猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株的遗传变异分析

用间接免疫荧光试验和RT-PCR方法,从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定、比较分析和绘制进化树.结果表明,16株分离株之间的氨基酸序列同源性为88.1%～99.8%;与欧洲型LV株和美洲型VR-2332株的氨基酸序列同源性分别为54.0%～54.5%和88.1%～99.2%,证明分离的16株病毒均为美洲型.用DNAstar等软件对16株分离株推导的氨基酸序列作进一步比较分析,发现16株分离株ORF5基因编码的gp5蛋白的抗原区、潜在疏水区、跨膜区和N-糖基化位点分布均有差异,与其它美洲型毒株也存在一定程度的差异,说明在河南流行的PRRSV存在明显的遗传差异性.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株GP4蛋白免疫活性研究

克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株的ORF4基因,将疏水序列缺失后,再克隆到原核表达载体pET-32a中,得到阳性重组质粒,经IPTG诱导,纯化后由Western blotting分析,并将所得的包涵体、变性蛋白和复性蛋白分别免疫小鼠,获取的血清抗体进行效价和中和活性的检测。为深入研究GP4蛋白的免疫特征奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株M基因的原核表达与重组蛋白的复性研究

采用PCR方法从重组质柱pTG19-T-M扩增得到缺失N端疏水区序列的基因片段tM.将tM与原核表达载体pET-32a进行连接并转化,重组质粒经鉴定并测序.结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21细胞中成功地表达了醉繁殖与呼吸病毒重组蛋白pET-tM.表达量为31%.表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约为29 kD的重组蛋白且以包涵体形式存在.8 mol·L~(-1)尿素变性溶解包涵体,再用稀释与透析相结合的方法对重组蛋白进行复性.复性蛋白经Western-blot检测,结果证明复性蛋白可被PRRSV阳性血清识别用.     

应用间接免疫荧光法检测狂犬病病毒

取０．５ｍｌ兔ＢＨＫ－２１新鲜健康细胞液和０．１ｍｌ狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合，培养２４小时后制片，加抗狂犬病病毒兔抗体感作，用抗逸荧光抗体染色，通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿芭一病毒是否在细胞内增殖，从而建立了检测狂犬病病毒的间接免疫荧光法。     

鸡新城疫病毒V_(-4)株的生物学特性研究

本试验证实V_(-4)株对1日龄雏鸡安全,10日龄1次饮水或滴鼻免疫,半年之内,HI抗体效价平均滴度为2~5左右,100EID~(50)F系标准强毒(毒力为10~(8·5)EID_(50)/0.1ml)攻击,保护率100％。并且成功地培育了能在56℃水浴处理5小时而血凝效价稳定的耐高温毒株V_(4-92),可在4℃和25℃保存4周,血凝效价不降。     

狂犬病毒的分离鉴定及其抗体测定

据WHO于1981年通报,全世界有87个国家流行狂犬病,严重危害着人畜的健康.狂犬病毒能感染多种动物;犬、牛、羊、马、猪、蝙蝠等都易感.发展中国家的传染源主要是病犬,其次为猫和狼.在发达国家由于狗的狂犬病已被控制,本病主要由野生动物(如狐狸、食血蝙蝠、臭鼬和浣熊等)传播.此病原主要是由于咬伤及破损的皮肤而引起感染.但Helmick等认为,从理论上说,感染的病毒存在于患者的多种体液和组织中,这种人到人接触的非咬伤传播方式已在动物到人的传播中得到证实.狂犬病毒呈弹状形态,单股RNA、核衣壳螺旋对称,病毒蛋白主要由5种主要蛋白和两种微小蛋白构成,即包含:L蛋白,有凝集血球能力;糖蛋白,突起于病毒的表面,与病毒的致病性和防御感染能力有密切的关系;核蛋白(N蛋白)缠绕着核酸;膜蛋白(M_1,M_2)对狂犬病毒属显示特异性抗原反应 ;P_(40)、P_(43)这两种微小蛋白还未弄清其功能.     

板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究

本试验利用Marc-145细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对细胞的感染作用，并通过改变加药方式（先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入），初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内，板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用；连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用，为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪后病毒与抗体消长规律

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种新的传染性疾病.猪繁殖与呼吸综合征病毒具有抗体依赖性增强作用(ADE),低滴度的特异性母源抗体或由免疫接种产生的低滴度的特异性抗体不但起不到免疫保护作用,还会使猪繁殖与呼吸综合征病毒更易进入血液中的单核细胞或肺泡中的巨噬细胞,促进猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制,导致长期的持续性感染,加重病情.     

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定

从济源、通许等7地采集的7份仔猪黄白痢和仔猪水肿病的病料,经麦康凯、伊红美蓝分离培养后,挑取红色或紫黑色带金属光泽的菌落,再经肉汤纯培养,然后采用生化试验、动物试验和血清学试验进行鉴定,结果显示均为致病性大肠杆菌。药敏试验结果表明,分离菌对来立信、杀菌王都敏感,而对复方新诺明产生耐药性。     

不同包被抗原检测PRRS抗体间接ELISA方法的建立

为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法,本研究利用RT-PCR方法分别扩增出PRRSV VR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因,将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中,成功构建重组质粒pET-32a-GP4、pET-32a-N和pET-32a-GP4-N。将3种重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出GP4蛋白、N蛋白和GP4-N融合蛋白,并对表达出的蛋白进行纯化。将3种已纯化的重组蛋白分别作为间接ELISA的包被抗原,通过不断优化反应条件,最终建立了检测抗PRRSV抗体的间接ELISA方法。分别使用该3种方法检测从河南省多个地区收集的200份猪血清样品中的抗PRRSV抗体,并与商品化试剂盒进行比较,结果显示,GP4蛋白做抗原时检测阳性符合率为82.7%,N蛋白做抗原时检测阳性符合率为87.2%,GP4-N融合蛋白做抗原时检测阳性符合率为85.5%;因此,N蛋白是间接ELISA方法检测抗PRRSV抗体的优势包被抗原。