牛胆汁中蛋白质种类及钙结合蛋白的电泳分析

为了检测健康牛胆汁中主要蛋白质的种类及钙结合蛋白(CaBP)的含量,依据分子质量大小,利用PAGE和SDS-PAGE电泳技术对牛胆汁中的蛋白质进行分析.采用CaCl2溶液沉淀牛胆汁中CaBP后,冉用EDTA溶解沉淀得到CaBP粗提品,粗品经PAGE电泳后用电洗脱方法得到CaBP,然后对其分子质量和含量进行测定.PAGE和SDS-PAGE电泳均显示胆汁中含有6种主要蛋白质,分子质量分别为65.0、58.0、51.0、35.5、15.6、6.6 ku;其中,分子质量最小的是CaBP;健康牛胆汁中CaBP的含量为0.15 mg·mL-1.     

乐果引起大鼠肝细胞凋亡的机理

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(0、3、10、30、100、300μmol/L),染毒122、4 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,探讨乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果显示,肝细胞染毒12、24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3μmol/L组外,与对照组相比差异显著(P0.05或P0.01),且呈时间-剂量效应。3μmol/L组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3~100μmol/L随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300μmol/L组略有下降,除3μmol/L组外,与对照组相比均差异极显著(P0.01);Δψm除24 h 300μmol/L组外均出现持续下降。结果表明,低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和Δψm可能参与了这一过程。     

钙磷对体外培养SD大鼠破骨细胞生成和活化的影响

通过成骨细胞与脾细胞共培养，在体外诱导脾细胞转化为破骨细胞，转化过程中分别加入3、5mmol／L的钙或磷及不同比例的钙、磷，设不添加钙、磷因子对照。经形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色计数、扫描电镜观察象牙片吸收陷窝研究钙、磷因子对大鼠破骨细胞生成和活化的影响。结果表明，培养液中钙、磷浓度分别为3、5mmol／L时对破骨细胞的生成及活化均有显著抑制作用（P〈0．05），5mmol／L Ca对破骨细胞生成活化的抑制与对照组差异极显著（P〈0．01）。Cca：Cp=2：1组对破骨细胞生成和活化的抑制作用最强。证实钙、磷通过抑制破骨细胞的生成和活化抑制破骨细胞的骨吸收活性。     

拉沙里菌素单克隆抗体的研制及间接竞争ELISA检测方法的建立

为制备拉沙里菌素（LAS）单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA（Ci-ELISA）方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分泌抗LAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株C11。经鉴定,C11的抗体类型为IgG1,轻链为κ链;所制腹水效价为1∶16 000,与莫能菌素钠、盐霉素钠、马杜霉素胺、头孢噻吩钠和硫酸链霉素均无交叉反应。用此单克隆抗体建立LAS Ci-ELISA检测方法显示,Ci-ELISA标准工作曲线为y=0.376x－0.2374（R²=0.9914）,LAS在5~1 000 ng/mL时,线性关系良好,IC₅₀为90.22 ng/mL,加标回收率为81.76%~102.41%,表明方法精确度好、灵敏度高。LAS单克隆抗体的制备和Ci-ELISA方法的建立为下一步试剂盒的研发奠定了基础。     

玉米赤霉烯酮对大鼠原代睾丸支持细胞脂质合成的影响

为揭示玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEA)的雄性生殖毒性及其机理，本试验研究了ZEA对大鼠睾丸支持细胞(sertoli cells, SCs)脂质合成的影响。选用大鼠原代SCs作为材料，设置对照组(无ZEA组)、染毒组(不同浓度ZEA处理组),处理24 h后，CCK-8法检测细胞活性，甘油三酯(TG)试剂盒检测TG含量，尼罗红染色检测细胞内脂滴含量，蛋白免疫印迹检测脂肪酸合成蛋白的表达，ATP试剂盒检测细胞内ATP含量。结果显示，染毒组与对照组相比，ZEA浓度为20,30μmol/L时，大鼠SCs活性呈极显著下降趋势；10,20μmol/L ZEA可促使SCs内TG含量的极显著上升(P<0.01),且呈剂量依赖性关系；20μmol/L ZEA可促使SCs内脂滴含量的极显著性上升(P<0.01);各ZEA染毒组的脂质合成相关蛋白PPARγ和SREBP1的表达呈现极显著性上升(P<0.01),FAS呈现上升趋势但无显著性(P>0.05);10,20μmol/L ZEA组ATP呈现极显著性下降(P<0.01)。结果表明，ZEA对大鼠SCs具有一定的毒...     

ZEA、DON及其联合作用对李斯特菌感染小鼠血清免疫相关细胞因子的影响

旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用对细菌感染动物防御能力的影响。试验以小鼠为对象，研究了低剂量的ZEA、DON对李斯特菌感染小鼠血清中免疫相关因子的变化。试验分别设空白对照组(Con)、李斯特菌组(Lis)、10 mg/kg ZEA+李斯特菌组(ZEA+Lis)、1 mg/kg DON+李斯特菌组(DON+Lis)、10 mg/kg ZEA+1 mg/kg DON+李斯特菌组(ZEA+DON+Lis),染毒方式为灌胃，细菌感染方式为尾静脉注射，剂量5×10⁴ CFU。在试验结束后，用抗体芯片技术检测小鼠血清中免疫相关细胞因子的水平。结果显示，与Con组相比，Lis组免疫细胞因子如白介素IL-1β、IL-12P40/P70,集落刺激因子MCSF,趋化因子MIG皆显著升高(P<0.05)。与Lis组相比，ZEA+Lis组IL-1β显著下降(P<0.05),基质金属蛋白酶TIMP-1显著上升(P<0.05);DON+Lis组IL-1β、IL-12P40/P70和MCSF显著下降(P<0.05),趋化因子BLC...