东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化

目的:确定毕赤酵母表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST基因的最佳诱导表达条件。方法:本研究将PCR合成的dybowskin-1ST基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-dybowskin-1ST诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,应用BMMY培养基诱导表达。采用单一变量法及正交试验法,对甲醇诱导的浓度、时间和温度进行了优化,通过SDS-PAGE电泳分析和体外抑菌试验检测目的肽表达丰度。结果:最佳诱导条件:甲醇终浓度为0.5%、诱导时间为72 h、诱导温度为28℃,在此条件下表达产物SDS-PAGE电泳条带灰度值为117,抑菌环直径为28.16mm,可为规模化的抗菌肽表达提供参考数据。     

丹顶鹤源大肠杆菌耐药性的检测与分析

对扎龙自然保护区丹顶鹤源大肠杆菌进行分离培养,开展大肠杆菌耐药性调查。采用纸片扩散法测定各分离菌株对17种抗微生物药的敏感性。结果表明:丹顶鹤源大肠杆菌分离株对各抗微生物药的敏感性不同。受试菌株对氨苄西林、头孢噻吩的耐药率分别为57.5%、47.5%,对氟苯尼考、氨曲南、阿莫西林/棒酸均敏感。     

钙依赖性蛋白激酶34在小麦籽粒淀粉合成的功能

钙依赖性蛋白激酶在调控植物发育与物质合成中发挥重要功能。为探讨一个钙依赖性蛋白激酶-TaCPK34在小麦淀粉合成中的功能,利用大麦条纹花叶病介导的基因沉默技术(barley stripe mosaic virus-virus induced gene-silencing,BSMV-VIGS)将该基因沉默,并在田间条件下测定灌浆期间沉默植株籽粒内TaCPK34基因的表达量及成熟籽粒的淀粉性状。结果表明,在花后15 d、20 d、26 d和30 d,BSMV-VIGS-TaCPK34沉默植株中TaCPK34基因表达量受到显著抑制(63.8%～97.8%); BSMV-VIGS-TaCPK34沉默植株成熟籽粒淀粉含量、千粒重、粒长和粒宽均显著降低(降幅分别为6.0%、7.1%、4.4%和11.0%);扫描电镜观察发现BSMVVIGS-TaCPK34沉默植株成熟籽粒内淀粉粒排列疏松且数量减少。这些研究结果表明TaCPK34在小麦籽粒灌浆期间对籽粒淀粉的合成有重要影响。     

东北林蛙皮肤分泌物中特定范围内蛋白和多肽凝胶层析分析

利用凝胶色谱法对东北林蛙皮肤分泌物中蛋白质及多肽组分分子量的分布进行分析。应用葡聚糖凝胶Sephadex G-100、G-50、G-25,利用已知分子量的牛血清蛋白（Mr 66000）、卵清蛋白（Mr 45000）、细胞色素C（Mr 11700）、胰岛素（Mr 5700）、胰高血糖素（Mr 3550）等作为标准品,对流动相、洗脱速度、色谱条件等进行反复试验,用0．5％甲醇洗脱液（含0．14mol／L NaCl）、0．4ml／min流速,筛选东北林蛙皮肤分泌物中分子量Mr 4000左右的蛋白质及多肽,分离获得了大量相应分子量范围的蛋白及多肽组分。该实验方法简便,结果重现性好,适合作为生物工程产品的质控方法。     

茉莉酸甲酯对小麦幼苗生长及镉积累的影响

为探讨茉莉酸甲酯（Methyl jasmonate,MeJA）对镉胁迫下小麦幼苗生长发育和镉积累的作用及可能机制,本试验采用叶面喷施激素的水培方法,分析1 μmol·L^-1和100 μmol·L^-1 MeJA对镉胁迫下小麦幼苗生长、根系形态、光合特性及镉吸收分配的影响。结果表明,相较于清水对照,1 μmol·L^-1 MeJA可以显著提高小麦幼苗生物量15%~30%,降低小麦整株镉含量14%~43%。MeJA可提高小麦幼苗的根长、根表面积和根体积,以及净光合速率、气孔导度和蒸腾速率,但降低胞间CO₂浓度。除此以外,1 μmol·L^-1 MeJA可以显著降低根系离子态镉、有机酸-镉所占比例,提高果胶/蛋白质吸附镉和不溶性草酸镉所占比例。由此可见,叶面喷施MeJA可以降低小麦幼苗根系镉吸收能力,提高干物质积累,降低幼苗镉含量,促进活性态镉向惰性镉的转化,缓解镉毒害。     

东北林蛙烂趾病病原菌的分离鉴定及药敏试验

对东北林蛙烂趾病病原菌进行分离鉴定,并对其药物敏感性进行研究。结果表明：从东北林蛙患病趾处分离到1株溶血性致病茵,经16SrDNA序列分析法鉴定为嗜水气单胞菌。通过对23种抗生素的药敏试验表明,此菌对氟喹诺酮类（如环丙沙星、培氟沙星、诺氟沙星）,部分头孢类抗生素（如头孢呋辛、头孢噻肟、头孢吡肟）,β-内酰胺类抗生素（如亚胺培南、氨曲南）高度敏感;对部分头孢类抗生素（如头孢噻吩、头孢西丁、头孢他啶）,氨基糖苷类抗生素（如卡那霉素、庆大霉素、链霉素）中度敏感;对青霉素类如（青霉素、苯唑西林、氨苄西林、阿莫西林）有耐药性。说明可以考虑用氟喹诺酮类、头孢类或β-内酰胺类抗生素防治东北林蛙烂趾病。     

动物抗菌肽抗病毒性质及其机制

简要综述了近年来有关抗菌肽抗病毒性质的研究动态、抗病毒机理及展望。     

电刺激后东北林蛙皮肤分泌物及其抗微生物肽组分的动态恢复

东北林蛙皮肤分泌物排空后,在不同时间点收集其皮肤分泌物,分析皮肤分泌物及其中抗菌肽谱的动态恢复规律。结果表明:电刺激排空后的第0～21天时间范围内东北林蛙皮肤分泌物总量的恢复呈递增趋势;高效液相色谱显示不同时间收集的皮肤分泌物的组分差异不显著(P>0.05,n=5),但各组分恢复的时间并不同步;用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对恢复较快的2个组分峰成分进行抑菌试验,发现2组分均有较强的抑菌活性。用ESI-MS/MS对2组份进行质谱鉴定,确定其氨基酸序列。东北林蛙皮肤分泌物中抗微生物肽的恢复表达优先于其他多肽,该免疫防御策略可为东北林蛙在复杂环境中的生存提供保证。     

冻害胁迫对小麦叶片抗寒生理生化指标的影响

研究了大田冬季冻害条件下,幼穗发育不同阶段的小麦叶片内可溶性蛋白质、可溶性糖、脯氨酸(Pro)、抗坏血酸(ASA)和谷胱甘肽(GSH)等抗寒物质含量的变化。结果表明,冻害胁迫期间,植株幼穗发育进程快(播期较早)、且受冻害较重的豫麦34号和郑麦9023叶片中可溶性糖、可溶性蛋白质和抗坏血酸含量均显著低于幼穗发育进程慢(播期较晚)、受冻害较轻的品种豫农949和偃展4110,表明其适宜作为胁迫过程中小麦抗冻性的鉴定指标。冻害胁迫期间,4个小麦品种不同幼穗发育植株的叶片内脯氨酸和谷胱甘肽含量均比寒流来临之前增幅大,幼穗发育进程快且受冻害较重的豫麦34号和郑麦9023品种,这2种物质含量显著高于幼穗发育进程慢、受冻较轻的豫农949和偃展4110,推测这2种物质不宜作为小麦抗冻性的鉴定指标。     

应用瘤胃粘膜表面扩张系数评价狍冬季的营养状况

1999年冬季，对黑龙江省小东林场14只狍瘤胃胃壁进行了取样及其瘤胃粘膜表面扩张系数（SEF）的测定，并与李文军的研究相对照，结果表明：小东林场狍的瘤胃粘膜表面扩张系数符合Hofmann理论，其营养状况处于较好的水平，并间接地反映了小东林场狍具有较好的食物质量。