警惕一种外来有害杂草刺果藤

刺果藤（Sicyos．angulatus L．）是葫芦科刺瓜藤属的一种有害杂草，在世界多国有分布，2003年侵入青岛。本文简要介绍了该草的形态特征、生活习性、地理分布及危害，分析其传入渠道与风险，同时提出预防建议。     

木薯细菌性萎蔫病菌的检疫方法研究

本文对木薯细菌性萎蔫病菌的致病性测定、细菌的分离、细菌的培养条件和培养基选择、细菌的生理生化测定、分子生物学鉴定方法等方面进行了系统研究，确定了该病菌的菌落鉴定特征，建立了从木薯繁殖材料上进行病原菌检测的快速、灵敏、准确的PCR检测方法。     

利用实时荧光PCR技术检测风信子黄腐病菌

风信子黄腐病菌是我国禁止入境的病原细菌之一,我国目前尚无该病的发病报道.本研究根据风信子黄腐病菌基因组16S-23S ribosomal RNA intergenic spacer保守序列,设计并合成了1对特异性引物和1条具有稳定点突变特异性探针进行实时荧光PCR检测,风信子黄腐病菌有很强的荧光信号,供试的其它7种病原细菌菌株均没有荧光产生.与常规PCR相比,实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.经优化反应条件,建立了稳定的风信子黄腐病菌实时荧光PCR检测方法.     

半巢式RT-Realtime PCR方法检测藜草花叶病毒

[目的]根据藜草花叶病毒(SoMV)全基因组中多聚蛋白质基因序列保守区,分别设计2套TaqMAN探针和引物,建立半巢式实时荧光PCR检测SoMV的新方法。[方法]提取病毒核酸进行反转录操作合成cDNA,依据设计好的2套TaqMAN探针和引物,分别进行实时荧光PCR特异性与灵敏度检测,并进行2套引物探针的扩增效率对比试验。[结果]方法特异性强,灵敏度高达0.4 fg/μL植物总RNA,2套引物探针的扩增效率试验对比结果显示扩增效率几乎完全一样。[结论]该方法适用于藜草花叶病毒的检疫鉴定。     

利用实时荧光PCR技术检测风信子黄腐病菌

风信子黄腐病菌是我国禁止入境的病原细菌之一,我国目前尚无该病的发病报道.本研究根据风信子黄腐病菌基因组16S-23S ribosomal RNA intergenic spacer保守序列,设计并合成了1对特异性引物和1条具有稳定点突变特异性探针进行实时荧光PCR检测,风信子黄腐病菌有很强的荧光信号,供试的其它7种病原细菌菌株均没有荧光产生.与常规PCR相比,实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.经优化反应条件,建立了稳定的风信子黄腐病菌实时荧光PCR检测方法.     

边缘假单胞菌的分离鉴定及其特性

边缘假单胞菌Pseudomonas marginalis是假单胞菌科假单胞菌属植物病原细菌,能引发百合软腐病、草莓花疫病、番茄细菌性髓部坏死病、马蹄莲块茎软腐病等,还可引发洋葱、莴苣、中国白菜、大蒜、姜、花椰菜、水稻等软腐病。边缘假单胞菌具有如此广泛的宿主致病性取决于其生理特点,尤其是在0 ℃生长良好、5 ℃能大量繁殖等特点。2007年在我国甘肃发现由边缘假单胞菌边缘致病变种引发的马铃薯腐烂病,而有关边缘假单胞菌分离鉴定和特性的研究则鲜有报道。本试验从苗木中分离得到边缘假单胞菌,对其形态特征、生理生化特性和致病性进行研究,并通过16S rRNA序列分析进一步验证其分类地位。     

进境韩国兰花细菌性褐腐病菌的分离与鉴定

[目的]鉴定进境韩国兰花细菌性褐腐病菌。[方法]从韩国进境的大花蕙兰植株病变叶片中分离到细菌菌株,并通过形态鉴定、培养特征、生理生化及16S rDNA序列分析和致病性测定对其进行了鉴定。[结果]确认该病菌为兰花细菌性褐腐病菌(Erwinia cypripe-dii),这是我国首次从进境兰花中检出该病害。[结论]为我国兰花细菌性褐腐病菌的预防及控制奠定了基础。     

基于gpd基因的大蒜黑腐病菌实时荧光定量PCR鉴定技术

【目的】大蒜黑腐病菌（Embellisia allii (Campanile) Simmons）的检疫鉴定主要采用形态鉴定方法。不仅耗时长,而且大蒜黑腐病菌与本属其他种以及其他属的分生孢子非常相似,极难分辨,需要建立快速、有效的分子诊断方法。研究旨在建立实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)体系以准确、灵敏地鉴定大蒜黑腐病菌。【方法】从NCBI的GenBank数据库中,选取大蒜黑腐病菌和其他大蒜病害以及近似种的3-磷酸甘油脱氢酶（gpd）基因核酸序列数据15种,应用引物设计软件Primer express,根据探针设计原则从理论上选出1条探针和3对引物。根据试验结果对上述引物进行筛选,筛选出能够鉴定出大蒜黑腐病菌的特异性引物对和TaqMan探针。同时对反应体系中复性-延伸温度的反应参数进行优化,设计56、58、60℃ 3个温度梯度;将大蒜黑腐病菌基因组DNA在紫外核酸分析仪上进行定量后进行10倍的梯度稀释,对探针灵敏性进行测试,从而建立大蒜黑腐病菌TaqMan水解探针法qPCR检测体系。【结果】从基于GenBank上的15种gpd基因核酸序列设计的引物和探针中,筛选出能够鉴定大蒜黑腐病菌的特异性引物对Emb21/Emb32和TaqMan探针Emb。在供试的6种菌株中,只有靶标菌大蒜黑腐病菌利用该引物对和探针能够被特异性的检测到阳性,空白对照和其他参试菌均没有荧光信号的增加,检测为阴性。复性-延伸温度反应参数优化中,△Rn荧光信号增加值在58℃时达最大,56、60℃荧光信号增加值降低,经过多次重复试验,确定最佳的复性-延伸温度为58℃。灵敏度测试中,大蒜黑腐病菌DNA浓度稀释到140 pg时,所得的图形较好;当体系中模板浓度稀释到14 pg时,所得的图形较差。最终DNA检测灵敏度为140 pg。应用该引物和探针建立的qPCR检测方法能够从供试的菌株中特异性地检出大蒜黑腐病菌。【结论】建立了大蒜黑腐病菌TaqMan探针法qPCR检测体系,该检测技术能够从供试的6种病原菌中特异性检测出大蒜黑腐病菌,检测灵敏度可达140 pg。建立的基于gpd基因的大蒜黑腐病菌qPCR方法具有高度的特异性和灵敏度,适合口岸大蒜黑腐病菌的快速检测。     

利用TaqMan探针实时荧光PCR方法检测香石竹细菌性萎蔫病菌

 根据香石竹细菌性萎蔫病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对香石竹细菌性萎蔫病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法。除香石竹细菌性萎蔫病菌外,还对其他7种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测。结果表明,只有香石竹细菌性萎蔫病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生。与常规PCR相比,实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为0.4 pg/μL的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用。      

日本进境无花果苗中短颈剑线虫的鉴定

短颈剑线虫Xiphinema brevicollum是我国重要的检疫性线虫, 寄生于植物根部, 影响寄主植物长势并降低产量。本文对青岛口岸进境的日本无花果Ficus carica苗中截获的一种剑线虫进行了形态学特征鉴定和分子序列分析, 为口岸进境植物线虫检疫提供参考依据。通过形态特征观察、测计, 以及18S rDNA、ITS1、28S-D2/D3区和线粒体COXⅠ基因序列系统发育分析的方法, 对截获的日本无花果线虫种群进行鉴定。截获的日本无花果线虫种群形态学和分子生物学特征与短颈剑线虫相似, 其主要形态特征为:虫体体型中等, 热杀死后向腹面弯曲呈开螺旋“C”形, 体长1 713.4～1 910.2 μm, 最大体宽35.8～47.1 μm, 两端渐细。唇区圆, 缢缩明显, 侧器囊漏斗状。齿尖针约为齿托长度的1.5倍, 齿托基部呈凸缘状;导环为双环;阴门位于虫体中部, 横裂, 阴道长度占阴门处体宽的1/3左右。生殖管对生, 均发育完全, 生殖管较短, 卵巢先端回折, 子宫内无特殊分化。尾短圆锥形, 背面弯曲, 腹面直, 尾尖钝圆, 尾长24.0～29.5 μm, 等于或略长于肛门处体宽。基于rDNA ITS1区构建的系统进化树, 该截获种群与短颈剑线虫巴西种群、新西兰种群、比利时种群及南非种群聚类成一个独立分支, 序列相似性达98.5%～98.7%;基于线粒体COXⅠ序列构建的系统进化树, 该截获种群与短颈剑线虫5个日本种群聚类成一个独立分支, 序列相似性达91.6%～93.6%。根据形态学和分子生物学特征分析, 此次截获的日本无花果线虫种群为短颈剑线虫, 并首次确认了无花果为该线虫的自然寄主, 海关检疫此类苗木进境时应重点关注该线虫, 降低传入几率。