1种利用SDS-PAGE检测过氧化物酶同工酶的分析方法

[目的]建立1种能够检测过氧化物酶同工酶的电泳方法。[方法]利用SDS-PAGE分离蛋白质样品分辨率较高的优点,借助SDS-PAGE分离蛋白质样品,电泳完毕后,胶板用Triton X-100处理,使过氧化物酶同工酶复性,以醋酸联苯胺染色。[结果]利用新建立的方法发现,5种菖蒲属植物含有6条过氧化物酶同工酶带,而利用传统的PAGE分析方法则只显示5条过氧化物酶同工酶带。与PAGE同工酶检测方法比较,新建立的方法分离效果更好,酶带边界更清晰,是1种分辨率更高的检测方法。[结论]利用新建立的方法得到的过氧化物同工酶电泳图谱可以为菖蒲的科学分类和鉴定提供新的生化指标。     

巨峰葡萄-猕猴桃-圣女果复合酒的最佳配方研究

研究了巨峰葡萄-猕猴桃-圣女果复合酒的生产工艺.应用正交试验设计方案、综合系数法和模糊数学评判确定出该复合酒的最佳配方.结果表明,该复合酒的最佳配方为巨峰葡萄120 g,猕猴桃30 g,圣女果50 g,蔗糖35 g,安琪甜酒曲0.7g,它们的重量比为120:30:50:35:7.根据不同浓度的液体具有不同的折光率的原理,使用WY010T型手持折光仪对产品进行糖度的测定,根据测定结果确定了该复合酒的类型属于干型.     

DNA改组（DNA Shuffling）技术在生物医药领域的应用

DNA改组是实现人类快速进化蛋白质的强有力工具。它是一种高通量的随机突变筛选技术，能在短时间内对靶序列进行多次重组并选择出最佳性能的突变体：本文综述了近年来DNA改组技术在生产蛋白药物、疫苗、基因药物等方面的应用。     

豆科植物IPI基因密码子偏好性

异戊烯基焦磷酸异构酶（isopentenyl diphosphate isomerases,IPI）作为2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸（2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP）和甲羟戊酸（mevalonate,MVA）途径的关键酶,参与植物萜类化合物的生物合成。豆科植物含多种萜类物质,研究豆科植物IPI基因密码子偏好性对促进豆科植物IPI基因表达、增加萜类物质产率具有重要意义。运用Codon W、EMBOSS等程序分析32个IPI基因的碱基组成、相对密码子使用度（RSCU）、有效密码子数（ENc）、密码子适应指数（CAI）等参数,并结合ENC-GC3s与PR2-plot方法确定豆科植物IPI基因的密码子偏好性。结果表明,豆科植物IPI基因偏好性较强（RSCU>1）的密码子有7个,最优密码子是GGU,第3位碱基的GC含量（GC3s）[落花生2 (Arachis hypogaea 2)除外]与同义密码子GC含量（GC）<0.5,密码子偏好以A/U结尾。ENc为46.69~55.00,CAI为0.23~0.27,IPI基因表达水平偏低。ENc-GC3s与PR2-plot分析结果表明,自然选择是形成豆科植物IPI基因密码子偏好性的主要原因。相较于RSCU聚类树,基于编码序列的系统进化树更能反映物种真实的系统发育关系。大肠埃希菌、烟草与拟南芥可以作为豆科植物IPI基因外源表达的宿主,研究结果将为开展IPI基因的密码子改造与遗传工程操作奠定基础。     

川芎甜菜碱醛脱氢酶cDNA的克隆及其植物表达载体的构建

以川芎为试材,从叶片中提取总RNA,经过RT-FCR获得甜菜碱醛脱氢酶(Betaine aldehyde dehydrogenase)基因的cDNA,纯化后与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌Top10,获得甜菜碱醛脱氢酶全长基因序列,以期构建植物表达载体.结果表明:甜菜碱醛脱氢酶全长核苷酸长度为1 527 bp,编码508个氨基酸.与GenBank中已发表序列HM35276进行比较,核苷酸同源性为100％.将该基因片段克隆到植物表达载体pBI121中,构建重组质粒pBI121/Betaine aldehyde dehydrogenase,并将所获重组质粒经过双酶切和PCR处理后进行序列测定,证实表达载体上含有目的片段,且连接、构建正确,为BADH的进一步表达奠定了基础.     

应用模糊数学评判葡萄酒的生产配方

研究了葡萄酒的生产工艺,应用正交试验设计方案和模糊数学方法评判确定该发酵酒的最佳配方.结果表明,葡萄酒的最佳配方为(A3B1C3),即葡萄150 g、蔗糖24 g、安琪酵母0.65 g.     

植物胆碱单氧化酶的生物信息学分析

为了研究胆碱单氧化物酶的抗逆机理,运用NCBI、Expasy、Psort、NetPhosK、TMHMM、NPSA网站和MEGA5、DNAman软件,对已在GenBank数据库中注册中的甜菜、菠菜、四翅滨藜草、山菠菜、苋菜等植物胆碱单氧化酶的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明：植物胆碱单氧化酶中Ala、Ser、Leu等氨基酸含量较丰富,属于稳定蛋白;不同植物胆碱单氧化酶的氨基酸序列具有较高的同源性(81.52%),均含有转运肽区、2Fe-S中心区和非血红素Fe离子结合区;分子进化树揭示胆碱单氧化酶有较强的保守性,可作为植物遗传分化和分子进化研究的重要依据;分子中不存在跨膜结构域,与疏水区域预测结果一致;可能受蛋白激酶C磷酸化,位点为Ser326;无规卷曲是多肽链中大量的结构元件;包含2个功能结构域,分属于Rieske家族与SRPBCC家族。本研究结果为开展胆碱单氧化酶的酶学特性及甘氨酸甜菜碱生物合成的分子机理研究提供理论参考。     

DNA改组(DNA Shuffling)技术在生物医药领域的应用

DNA 改组是实现人类快速进化蛋白质的强有力工具。它是一种高通量的随机突变筛选技术,能在短时间内对靶序列进行多次重组并选择出最佳性能的突变体。本文综述了近年来 DNA 改组技术在生产蛋白药物、疫苗、基因药物等方面的应用。