非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达及单抗制备

为制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的单克隆抗体,本研究扩增p54蛋白的胞外区编码基因,分别克隆到p ET30a和p GEX-6p-1中,构建了p54-p ET30a和p54-p GEX-6p-1重组质粒;将质粒分别转化到大肠杆菌BL21中,表达C末端带6个His、N端带有GST的p54重组蛋白;利用亲和层析的方法,富集和纯化带His标签的p54蛋白;以带His标签的p54蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体;以带有GST标签的p54蛋白为抗原,对制备的单抗进行特异性验证。结果显示:大肠杆菌能高效表达带His标签和GST标签的非洲猪瘟p54蛋白;His标签的p54蛋白免疫BALB/C小鼠后,得到了3株单克隆抗体;Western blot结果表明,3株单克隆抗体能与带有GST标签的p54蛋白相互反应。本研究成功制备了p54的单克隆抗体,为进一步开展非洲猪瘟ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测技术的开发研究奠定了基础。     

氟苯尼考可溶性粉对鸡大肠杆菌病的疗效试验

氟苯尼考(Florfenico1)是一新型的氯霉素类药物,低剂量时对98%的耐氯霉素菌株均有活性作用,有抗菌谱广、吸收良好、体内分布广等特点.     

非传统安全视角下的口岸动物检疫形势分析与对策

本文从国家总体安全观的角度,系统阐述了口岸动物检疫工作对国家安全尤其是经济安全、社会安全、资源安全以及生态安全等非传统安全的影响。结合目前我国进出口贸易新业态和国内外动物疫病新形势,分析了口岸检疫工作中面临的挑战和存在的问题,并就如何加强基于风险的动物检疫监管和加强动物疫病监测预警、检测溯源和新型处理科学技术研究等方面提出建议。     

三亚全球动植物种质资源引进中转基地引进活兔传带4种重要疫病的风险评估

为评估三亚全球动植物种质资源引进中转基地引进活兔过程中传带兔出血症、野兔热、兔黏液瘤病和兔球虫病4种疫病的生物安全风险,按照世界动物卫生组织（WOAH）动物及动物产品进境风险分析框架,从危害识别、风险评估及风险管理3个方面开展分析。结果表明,4种疫病的传入风险为“高”,暴露风险为“高”,结合后果评估,进境活兔传带4种疫病的风险为“极高”。根据以上风险评估结果,提出了强化高水平基础设施建设和提升进出境动物检疫监管能力等风险管理措施,以期为保障我国兔产业健康持续发展提供参考。     

免疫荧光检测技术及其在寄生虫检测中的应用进展

免疫荧光技术(immunofluorescence technique)是在生物化学、显微镜技术和免疫学基础上发展起来的一项检测技术,是用荧光标记的抗体或抗原与被检样品中相应的抗原或抗体结合,在显微镜下检测荧光,并对样品进行分析的方法。它把显微镜技术的精确性和免疫学检测的特异性、敏感性有机地结合在一起。这一方法的特点是特异性强、灵敏度高。作为一种快速诊断方法,目前广泛应用于病毒、细菌病的诊断,也是许多动物寄生虫病(如弓形虫病)的常规诊断方法。随着标记抗体、抗原的普及,免疫荧光技术在寄生虫病诊断方面的应用将更加广泛。     

含组氨酸蛋白标签的蓝舌病假病毒物质构建及定量分析

基于蓝舌病（bluetongue,BT）的危害及RNA阳性质控品研制的重要性,试验将pTrcHis-MS2质粒借助点突变技术在噬菌体外壳蛋白15和16氨基酸之间插入组氨酸（His）蛋白标签,构建了pTrcMS载体。将pMD19-T-BTV质粒与pTrcMS质粒分别进行KpnⅠ和Hind Ⅲ双酶切,然后连接构建pTrcMS-BTV重组质粒。将pTrcMS-BTV重组菌进行原核表达,产物借助偶联His蛋白标签的磁珠捕获技术获得纯化的蓝舌病假病毒颗粒,进行特性鉴定并定量。结果显示,研制的pTrcMS-BTV物质经PCR方法评价纯度高,无基因DNA污染;透射电镜观察形态为不规则的直径约为26 nm的多边形;RT-PCR方法检测稳定性表明该物质耐RNase A,易保存;应用荧光RT-PCR检测表明该物质溶液最低检测限可达到2.5×10²拷贝/mL。蓝舌病假病毒物质将为蓝舌病分子生物学检测提供阳性质控物质。     

锦鲤疱疹病毒病病原检测能力验证结果分析

为了提高中国锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病原检测的整体水平,加强相关实验室检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的能力,2014—2016年开展了3次能力验证项目。能力验证样品为盲样,使用鲤鱼组织匀浆液,与包含了KHV TK基因片段和Sph基因片段的2种重组质粒溶液混合制成。对盲样进行了均匀性和稳定性检测。采用水产行业标准《鲤疱疹病毒检测方法 第1部分：锦鲤疱疹病毒》(SC/T 7212.1-2011)中,推荐使用的聚合酶链式反应(PCR)方法进行病毒检测,并对各参加单位锦鲤疱疹病毒的检测结果进行分析。2014年能力验证第一轮测试结果满意率为58%,第二轮满意率为96%;2015年能力验证第一轮测试结果满意率为77%,第二轮满意率为89%;2016年能力验证第一轮测试结果满意率为82.69%,第二轮满意率为92.73%。通过2014至2016年的能力验证活动,大多实验室具备了锦鲤疱疹病毒PCR检测能力和质量管理水平,可以承担锦鲤疱疹病毒的检测和监测工作。     

弓形虫ITS及5.8S序列的PCR扩增、克隆及分析

通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株，以及国际标准强毒株RH株的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)及5．8SDNA序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析，旨在对国内不同宿主间弓形虫虫株的遗传变异情况进行分析和验证。为分子遗传学和分子诊断学研究提供资料。结果显示：QH绵羊株、ZS人株、SH人株、CN猪株的ITS及5．8S序列完全一致。且与GenBank上注册RH株的ITS及5．8S序列也一致；仅实验室传代保存的RH株的ITS2序列与其它4株的ITS2有2个碱基的差异。结果表明ITS可作为分子标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定。但不适合用于弓形虫种内遗传变异的研究。     

进口俄罗斯牛肉传入牛结节性皮肤病风险评估

依照世界动物卫生组织《陆生动物卫生法典》中的动物及动物产品进境风险分析框架,采用定性评估方法,对俄罗斯输华牛肉开展牛结节性皮肤病传入风险评估。评估认为,在不采取检疫监管措施的情况下,牛结节性皮肤病随俄罗斯进口牛肉传入的风险为"中",暴露风险为"低",后果风险为"高",综合风险为"中"。由此,建议采取产地牛源控制、疫源监测检测以及加强宰前宰后检验和牛肉进口检疫监管等措施,防范牛结节性皮肤病随俄罗斯牛肉进口传入我国。