水稻条纹病毒外壳蛋白和病害特异蛋白在寄主体内的积累

ＰＡＳ ＥＬＩＳＡ检测结果表明：（１）水稻条纹病毒外壳蛋白和病害特异蛋白在水稻寄主体内累积量的变化趋势是一致的,而且均与寄主症状的严重度密切相关．（２）不同水稻品种中,２种蛋白的累积量和累积速率有明显差异．明恢６３（高感）２种蛋白的累积量均比ＩＲ３６（高抗）的明显大;０６３８１（耐受性低）２种蛋白的累积速率均比岗优２２（耐受性高）的明显快,０６３８１病叶中２种蛋白累积量在其显症３０ｄ左右达到高峰,而岗优２２的则在４０ｄ左右     

地方农林院校植保本科应用型人才培养问题探究

针对现代农业大发展背景下植保本科应用型人才培养存在的问题及原因,对福建省各市县农业局以及农业类企事业单位开展深入访谈调研,提出根据农业发展趋势制定人才培养方案、加强实践教学与生产实际的联系、改进课程教学等对策,以期探究植物保护专业本科应用型人才培养与农业行业的发展存在的差距.     

植物单宁对烟草花叶病毒的抑制活性

测试了从11种植物提取的单宁对烟草花叶病毒(TMV)的抑制活性.结果表明:(1)任一植物的单宁质量浓度为5.000或2.500mg·mL-1时,与TMV混合10min后接种,其抑制率均达80%以上.(2)单宁质量浓度为5.000mg·mL-1时,与TMV混合后立即接种,其抑制率也均达80%以上,表明单宁与病毒粒体作用时间很短.(3)TMV与单宁混合,透析3d后,可恢复大部分侵染力;混合3d但未作透析处理,与混合10min的处理相比,抑制率下降,表明部分植物的单宁体外稳定性可能较差,与TMV粒体作用能力下降.(4)这11种植物的单宁对TMV体内抑制复制效果不明显.(5)大飞扬、杠板归、虎杖3种植物的单宁,在接种前先喷施心叶烟再接种TMV,可抑制病毒的初侵染;在接种前先喷施普通烟草K326再接种TMV,烟株发病期推迟3-8d.     

MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性

[目的]建立一套适合于实验室的高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型.[方法]首先,选用乙醇为溶剂对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术8种中草药植物材料进行浸提.然后通过MTT法对8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行仞测.试验采用二甲基亚砜(DMSO)与甘氨酸-NaOH缓冲液作为溶剂,消除剩余培养基对吸光值的影响.为确保细胞株最大吸收峰位置不变,酶标仪采用570 nm波长测定OD值.为验证筛选出的3种物质对癌细胞的抑制作用,以活性物质浓度为横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标,描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况.[结果]倒置显微镜下观察3种细胞阶段的形态:正常状态下,细胞的透明度大、折光性强、轮廓不清;当细胞受污染时,折光性变弱,胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质,细胞之间空隙加大,细胞变得不规则,失去原有特点;而受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但其萎缩,边缘清晰化;三者之间存在一定区别.MTT法培养板定性检测显示,柴胡、莪术、甘草细胞培养孔内的液体颜色都较浅且比较均匀,可见,它们对细胞生长具有明显的抑制作用.而半边莲培养孔内液体颜色深浅不一.还有一些培养孔内液体颜色较深,如卤地菌、蜜蒙花、地榆和旱芹,表明它们对细胞生长没有明显的抑制作用.进一步定量计算表明,浓度为1.0～1.5 mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%.甘草、柴胡和莪术3种物质的抑制作用曲线结果也验证了它们对细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制程度与浓度呈正相关.[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型.     

NSvc4和CP蛋白与水稻条纹病毒的致病相关

【目的】以水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation,BiFC）技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系（Yeast two-hybrid,YTH）对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术验证致病性鉴定结果。【结果】RSV NSvc4蛋白能与CP蛋白互作,且蛋白复合体在本氏烟细胞中能够定位到叶绿体。致病性鉴定显示,PVX-RSV-NSvc4侵染的本氏烟表现为花叶症状;PVX-RSV-CP能够在侵染叶上诱导花叶症状,但是系统叶却恢复健康;PVX-RSV-NSvc4与PVX-RSV-CP共侵染的本氏烟和PVX-RSV-NSvc4CP侵染的本氏烟的侵染叶、系统叶均表现出了严重病症。Real-time PCR结果显示,PVX载体在各侵染本氏烟中的累积量均较低,而RSV CP和NSvc4基因的表达量与本氏烟的发病症状紧密相关。【结论】NSvc4和CP蛋白均有致病性。CP蛋白的致病力不能持久,但是与NSvc4蛋白互作后具有持久致病力,表明二者协同在RSV致病过程中发挥作用。     

黄瓜花叶病毒三个毒株对烟草细胞内防御酶系统及细胞膜通透性的影响

 用黄瓜花叶病毒(CMV)PE、M和Xb3个毒株接种烟草(品种K₃₂₆)后,按时间顺序测定与细胞防御系统有关的酶活性和受侵细胞膜通透性变化:1)苯丙氨酸解氨酶(PAL):Xb毒株侵染初期导致酶活性明显升高、后期下降,M毒株导致酶活性一直保持在较高水平,而PE毒株则导致酶活性下降。2)过氧化物酶(POD):PE和M毒株均导致酶活性升高,Xb毒株影响不大。3)超氧化物歧化酶(SOD):Xb和M毒株导致酶活性前期升高、后期活性下降,PE毒株引起酶活性前期略微升高、后期下降。4)多酚氧化酶(PPO):Xb毒株导致发病前期酶活性急剧升高、后期降低,M毒株导致酶活性初期降低、后期回升,PE毒株导致酶活性升高。5)受侵细胞在发病初期的膜通透性均低于正常水平,不同毒株引起的膜透性变化与症状的严重度均有独特的规律。3个毒株的侵染均可引起细胞内可溶蛋白浓度的改变。     

水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用

为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因,并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化E. coli Rosetta,经IPTG诱导后获得分子量约为29 kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV的IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法,为该病毒的检测、诊断提供了保障,同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。     

杂交籼稻新组合丰优香占及其栽培技术

丰优香占是江苏省里下河农科所选育的优质早熟杂交籼稻新组合。表现产量高．且单、双季稻兼用;抗性好,米质优且有浓郁香味,籽粒大而匀称,深受试种者的欢迎．适宜我省和邻省地区作单季稻和连作晚稻推广种植。