苹果基因邻近未知序列的PCR扩增与测序方法

本文提出的方法是首先利用已知基因序列设计三个巢式PCR引物p14、p15和p16,然后设计3’端为常见酶切位点、5’端为随机引物序列p17的9个酶切位点引物,用p14外引物与9个酶切位点引物进行第一轮PCR扩增,其中前5个反应的退火温度较低可以将酶切位点引物的5’端序列引入到PCR产物中,其余反应则以此PCR产物为模板采用较高的正常退火温度进行,退火温度较高是为了使整个酶切位点引物能稳定地结合到最初反应形成的产物上。为提高PCR产物的特异性和产量,用p15和p16引物分别与p17引物配对进行第二轮和第三轮PCR扩增,电泳检查发现PCR产物条带后进行纯化和测序。为保证序列的正确性,利用测得的DNA序列再设计新引物f3x与p14(或p15)配对,直接用提取的DNA为模板进行PCR扩增和测序。利用此方法成功地获得了苹果FPPS基因邻近的启动子序列528bp和5’UTR序列142bp,并已在GenBank注册（登录号FJ263960）。利用Blastn发现这是GenBank中首次发表苹果FPPS基因启动子序列。这说明用该方法获取基因邻近的未知序列是可行的。     

高丛越橘离体叶片再生植株研究初报

用越橘组培苗的叶片作为外植体 ,进行不定芽再生植株的研究。以改良的 WPM为其基本培养基 ,添加玉米素5 mg· L- 1 ,不定芽再生率高达 90 %。所用品种中除乔治亚姆外均有相当高的再生率。培养基中的玉米素浓度低于 5mg· L- 1时 ,不定芽的再生率也随之下降 ;基本培养基中加入 TDZ和 BA,再生率只为 0 %～ 30 %。不定芽的增殖、生根、温室锻炼、大田移栽均已获得成功     

4个蓝莓新品种抗氧化物质含量比较分析

花青苷、抗坏血酸、肌醇和绿原酸是蓝莓果实中的主要抗氧化物质,其含量是评价蓝莓果实品质的重要指标。对4个蓝莓新品种蓝玲、蓝珠、蓝冠、蓝月与对照品种蓝丰果实中的花青苷、抗坏血酸、肌醇和绿原酸含量进行了比较分析。结果显示,4个蓝莓新品种的抗坏血酸、肌醇和绿原酸含量均优于对照蓝丰,尤其是蓝玲和蓝月的抗坏血酸、肌醇含量以及蓝珠、蓝冠的绿原酸含量显著高于蓝丰。本研究结果为4个新品种的推广应用提供依据。     

抗真菌α-硫堇蛋白DB_4基因导入苹果的研究

［目的］利用转基因的办法提高苹果（Malus domestica Borkh）对叶部病害和幼果期侵染果实病害的抵抗能力。［方法］利用农杆菌介导的遗传转化方法将绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶的激活酶（Rubisco activase）启动子（RCAP）驱动下的α堇蛋白DB4基因转入到“皇家嘎啦”苹果叶片外植体中。［结果］ PCR、Southern blotting分析及GUS检测结果表明,目的基因已经整合到苹果基因组上。［结论］获得了转α堇蛋白DB4基因的转基因苹果。     

秦巴山区野板栗资源现状调查

对秦巴山区的野板栗资源进行了实地考察,发现秦巴山区野板栗资源极为丰富,分布广泛,且分布范围具有一定的区域性。但目前野板栗资源面临一定程度的人为破坏,对此提出了保护和开发的策略和建议。     

甜樱桃授粉与花果管理技术

授粉和花果管理是甜樱桃优质丰产栽培的重要环节。从花粉采集与保存、授粉品种选择、花期放蜂、人工授粉等方面总结了授粉技术,从疏花芽、疏花和疏果总结了花果管理技术。     

2008年和2009年山东省越橘冻害调查

2008—2009年度和2009—2010年度,由于低温恶劣天气,山东省越橘主栽区连续2年发生了不同程度的冻害。调查表明,初冬低温对越橘的伤害较大;北陆、喜来和都克品种的抗寒性优于蓝丰、佐治亚宝石和日出;采用先定植后起垄方式栽植可明显减轻越橘冻害的发生程度。提出减轻山东越橘冻害危害的预防措施。     

核桃GAI基因的克隆和序列分析

DELLA蛋白是赤霉素信号传导通路中一类重要的负调节因子。利用RT-PCR技术以香玲核桃叶片为试材,克隆得到核桃DELLA蛋白基因JrGAI。对基因和编码蛋白序列进行分析,结果表明,JrGAI基因开放阅读框(ORF)为1 837 bp,编码612个氨基酸;生物信息学分析表明,JrGAI编码蛋白具有DELLA蛋白的典型结构域;利用BLASTx和DNAMAN软件进行相似性分析发现JrGAI编码蛋白氨基酸序列与其它植物的DELLA蛋白具有较高的同源性,其中与辽宁2号核桃同源性最高,达到99%。核桃JrGAI基因的克隆为其进一步研究应用奠定了基础。     

平榛脱水素基因的克隆与表达分析

 以平榛（Corylus heterophylla Fisch.）花芽为试材,采用RT-PCR和RACE方法克隆了一个平榛与脱水素基因同源的cDNA基因,命名为ChDHN（GenBank登录号HM228389）,其全长639 bp,具有一个504 bp的潜在编码区,编码167个氨基酸组成的多肽,具有LEA类家族成员具有的特征多肽序列,属于Y₄SK₂类型DHN基因,预测ChDHN蛋白质分子量18.03 kD,预测其理论等电点为7.28。对ChDHN的时空表达特性进行了研究,以Actin为内参,对ChDHN在4 ℃冷激条件下（0、2、4、8、24和48 h）的表达模式进行了初步的研究,冷激处理后ChDHN表现逐渐上调的表达趋势,24 h达到最大表达量,48 h表达量降低;推测ChDHN属于植物冷适应调节网络中的应答基因;定量RT-PCR分析ChDHN在不同器官中的表达,在种子中高丰度表达,其次是雄花序和花芽,在树皮中表达最低。用PCR、酶切和测序鉴定等方法检测已成功构建重组表达载体pET-32a(+)-DHN,将鉴定完全正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经SDS-PAGE分析并经过Western blotting鉴定,表明重组蛋白被IPTG诱导后高效表达出一条比预测分子量18.03 kD大4 kD的融合蛋白。     

冷锻炼诱导甜椒抗冷力的生化机理研究

以喜温植物甜椒抗冷品种1141和不抗冷品种0004为试验材料,研究了冷锻炼对两品种叶片膜质过氧化作用及活性氧清除系统的影响。结果表明:冷锻炼明显提高了甜椒幼苗叶片细胞膜的稳定性及膜保护系统功能。与未锻炼苗相比较,锻炼苗在低温胁迫过程中表现出更高的超氧化物歧化酶(SOD)活性和抗坏血酸(AsA)含量,以及较低的膜质过氧化水平。冷锻炼提高了两品种抵御低温破坏的能力,但对抗冷品种抗冷力的提高作用更大一些。