实时荧光定量PCR技术原理与应用

实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。     

豫北地区猪源致病性链球菌的分离鉴定及耐药性试验

猪链球菌(Streptococcus suis)病在世界上广泛分布,是由C、D、L群链球菌引起的猪多种疾病的总称,在临床上有败血型、脑膜脑炎型、关节炎型、支气管炎型和淋巴结脓肿型等.本病流行无明显季节性且发病率和死亡率较高,严重危害养猪业的健康发展.     

一株猪圆环病毒2型的分离与分子鉴定

利用PCR技术初步检测疑似PCV2感染的猪肺脏和淋巴结中的病毒.将样品处理后接种于PK-15细胞.从感染PK-15细胞PCR扩增PCV2基因片段,克隆入pMD18-T载体,并进行序列测定和比较.序列分析结果表明,分离病毒的PCR产物与国内多株PCV2核酸同源性大于98%,说明所分离的病毒为PCV2.     

环境中病毒富集与检测方法研究进展

随着集约化养殖的发展和养殖密度的增大,环境中病毒存在会造成疫病的流行和传播,给人和动物的健康造成严重的危害,对养殖企业造成严重的经济损失。为及时了解养殖环境中病毒情况,需加强致病性病毒的环境监测,形成猪场疾病预警监测机制。作者就环境中的病毒富集和检测方法加以阐述,为进一步完善环境病毒监测预警机制奠定基础。     

河南地区一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及HA基因变异分析

由发病蛋鸡体内分离得到一株禽流感病毒,经PCR、血凝试验和免疫荧光鉴定为H9N2亚型,命名为A/Chicken/henanxy/2010(H9N2),病毒对SPF鸡无致病性,对其HA基因进行克隆测序,HA基因氨基酸裂解位点为PSRSSRGLF,符合低致病性禽流感的分类标准;并将HA基因和自GenBank读取的H9N2病毒的HA基因序列比较,表明河南分离株属于欧亚分支中的Y280-like分支,与A/Chicken/shandongHL/2010(H9N2)氨基酸同源性94.8%,可能是Y280-like个别核苷酸突变的一株。     

河南豫北地区猪圆环病毒病的血清抗体检测与防制对策

猪圆环病毒病在规模化养猪场发生日益普遍,它已成为影响养猪业的主要传染病.我们从新乡市长垣县、封丘县、辉县市、卫辉市、获嘉县、原阳县、新乡县、延津县16个猪场采集各类猪的血清样品109份,其中断奶仔猪血清47份,后备母猪血清30份,经产母猪血清32份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对以上血清样品进行猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)血清抗体的检测.结果共检出阳性血清59份,总阳性率为54.13%(59/109),断奶仔猪抗体阳性率为48.94%(23/47),后备母猪抗体阳性率为56.67%(17/30),经产母猪抗体阳性率为59.38%(19/32).结果显示:所有被检猪场均有PCV-2抗体阳性猪存在,从检测结果可以看出,本市一些猪场正处于PCV-2感染的高发阶段.因此我们必须加强猪群净化、加强饲养管理、搞好环境卫生等综合防制对策来控制该病的发生.     

鸡传染性病毒性腺胃炎研究进展

鸡传染性病毒性腺胃炎是一种以腺胃肿大、腺胃乳头出血溃疡为主要特征的传染病,该病多发生于雏鸡,主要表现为生长停滞和消瘦,剖检除较常见的腺胃炎变化外,还可见胸腺和法氏囊萎缩,胰腺坏死。该病的临床症状、病理变化表现不尽相同,病原众说不一。文章就该病的病原学、流行病学、病理变化、临床症状以及鉴别诊断做了综述。     

猪圆环病毒II型PCR检测方法的研究

【目的】建立快速、简便、特异的检测猪圆环病毒II型的PCR方法;【方法】根据已发表的猪圆环病毒II型基因序列设计合成了一对引物,用酚-氯仿法抽提可疑病料中的病毒DNA,应用PCR技术对猪圆环病毒进行基因扩增,PCR产物进行序列测定;以猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒为对照,进行特异性试验;取部分病料进行重复性试验;【结果】PCR方法扩增出了长度为702bp的片段,扩增产物经测序和序列分析表明扩增的序列为PCV2序列;猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒的PCR扩增均为阴性,与预期结果一致;部分病料PCR重复检测5次,检测结果完全一致;【结论】PCR检测方法可以对猪圆环病毒病作出敏感、特异、准确地诊断,该方法检测的基因最低模板量为2×10-5 ng/ml     

鸡传染性支气管炎研究进展

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,简称IB)是由禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触传染的病毒性疾病。主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统,使病鸡出现呼吸困难、肾脏病变、产蛋下降等症候。 本病首次由Schalk和Hawm(1931)报道,1936年,Beach和Schalm证明其病原为病毒。早期的报道表明传染性支气管炎病毒主要危害幼鸡呼吸道(呼吸型IB),也危及育成鸡和产蛋鸡群,使之抵抗力降低和产蛋下降,蛋品质降低。1962年Winterfield和Hitchner在美国报道了致肾病变传染性支气管炎的出现,证明了IBV的某些毒株主要引起肾脏病变。EI—Houadfi和Jone(1985)在摩洛哥分离出一种     

鸡传染性支气管炎病毒的分型新进展

鸡传染性支气管炎是危害养殖业的重要疫病之一,由于IBV血清型众多,加之IBV基因极易发生变异,因此临床上对于该病的预防常常出现免疫失败。对于IBV的分型目前没有统一的标准,笔者阐述了国内外对IBV的分型新进展,为研究鸡传染性支气管炎病的病原学和疫苗学提供重要的理论依据。