离株(sucp)不感染5日龄固始品种雏鸡和18日龄正常的昆明系小白鼠,但是能感染免疫抑制小白鼠,对4日龄仔猪有较强的致病性,并且出现严重的拉稀、脱水等症状.组织切片用H.E染色观察结果显示,sucp株寄生在小白鼠的十二指肠、空肠和回肠以及仔猪的盲肠、结肠和直肠.     

林业种植技术在森林防火工作中的思考与建议

近年来,我国森林防火面临的形势愈发严峻,为了有效做好森林防火,本文结合对当前森林防火形势的研究,从林业种植技术的角度展开思考,并提出森林防火工作开展的建议.