基因检测技术在小尾寒羊高繁品系建立中的应用

[目的]检测小尾寒羊多胎基因,探索按照基因型选种,为建立小尾寒羊高繁品系开辟新途径。[方法]以BMPR-IB基因作为候选基因,采用PCR-RFLP方法检测其在基础群小尾寒羊和育种群小尾寒羊中的多态性分布,分析其与产羔数的相关性。[结果]在基础群中B＋和BB基因型比例分别为77.78%和14.81%,每胎次平均产羔数分别为1.77只和2.40只;在育种群中B＋和BB基因型比例分别为51.79%和40.18%,每胎次平均产羔数分别为2.54只和3.02只。从基础群与育种群对比看,无论纯合个体还是杂合个体,育种群平均产羔数均高于基础群。[结论]BMPR-IB基因可以作为小尾寒羊多胎性的分子遗传标记,并用于建立小尾寒羊的高繁品系。     

奶山羊乳房炎的诊治

乳房炎是奶山羊常见病之一,发病率很高,属于乳腺组织的综合性炎症。在泌乳期,尤其是高产奶山羊的泌乳盛期常发生该病,有时在产前及干乳期也可见到此病的发生,给世界各国奶山羊饲养者造成严重的经济损失。本病可直接影响奶山羊的泌乳机能和产奶量,严重时可导致乳腺失去泌乳性能,造成羊只死亡,甚至影响乳的品质,危及人们的健康。因此,积极探索奶山羊乳房炎的有效诊断与防治技术,在理论和生产中均具有重要意义。     

小尾寒羊CIB1基因全长cDNA克隆及原核表达

本研究旨在克隆小尾寒羊钙粘和蛋白1(Calcium and integrin binding protein 1,CIB1)基因cDNA全长,并在原核载体中表达.参照已发表的CIB1基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用RT-PCR法,从小尾寒羊睾丸组织中扩增获得CIB1基因全长cDNA.将其克隆到pMD19-T载体,并进行测序分析.将该基因编码区重组于融合表达质粒pET32a中,构建了重组原核表达载体(pET32a-CIB1).将其转化到BL21(DE3)pLysS宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.结果表明,克隆的CIB1基因cDNA与GenBank上登录的牛、猪、猕猴、人、小鼠、大鼠、黑猩猩等动物该基因序列的同源性达90%以上,编码氨基酸的同源性在93%以上,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为576 bp.实现了高效特异性融合表达,表达产物的分子质量约为38 ku.本研究结果为进一步研究CIB1蛋白功能打下良好的基础.     

敖汉细毛羊DKK1基因重组质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究

本研究旨在构建敖汉细毛羊DKK1基因的重组质粒,并对其转染成纤维细胞后基因的表达量变化进行研究。试验采集敖汉细毛羊肱二头肌提取基因组DNA,参照GenBank中DKK1基因序列设计1对引物,PCR扩增获得DKK1基因片段,连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-DKK1重组质粒并转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,鉴定正确后构建PmaxGFP-DKK1重组质粒,转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞;对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的重组质粒PmaxGFP-DKK1转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测DKK1基因在成纤维细胞中的表达量变化。结果显示,经酶切、测序鉴定发现,重组质粒PmaxGFP-DKK1构建成功,大小为3 956 bp,并成功瞬时转染成纤维细胞,转染细胞后DKK1基因的表达量明显升高,且转染组的表达量极显著高于对照组（P<0.01）。试验成功构建了敖汉细毛羊DKK1基因重组质粒,并成功转染成纤维细胞,为进一步研究DKK1基因的功能奠定基础。     

关于推广发酵床生态养猪技术的几点思考

国内养猪业的快速发展为社会提供了充足的猪肉产品,满足了广大人民的生活需求,但同时养猪业产生的大量粪污对环境保护带来了极大的压力。发酵床生态养猪技术能有效破解养殖粪污治理难题,同时提高猪肉品质和生产效益,促进养猪业壮大和环境友好之间的协调发展。本文主要分析了在推行发酵床生态养猪技术过程中存在的问题,并提出了有效的解决措施。     

利用同源重组技术构建Chordin基因载体及其在成纤维细胞中表达量的研究

本实验旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊Chordin基因表达载体,将其转染至成纤维细胞中,分析Chordin基因mRNA及蛋白表达量的变化.以40日龄的胎羊为研究对象,采集组织样品,参照Genbank中Chordin基因序列设计一对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增目的基因片段,利用SoSo试剂盒将目的片段连接至表...     

亚麻油对猪胴体性能及肉品质影响的研究进展

脂肪酸,特别是多不饱和脂肪酸(PUFA),作为油脂的重要组成成分,不仅调控脂肪代谢和沉积,对肉中脂肪酸组成、肉的风味和食用价值也有重要影响。PUFA主要包括n-3 PUFA和n-6PUFA。n-3 PUFA具有降低甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量、脂肪沉积的作用,且在促进智力发育、提高免疫力方面起决定性作用。     

利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究

为了构建敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因真核表达载体及单、共转染成纤维细胞后研究两基因表达量之间的变化,以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成c DNA参照Gen Bank中DKK1、BMP4基因序列信息分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得DKK1、BMP4基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pcDNA3. 1真核表达载体上。鉴定正确后的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4单、共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测DKK1、BMP4基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4构建成功,成纤维细胞原代、传代培养良好,转染后细胞生长良好,经实时荧光定量PCR技术和Western Blot检测DKK1基因共转染成纤维细胞较单转染的表达量极显著下降(P 0. 01),BMP4基因的共转染较单转染表达量没有发生明显变化。成功构建了敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因的真核表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,DKK1基因的表达量明显下降,BMP4基因的表达量没发生明显变化,因而,推断BMP4基因抑制了DKK1基因的表达,DKK1基因对BMP4基因作用不明显,结果可为进一步研究其功能奠定基础。     

敖汉细毛羊毛囊FGF10、FGF18和FGFR3基因差异表达的研究

本研究旨在解析FGF家族及其受体基因在细毛羊不同部位皮肤、不同时间mRNA和蛋白的表达及与细毛羊毛囊生长发育的关系,为揭示毛囊生长发育的分子机制奠定理论基础。首先通过基因芯片技术,筛选敖汉细毛羊毛囊发育的差异表达基因,并通过qRT-PCR对基因芯片结果的准确性进行验证。之后对得到的差异表达基因作进一步分析,可知FGFs家族在颈部和腹部,羊毛毛囊的生长旺盛期和缓慢期之间的mRNA表达量存在差异的有FGF10、FGF18和FGFR3基因。最后通过二维凝胶电泳(2-DE)和质谱技术(MS),对毛囊发育的差异表达蛋白进行筛选,得出FGFs家族蛋白质在颈部和腹部、羊毛毛囊的生长期和缓慢期之间仍存在差异表达的有FGF10、FGF18和FGFR3蛋白。结果显示,FGF10mRNA在腹部表达量高于颈部,推测可能对毛囊的发育具有负调控作用;其蛋白表达量颈部均高于腹部,推测可能促进毛囊生长发育。FGF18在腹部其mRNA表达量旺盛期高于缓慢期,推测其可能维持此处毛囊的不活跃状态;其蛋白在颈部表达量均低于腹部,推测可能对毛囊的生长具有抑制作用。FGFR3mRNA和蛋白表达水平无统一趋势,可能与毛囊的生长发育存在较复杂的关系。综合以上,FGF10、FGF18和FGFR3mRNA和蛋白水平在毛囊生长发育的不同部位和不同时期存在差异表达,这提示它们可能与毛囊的生长发育具有一定的关系,并在不同水平发挥调控作用。研究结果为解析FGFs家族成员调控毛囊生长发育的分子机制奠定理论基础,为进一步加快细毛羊育种提供重要候选基因。