猪圆环病毒II型ORF4真核表达载体构建及其抗体制备

为构建猪圆环病毒II型(PCV2) ORF4基因的真核表达载体,并制备ORF4抗体。用PCR方法扩增PCV2 ORF4基因,将其克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+)或pEGFP-C1,成功构建出重组质粒pCDNA-ORF4、pEGFP-ORF4。重组质粒pEGFP-ORF4转染PK15细胞后,pEGFP-ORF4蛋白在细胞中明显表达,荧光信号主要定位于细胞核内。重组质粒pCDNA-ORF4接种BALB/c小鼠后,接种小鼠血清能与PCV2发生特异性免疫反应,经4次接种后抗体效价均达到1:26以上,表明诱导产生了PCV2 ORF4抗体。研究结果表明,构建了2种PCV2 ORF4真核表达载体,并制备了PCV2 ORF4抗体,为PCV2 ORF4基因功能研究奠定了基础。     

伪狂犬病病毒野毒感染快速检测方法的比较

[目的]对猪群伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染的快速检测方法进行比较.[方法]采集肥育猪的血清和扁桃体,用ELISA方法检测血清中PRV-gE蛋白抗体,用常规PCR方法和荧光定量PCR方法检测血清与扁桃体中的PRV-gE基因,比较分析猪群PRV野毒感染情况.[结果]结果显示,荧光定量PCR方法对血清与扁桃体中的PRV-gE基因的检出率均高于常规PCR方法,gE基因在扁桃体中的检出率高于血清,而gE蛋白抗体检出率高于gE基因检出率.[结论]PRV-gE蛋白抗体检测敏感性高于gE基因检测,荧光定量PCR对gE基因的检测敏感性高于常规PCR,gE基因在扁桃体中的检测敏感性高于血清,为猪群PRV野毒感染快速检测方法的选用提供了试验依据.     

猪GM-CSF荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因序列设计一对引物,用RT—PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增出296bpcDNA片段,并克隆到pGEM—TEasy载体中。经测序鉴定后,构建出含猪GM—CSFcDNA部分片段的重组质粒。通过重组质粒的Real—timePCR方法,建立了猪GM-CSFcDNA的Real—timePCR标准曲线及其直线回归方程。该方法重复性好,敏感性高、特异性强,可用于猪GM—CSFmRNA水平的定量检测。     

DNA免疫法制备猪圆环病毒2型ORF3抗体

为了制备猪圆环病毒2型(PCV2)开放阅读框3(ORF3)蛋白的抗体,并为ORF3功能研究奠定基础,用PCR方法扩增PCV2 ORF3基因,对其PCR产物用EcoR I与Xho I进行酶切,并对真核表达载体pCDNA3.1(+)进行同样酶切,连接2种目的酶切产物后转化E.coli DH5?感受态,菌落PCR和序列测定结果显示成功构建出重组质粒pCDNA3.1-PCV2 ORF3。将该重组质粒接种BALB/c小鼠,用间接免疫荧光(IFA)检测小鼠血清PCV2 ORF3抗体的特异性及其效价。IFA结果证实经PCV2 ORF3重组质粒接种所制备的小鼠血清是PCV2 ORF3的特异性抗体,小鼠血清PCV2 ORF3抗体效价在经过4次接种后均达到1:25以上,表明,成功制备了具有较高效价的PCV2 ORF3抗体。研究结果提示,可以通过质粒DNA免疫方法来快速、简便地制备PCV2 ORF3抗体,为PCV2 ORF3抗体制备提供了一种新的有效途径。     

一株犬种布鲁氏菌的鉴定及毒力测定

对分离到的一株疑似犬种布鲁氏菌进行生物特性和基因型鉴定,并用宿主实验动物(比格犬)测定了最小感染量和脾含菌量。通过形态与染色特性、培养特性、血清学特性、生化特性鉴定,及Multi-PCR、16S rRNA测序,表明该分离株为犬种布鲁氏菌,其对比格犬的最小感染剂量为10₅?CFU/ mL,对应的脾含菌量为4×10₅-3×10₆?CFU/g。     

两种猪圆环病毒2型疫苗临床免疫效果的比较

选取国内商业PCV2疫苗A和B,在一个大型猪场进行小型田间试验.将36头母猪随机平均分成3组,每组母猪所产仔猪在14日龄分别接种疫苗A(A组)、 疫苗B(B组)、 生理盐水(C组,对照).采集免疫后不同时间的仔猪血清,检测PCV2抗体,比较各组的发病率、 死亡率与增重.结果显示,接种疫苗组与对照组的仔猪发病率与死亡率都低、 且无差异;但接种PCV2疫苗的两组都显著(P<0.05)提高了增重,并改善了血清中PCV2抗体变化趋势.另外,A组的临床数据稍优于B组.检测结果表明,仔猪免疫PCV2疫苗的临床效果明显优于未免疫组,PCV2疫苗A的临床免疫效果稍好于疫苗B,为试验猪场今后进行PCV2疫苗免疫提供了实验依据.     

猪圆环病毒1型天津株全基因组的克隆与序列分析

摘要：【目的】从天津地区分离和克隆出1株PCV1,并进行基因组序列分析。【方法】参照GenBank上猪圆环病毒1型（PCV1）全基因组序列设计1对引物,用PCR技术从天津一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列,并进行序列测定和分析。【结果】全基因组序列结果显示,该株PCV1基因组全长1759 bp,与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性达98.2%以上。主要开放阅读框（ORF）序列结果显示,该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别为97.5%~99.8%和92.7%~99.9%。【结论】虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高,但还是呈现出一定的地域相关性。     

猪圆环病毒3型感染情况的初步调查

猪圆环病毒3型是近年来发现的又一种致病性猪圆环病毒,已在不少地区存在。为了了解猪圆环病毒3型在一些地区的流行情况,用PCR方法检测了湖南省与京津冀地区523头断奶仔猪血清样品中的病毒核酸。结果显示,猪圆环病毒3型核酸的猪场阳性率为68.75%,个体阳性率为31.74%,整体存在极显著（P<0.01）差异。进一步分析发现,病毒核酸阳性率超过20%的猪场达到50%,超过70%的猪场占18.75%,为0%的猪场占31.25%。调查结果表明,猪圆环病毒3型感染在我国一些地区广泛存在,但在不同猪场的感染率差异很大。     

天津白母猪性发育过程中生殖激素变化规律

测定了 6头天津白母猪从出生至 7月龄之间血清中 4种生殖激素浓度变化规律。结果表明出生时血清促黄体素 (LH)和雌二醇 (E2 )浓度很高 ,之后迅速下降 (P<0 .0 5 )并保持较低水平 ,促卵泡素 (FSH)在短时期内有一定上升 ;2 .5～ 3月龄之间血清 L H、FSH和 E2 浓度均相对较高 ,随后都下降并稳定在较低水平上 ;6月龄以后 ,L H、FSH、E2 浓度都出现上升 ,其中 6.2 5月龄时的 E2 浓度显著高于 6月龄且个体差异很大 ;5～6.5月龄之间的血清孕酮 (P4 )浓度低于 1μg.L-1,6.75月龄时的 P4 浓度显著升高 (P<0 .0 5 )且个体差异很大。根据生殖激素水平变化可推断出天津白母猪大致在 6.2 5～ 6.75月龄之间达到初情期     

基于高效液相色谱法的金银花指纹图谱研究

【目的】旨在建立金银花高效液相色谱指纹图谱方法，并将其应用于不同批次的金银花样品检测。【方法】色谱条件：YMC-Pack ODS-A C₁₈(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱，流动相为0.6%乙酸(0～30 min, 92%～72%)和乙腈(0～30 min, 8%～28%),梯度洗脱，检测波长330 nm;流速1.0 mL/min;色谱柱温度25℃。方法学考察合格后，检测14批金银花样品，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立指纹图谱，进行相似度评价。用SPSS 20.0软件进行聚类分析和主成分分析。【结果】建立金银花的高效液相色谱指纹图谱，14批金银花样品的相似度在0.971～1.000之间，共标定出11个共有峰。通过对照品指认其中的8个，分别为异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁和木犀草苷。14批金银花共有峰峰面积占总峰面积的平均值为96.31%,RSD为0.47%。聚类分析将14批金银花样品分为4个，但主成分分析后缩减为3个，其中主成分1包括异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和2个未知成...