不同体重菲牛蛭氨基酸及水蛭素含量的差异性研究

研究不同体重菲牛蛭氨基酸及水蛭素含量的差异,为菲牛蛭的开发利用提供基础研究数据。随机挑选5组活体体重分别为(2.00±0.10)、(4.00±0.10)、(6.00±0.10)、(8.00±0.10)、(10.00±0.10) g的菲牛蛭,分别测定蛋白质、水解氨基酸、游离氨基酸、水蛭素含量。结果表明,2.00 g和4.00 g的菲牛蛭蛋白质显著低于6.00、8.00、10.00 g的菲牛蛭(P0.05)。在17种水解氨基酸中,不同体重菲牛蛭的天冬氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸6种氨基酸和水解氨基酸总量有显著差异(P0.05),而药用氨基酸含量差异影响不显著(P0.05);不同体重菲牛蛭中除α-氨基正丁酸外的40种游离氨基酸含量差异显著(P0.05)。不同体重菲牛蛭中水蛭素含量差异显著(P0.05),菲牛蛭体重与其含有的水蛭素含量呈现对数函数关系。不同体重菲牛蛭的蛋白质、氨基酸及水蛭素含量存在显著的差异(P0.05),当菲牛蛭体重达到8.00 g以上时,其水蛭素含量呈现缓慢增加的趋势,养殖中至少筛选体重8.00 g以上的菲牛蛭能达到较高的价值。     

几种抗菌药物对嗜水气单胞菌突变选择窗(MSW)范围的研究

为了测定盐酸恩诺沙星、氟苯尼考和卡那霉素对5株临床分离的嗜水气单胞菌的MSW范围,本研究采用试管双倍稀释法测MIC,平板稀释法测MIC99,以超过1010 CFU接种于药物平板上的方法测MPC,确定了3种抗菌药物对5株临床分离的嗜水气单胞菌的突变选择窗范围.结果表明,卡那霉素和盐酸恩诺沙星对5株嗜水气单胞菌的MIC99相差不大,但MPC之间的差异较大:卡那霉素对4号菌株的MPC明显大于其他几种菌株,恩诺沙星对2号菌株的MPC明显小于其他菌株;氟苯尼考对2号菌株MIC99明显大于其他4种菌株,而MPC值均大于128 μg/mL.因此认为,目前恩诺沙星和氟苯尼考治疗嗜水气单胞菌的给药方案虽可发挥一定的治疗效果,但容易导致嗜水气单胞菌耐药性的产生.     

我国虹鳟传染性造血器官坏死病防控研究现状

虹鳟Oncorhynchus mykiss是我国主要冷水鱼养殖种类之一。传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis, IHN)是世界性的鲑科鱼类传染性疾病和制约我国冷水鱼产业发展的瓶颈之一。我国对IHN陆续开展了流行病学、病原学及防控技术等研究,取得了较大进展。本文简要综述了我国虹鳟IHN病害防控研究现状,主要包括IHN病毒基因型、分布、流行规律及疫苗研制等研究进展,以期为相关研究和我国虹鳟养殖业健康发展提供参考。     

传染性造血器官坏死病毒Sn1203株全基因组序列及系统进化分析

本课题组于2012年从中国东部的虹鳟鱼养殖场分离得到了严重威胁我国鲑鳟鱼养殖的传染性造血器官坏死病毒(IHNV)IHNV-Sn1203病毒株。根据GenBank中收录的IHNV病毒株的序列设计引物,将IHNV-Sn1203基因组序列分成5个片段进行RT-PCR克隆,最终得到完整的IHNV-Sn1203基因组序列。利用Lasergene和MEGA 5.0软件分析了IHNV-Sn1203株的全基因组序列、基因组编码蛋白、基因组末端和未翻译序列、以及病毒基因同源性和系统发育。结果发现,IHNV-Sn1203基因组全长11131nts,共编码6个病毒蛋白,大小分别为核蛋白(N)1176nts、磷蛋白(P)693nts、基质蛋白(M)588nts、表面糖蛋白(G)1527nts、聚合酶蛋白(L)5961nts和非结构蛋白(NV)336nts。IHNV-Sn1203株各基因间均具有保守的基因终止序列(Gene end,GE)、基因间序列(Intergenic regions,IG)、基因起始序列(Gene star,GS)及Kozak序列,以确保病毒基因的转录和翻译效率。系统进化分析发现,IHNV分为E、U、M、L和J共5个基因型,其中IHNV-Sn1203株与中国其他IHNV株具有显著的亲缘关系,属于J基因型中的J Nagano亚型。由G基因的进化分析发现,J基因型的病毒与U基因型亲缘关系最近,推测IHNV病毒最初可能通过进口鱼卵的方式由U基因型引入,随时间的推移逐渐进化为J基因型。     

东北三省9株嗜水气单胞菌16S rDNA序列比较研究

采用特异性引物对采自黑龙江、吉林及辽宁省的9个嗜水气单胞菌分离株的保守基因16SrDNA部分序列进行PCR特异性扩增,对所得686bp扩增产物进行测序并比较研究。序列分析显示,东北三省的9个分离株同源性极高,都在百分之九十以上,测得基因序列共有保守位点613个,变异位点73个,简约信息位点3个。辽宁省与吉林省分离株遗传距离为0.005049;辽宁省与黑龙江省为0.005049;而吉林省与黑龙江省为0.004232。以致伤弧菌为外群的MP及NJ聚类树聚类结果一致,黑龙江省的第一和第二分离株聚成一个分支,而其他各分离株聚成另外一个大的分支,其中辽宁省的第二分离株与吉林省的第一和第二分离株又聚为一个较小的分支。实验结果表明,9个分离株相应保守区16SrDNA片段变化较小,同源性极高,聚类不明显,没有形成明显的区域性或特异性的变化。     

乳及乳制品中黄曲霉毒素检测技术研究进展

黄曲霉毒素主要由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的次生代谢产物,物理和化学性质比较稳定,其种类主要包括黄曲霉毒素B1(aflatoxin,AFB₁)、AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFM₁和AFM₂,其中AFB₁毒性最强,污染最广,被世界卫生组织国际癌症研究机构确定为Ⅰ类致癌物。奶牛摄入被黄曲霉毒素污染的花生、玉米、稻米、大豆、小麦等饲料后,部分黄曲霉毒素会转化为AFM₁和AFM₂,从而存在于乳及乳制品中。本文比较国内外各国黄曲霉毒素限量标准的差异,汇总目前国内外乳及乳制品中黄曲霉毒素的各项检测技术,阐述近年来主要应用的薄层色谱法、质谱法、光谱法、电化学法、快速检测试纸条法等检测方法,分析各类方法在检测乳及乳制品中黄曲霉毒素方面的优点与存在的问题,并对今后乳及乳制品中黄曲霉毒素检测技术的发展方向做出了预测,旨在为更简便、特异性好、灵敏度高的乳及乳制品中黄曲霉毒素检测技术发展提供思路。     

鲟鱼病毒性疾病研究进展

鲟鱼是一种有着较高经济及科研价值的稀有、大型鱼类。但近年来,一些危害较大的流行性疾病的发生,给鲟鱼养殖业带来了巨大的经济损失。前期研究发现,病毒性疾病所占比重较大,是造成鲟鱼苗种大批死亡的重要原因之一。高首鲟虹彩病毒,高首鲟疱疹病毒-Ⅰ,Ⅱ和铲鲟虹彩病毒是已知引发鲟鱼病毒性疾病的主要病毒。本文针对这四种病毒病的临床症状、疾病的诊断方法、病原分离的方法以及该病的预防、治疗方法等研究进展进行概述。     

施氏鲟免疫球蛋白酶解片段分析

采用几种蛋白水解酶对施氏鲟免疫球蛋白的酶解片段进行了分析。结果显示施氏鲟的免疫球蛋白在37℃条件下可以被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶分别裂解成不同的片段：木瓜蛋白酶的酶解片段出现在分子质量为130KDa、50KDa、10KDa和7KDa的蛋白谱带附近,而在酶量比较小、酶解时间较短的一组,在94KDa附近也有一条蛋白谱带;胃蛋白酶的水解片段,主要出现在分子质量为130KDa、94KDa、90KDa和32KDa的蛋白谱带附近;胰蛋白酶酶解片段主要为分子量为130KDa和74KDa的两条主带。     

捻转血矛线虫Hc38基因的克隆及其RNAi载体的构建

根据RNAi目标序列的选取原则和捻转血矛线虫Hc38基因(登录号AY749124)产物的保守结构域所在核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约400bp cDNA序列,与AY749124序列同源性为99%.将目的序列亚克隆到RNAi载体L4440中,经PCR和酶切鉴定证明,成功构建了捻转血矛线虫对应于Hc38基因的RNAi载体L4440-Hc38.