猪SMYD3基因的克隆、序列分析及其对猪成纤维细胞增殖的影响

试验旨在克隆猪SMYD3(SET and MYND domain-containing protein 3)基因并对其进行序列分析,研究其对猪成纤维细胞增殖的影响。首先克隆猪SMYD3基因,根据其他物种SMYD3基因siRNA和shRNA序列,经同源性比对分析,获得两条猪SMYD3基因shRNA序列,分别构建pSicoR-GFP-SMYD3 shRNA1/shRNA2表达载体,转染HEK293T细胞,利用实时荧光定量PCR分析干扰效率,筛选出抑制效率较好的shRNA,并构建pLVX-IRES-ZsGreen1-SMYD3及pSicoR-GFP-SMYD3 shRNA真核表达载体,同时分析SMYD3基因对猪成纤维细胞的增殖作用,检测细胞Nanog、DNMT1及DNMT3a基因表达情况。结果显示,试验克隆得到1 404 bp的猪SMYD3基因编码区序列,生物信息学分析发现,德保猪SMYD3基因与野猪、山羊和野耗牛相应氨基酸序列的同源性分别为99.5%、93.8%和92.9%。shRNA1/shRNA2均能显著抑制SMYD3基因表达(P0.05),抑制效果分别是34%和54%,选择pSicoR-GFP-SMYD3 shRNA2进行后续研究。通过脂质体转染法将构建的pLVX-IRES-ZsGreen1-SMYD3及pSicoR-GFP-SMYD3 shRNA真核表达载体导入HEK293T细胞,均可观察到清晰的绿色荧光。慢病毒感染细胞及实时荧光定量PCR结果显示,与空白对照组及阴性对照组相比,过表达SMYD3基因促进猪成纤维细胞增殖,Nanog和DNMT1基因表达显著升高(P0.05);抑制SMYD3基因表达,细胞增殖受到抑制,Nanog、DNMT1、DNMT3a基因表达显著降低((P0.05),说明SMYD3基因的表达与猪成纤维细胞的增殖显著相关。     

PCV2、PRRSV和MPS共感染情况下怎样使用疫苗来控制猪呼吸道病综合征

PCV2(猪圆环病毒2型)、PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒)和MPS(猪肺炎支原体)被认为是PRDC(猪呼吸道病综合征)的3个主要病原,对全球猪业生产造成了巨大影响.虽然关于3种主要病原体的相互作用的研究较为广泛,但掌握针对这3种病原的疫苗怎么联合使用才能达到最好的效果也是十分必要的.众所周知,PRRSV与MPS可...     

"益母生化散"对胎衣不下奶牛胎盘激素含量的影响

随机选择1～4胎龄健康黑白花奶牛10头,设为健康对照组(A组);选择1～4胎龄产后健康黑白花奶牛17头,产后立即灌服"益母生化散"250 g,为中药预防组(B组);选择1～4胎龄产后胎衣不下奶牛10头,为胎衣不下组(C组);选择1～4胎龄产后胎衣不下奶牛26头,产犊后12 h灌服"益母生化散"500 g,设为中药治疗组(D组).采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测奶牛胎盘组织中孕酮、雌激素、前列腺素和血管紧张素的含量,探讨奶牛胎衣不下的发生机理及中药"益母生化散"的防治效果.结果表明,奶牛胎衣不下的发生与胎盘组织中孕酮、雌激素、前列腺素(PGE2)和血管紧张素Ⅱ含量变化关系密切,胎盘组织中孕酮含量的升高,雌激素、前列腺素和血管紧张素含量的降低是胎衣不下发生的重要机理之一."益母生化散"对奶牛胎衣不下有较好地防治效果,其机制可能与"益母生化散"具有调节胎盘组织的激素分泌等作用有关.     

鸡MyD88基因对巨噬细胞增殖和凋亡的影响

为探究鸡MyD88基因对巨噬细胞增殖和凋亡的影响,通过构建MyD88基因过表达质粒,以及合成MyD88基因干扰片段,并分别转染至鸡巨噬细胞(HD11)细胞中,采用CCK-8、流式细胞术及qRT-PCR方法检测过表达和干扰MyD88对HD11细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,MyD88过表达可显著降低HD11细胞活力(P<0.05),下调促增殖标志基因CCND1和PCNA的表达水平(P<0.05),上调抑增殖标志基因P21的表达水平(P<0.05),减少S期细胞数,阻滞细胞周期进程,增加HD11细胞凋亡率,上调促凋亡基因Caspase 3、Caspase 9和Bax的表达水平(P<0.05)。干扰MyD88可显著提高HD11细胞活力(P<0.05),上调促增殖标志基因的表达水平,降低G1期细胞数,增加S期细胞数,加快细胞周期进程,降低HD11细胞凋亡率。结果表明,MyD88基因能抑制HD11细胞增殖,促进HD11细胞凋亡。     

绵羊体外成熟卵母细胞OPS法玻璃化冷冻保存试验

研究以EDFS30为玻璃化冷冻液,以卵母细胞解冻后孤雌激活和体外受精后的卵裂率、囊胚发育率作为评价指标,探讨了以OPS法玻璃化冷冻保存体外成熟绵羊卵母细胞的效果。结果表明:卵母细胞孤雌激活后的卵裂率,冷冻组(64.2%)显著(P<0.05)低于毒性组(76.7%)和对照组(79.1%),而毒性组和对照组无显著(P>0.05)差异;卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率,冷冻组(4.2%)和毒性组(5.8%)均显著(P<0.05)低于对照组(20.2%),毒性组和冷冻组无显著(P>0.05)差异;冷冻组和毒性试验组卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚发育率(67.6%和7.1%;62.3%和9.1%)均显著低于对照组(78.4%和28.4%)(P<0.05),而毒性组和冷冻组无显著(P>0.05)差异。可见以EDFS30为玻璃化冷冻液,采用OPS法冷冻保存绵羊体外成熟卵母细胞会在一定程度上降低其受精能力和胚胎发育能力。     

综合治理制药三废,实现民族兽药的可持续发展

废水、废气、废渣是许多企业必须面对也是迫在眉睫必须解决的难题。《国务院关于环境保护若干问题的决定》明确提出,到２０００年全国所有工业污染源排放污物达到国家或地方规定标准,１２月３１日为最后的“生死线”。企业如果重视不够、解决不当,往往成为制约企业发展的一步死棋。经过改革开放二十年的发展,中国动物保健品的产值增长了２６倍,取得了长足的发展。但是由于企业规模普遍偏小,企业用于环保的投入较少,面临综合治理制药三废的难度较大。鲁抗公司为全国抗生素三大生产基地之一,８０年代末开始涉足兽用药的生产、开发,目…     

新城疫病毒F48E9株M和NP基因的原核表达

根据新城疫病毒（NDV）F48E9国内标准强毒株编码序列设计了2对特异性引物,分别用于扩增M和NP基因。经序列测定,将其克隆到原核表达载体pET-30a（＋）上,转化E．coliBL21（DE3）,筛选表达NDVF48E9株M蛋白和NP蛋白的菌株。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果表明,NDVM蛋白在E．coliBL21（DE3）内以可溶形式存在,而NP蛋白以包涵体的形式表达。用纯化的M和NP蛋白免疫鸡制备超免疫血清,进行Western-blot分析;结果,它们可以与真核表达系统表达的M和NP蛋白以及NDV发生特异性反应,表明,原核表达系统表达的NDVM和NP蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。     

离子载体和抗菌剂抑制抗药性转移的研究

在实验室测试模型中,药物饲料添加剂欧罗肥(金霉素)、球安(拉沙里菌素)、BMD(亚甲基双水杨酸杆菌肽)、雅来益力素(杆茵肽锌)、百剋(盐霉素)和Cattlyst(来洛霉素)可以抑制抗性质粒转移进入所选的革兰阴性茵.所有受试添加剂均抑制了大肠杆茵HB101的DNA转化,并且随着药物质量浓度增加,抑制程度也增加.试验还评估了单独使用典型剂量的离子载体类化合物及联合使用BMD、欧罗肥、林肯霉素、3-Nitro(洛克沙胂)、泰乐菌素和维吉尼亚霉素时的效果,结果表明:显著抑制了超过80.6%～99.9%的抗性转移;也可以抑制其他从家禽中提取的茵株和革兰阴性茵参考分离株的抗性转移.在用于动物饲料的相应质量浓度下,这些化合物可能会干扰膜相关DNA的吸收通道或其他转移机制.离子载体和细胞膜互作因子(欧罗肥和BMD)可能抑制家禽和家畜的抗性转移机制,而以前并未认识到上述饲料添加剂的潜在优势.     

奶牛微量元素添加剂的设计与评价

为探究微量元素添加剂对奶牛生产性能的影响,按照奶牛饲养标准,针对规模化奶牛场设计专用微量元素添加剂,选取泌乳期荷斯坦奶牛48头,随机均分为两组,试验组饲喂基础日粮与配制的微量元素添加剂,对照组饲喂基础日粮,试验期150d,并进行效果评价。同对照组相比,试验组奶牛采食量、泌乳量、乳成分相关指标明显高于对照组,体细胞数、乳房炎、子宫内膜炎、胎衣不下及蹄病发病数明显下降。应用微量元素添加剂可以明显改善奶牛生产性能,降低奶牛常见病数量。