小鼠同源异型盒基因Hex的克隆与序列分析

摘要：同源异型盒基因Hex在动物个体发育过程中具有重要的作用。为了解小鼠Hex基因在乳腺发育中的作用,本研究提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增hex基因,并克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明：小鼠的Hex基因开放阅读框由816个核苷酸组成,编码271个氨基酸,相对分子质量为30KD。与已发表的小鼠该基因序列完全一致。与禽类、人和其他动物相比氨基酸序列的同源性在69.8%-97.0%之间。进化树显示,小鼠与大鼠的Hex基因在同一分支内,只有7个氨基酸的差异,该蛋白在物种的进化中较保守,表明在进化中具有重要的作用。     

长白猪甘露聚糖结合凝集素-C基因启动子区的克隆与序列分析

摘要：根据GenBank上已发表的猪甘露聚糖结合凝集素C基因启动子区序列,设计一对特异性引物,通过RT-PCR法成功的从长白猪肝脏中克隆到MBL-C基因启动子区序列。扩增序列全长2030bp,与已发表的该序列相比具有3个SNPs位点,即-1636位点为T,-1614位点为A,-251位点为C,在-251位点与高水平表达的pMBL-C启动子区位点不同,从A突变为C。本研究为下一步分析pMBL-C的启动子区多态性奠定了基础。     

中介蝮蛇毒纤溶酶基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

为了从中介蝮蛇毒腺中提取总RNA,研究其具有重要药用价值的纤溶酶,从基因工程的角度进行研究开发蛇毒资源。通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因与pMD18-T载体连接进行TA克隆,得到FLE基因,再亚克隆到pPROEXHTb原核表达载体上,构建重组表达载体;将阳性重组表达载体转化到大肠杆菌中诱导表达,采用SDS-PAGE检测该重组蛋白的分子量。结果表明：成功的构建了重组原核表达载体ppPROEXHTb-FLE,并在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白分子量约为30 KDa。说明可以采用该方法进行中介蝮蛇毒纤溶酶的原核表达,该研究为进行蛇毒纤溶酶的开发奠定了分子基础。     

长白猪甘露聚糖结合凝集素-C基因的克隆与序列分析

摘 要：从长白猪肝脏组织中提取总RNA,经RT-PCR技术扩增pMBL-C基因,与pMD18-T载体连接,获得pMBL-C基因。序列测定结果显示该基因编码区为723bp,编码241个氨基酸残基。与已发表的猪MBL-C具有99%同源性;进化树分析显示与哺乳动物的MBL-C基因,尤其是牛的亲缘关系最近,而与MBL-A基因相差较大,与禽类的最远。本研究为进一步研究猪MBL分子的遗传特征提供了依据。     

猪甘露聚糖结合凝集素的遗传特征及研究进展

猪甘露聚糖结合凝集素是一种重要的天然免疫因子,在防御病原体入侵、病毒识别方面有其独特的功能。近年的研究发现,猪体内MBL的水平与其抗病性相关。本文对猪甘露聚糖结合凝集素的遗传特征、生物学功能及与疾病发生相关性方面进行综述。     

鸡Toll样受体15的生物信息学分析及组织表达

Toll样受体是参与机体天然免疫的一类模式分子,可以识别多种病原体相关分子模式,快速启动有效的免疫应答,在机体的抗感染免疫中发挥重要的作用。为了深入探讨鸡Toll样受体的免疫功能,为禽类相关疾病的预防和控制提供依据,试验通过RT-PCR技术克隆海兰褐鸡TLR15基因的全长阅读框,同时将其胞外区片段插入载体p ET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE和Western Blot法检测融合蛋白,并将融合蛋白作为免疫原免疫昆明鼠后制备多克隆抗体,同时采用免疫组织化学的方法,对ch TLR15的组织表达进行检测。结果表明,海兰褐鸡TLR15编码基因全长2 607 bp,编码868个氨基酸残基,其中胞外区1 962 bp,重组蛋白分子量约为72 ku;免疫小鼠可以产生特异性的抗体,抗体效价为1∶10 000;免疫组化检测结果显示,ch TLR15主要在脾脏中表达,在肝脏和肺部表达较少。研究结果可为禽类TLR15相关的免疫调节机制分析提供物质基础,也可为后续抗感染生物制剂的开发奠定基础。     

野生鸡树条荚蒾果皮红色素的提取及稳定性研究

以野生鸡树条荚莲(Viburnum sargentii Koehne)果皮为原料,采用热浸提法提取红色素,通过单因素试验及正交试验优化提取条件,并检测色素的稳定性.结果表明,提取鸡树条荚莲果皮红色素的最佳工艺条件为体积分数80％、pH 2的乙醇溶液作提取溶剂,料液比m鸡树条英蒾果皮∶V 溶剂=1∶40 (g/mL),浸提温度60℃,浸提时间1.5 h,提取2次.色素在自然光照下易退色,温度高于80℃时易褐化.     

响应面法优化佛手总黄酮提取工艺

以乙醇溶液为提取溶剂从佛手(Citrus medica var.sarcodactylis)中提取总黄酮,在单因素试验的基础上以佛手总黄酮提取率为指标,选择提取温度、提取时间和液料比3个因素进行Box-Behnken中心组合试验,优化佛手总黄酮的提取工艺条件.结果表明,优化的提取工艺条件为体积分数60％的乙醇溶液作提取溶剂、提取温度69℃、提取时间1.9 h、液料比V乙醇∶m佛手粉=32∶1(mL/g)、提取2次,该条件下佛手总黄酮提取率为0.565 9％.     

树头菜黄酮提取工艺优化及体外抗氧化活性

以80%乙醇为提取溶剂,以树头菜(Crateva unilocalaris Buch.)黄酮提取率为指标,在单因素试验基础上,用响应面法优化野生树头菜黄酮的提取条件,并测定其体外抗氧化活性。结果表明,最佳提取工艺为提取温度65℃、提取时间1.3 h、液料比28∶1(mL∶g)、提取2次,树头菜黄酮提取率为0.497%。树头菜黄酮具有较强的清除超氧阴离子自由基、羟自由基的能力和还原能力,清除超氧阴离子自由基和羟自由基的IC50分别为0.615、0.415 mg/mL,其抗氧化能力高于抗坏血酸(VC)和叔丁基对苯二酚(TBHQ)。     

蔬菜无土育苗技术要点

总孔隙度为60％～80％，容量≤1，保湿性好，液量大时不积液，不溶解，最好是对部分元素产生固定作用。PH=7，符合上述条件物质就可以做基质，如炉灰碴、稻壳等都均可做基质。