橡胶树多主棒孢病菌毒素的纯化

利用海南橡胶树多主棒孢培养液,通过透析、冷冻干燥浓缩、硫酸铵沉淀以及离子交换层析等方法对粗毒素进行了浓缩与提纯,获得的粗毒素通过生物测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳验证。结果显示,该方法能获得较纯的具有活性的蛋白毒素,其在凝胶电泳中显示分子量约为14.4ku。     

臂形草内生真菌HND5的GFP标记及其抑菌作用

臂形草Brachiaria brizantha内生真菌HND5及其产生的挥发性气体对多种植物病原真菌均有拮抗作用。本研究通过原生质体转化将绿色荧光蛋白（GFP）表达载体质粒pPKNTG转入HND5菌株中,获得了带绿色荧光且遗传稳定的转化子;PCR鉴定结果表明绿色荧光与外源质粒的插入相关。随机选取7个荧光转化子进行拮抗活性评价,发现其中5个转化子及其产生的挥发性气体对多主棒孢Corynespora cassiicola的拮抗活性与野生型菌株HND5相当。该结果为深入研究HND5菌株内生性及生防作用机理奠定了基础。     

内生真菌HND5分子鉴定及其生物学特性研究

HND5具有内生性并且对多种病原真菌有拮抗作用,是一株很有应用潜力的生防菌株。本研究对该菌株核糖体内转录间隔区和β微管蛋白基因内转录间隔区进行了分析,其序列和紧密枝顶孢同源性最高。生物学特性研究表明其生长最适培养基为PDA,最适温度为28℃,最适pH为7,最适碳氮源分别为蔗糖和硝酸钠,菌株对重铬酸钾具有耐受性。     

海南长春花小叶病植原体16S rDNA基因片段的比较分析

从海南儋州地区的长春花上采集了表现小叶症状,疑似植原体感染的病样,利用植原体165 rDNA通用引物对R16mF2/R16mR1,应用PCR技术从该样品的总DNA提取物中扩增到预期大小的特异片段(约1.4kb),该片段的序列分析及系统关系树构建的结果表明,该片段与16Sr Ⅰ组中的植原体同源率均达到99%以上,而与其它组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于96%,与16Sr Ⅰ组植原体缬草黄化、翠菊黄化、桑萎缩和玉米丛矮等在同一条进化枝上.故初步认为引起海南长春花小叶病的植原体应归属于16Sr Ⅰ组,将其暂命名为长春花小叶植原体海南株系(Periwinkle little leaf phytoplasma strain Hainan,PLL-Hn).     

橡胶树多主棒孢菌rDNA–ITS区的分子鉴定及检测

以来自国内外的18个多主棒孢病菌[Corynespora cassiicola(Ber.&Curt.)]菌株为研究材料,提取其基因组DNA进行rDNA-ITS区序列扩增,并进行了5.8S rDNA及其两侧ITS序列分析.序列分析结果表明,种内各菌株间ITS序列同源性高达99.9%以上,部分菌株间出现个别碱基的差异.根据ITS区序列设计的一对特异引物(CorP1/CorP2)可以在供试的多主棒孢病菌中扩增出1条约277 bp的特异谱带,其余18个参试菌株和橡胶树叶片组织未能扩增出该特异谱带,检测灵敏度可达浓度为0.1 pg的目标DNA.     

马铃薯腐烂茎线虫在国内危害马铃薯的首次报道

马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor Thorne）是国际公认的检疫性线虫，也是严重危害马铃薯的重要病原之一。Kuhn首次观察并描述此线虫危害马铃薯块茎，引起马铃薯干腐病，但在该种线虫被正式描述以前，一直被认为是鳞球茎茎线虫（D．dipsaci）的一个株系或小种，直至1945年，Thorne才将其确定为独立种，即马铃薯腐烂茎线虫。此后，该线虫在世界许多国家和地区报道发生，主要危害马铃薯，但在我国主要危害甘薯，未见该线虫危害马铃薯的直接报道。     

海南苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白基因片段序列分析

【目的】利用分子生物学方法分析采自海南儋州的苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白(rp)基因,从亚组水平上确定苦楝丛枝病植原体的分类地位。【方法】利用植原体核糖体蛋白基因通用引物对rpF1/rpR1,应用PCR技术对苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白基因进行扩增,对其核苷酸序列进行测定并分析。【结果】通过PCR扩增得到约1.2 kb的特异片段,测序结果表明该片段长1 240 bp,包括rps19基因的3′区域,rpl22和rps3基因的全部区域。进一步分析发现,该片段与苦楝丛枝病贵州株系(Chinaberry witches’-broom,CWB-GZh)的亲缘关系最近,核苷酸同源性达99.9%。基于核糖体蛋白基因核苷酸序列,构建了海南苦楝丛枝病植原体与其他18个已知分类地位植原体的系统分类树状图,结果表明,引起海南苦楝丛枝病的植原体与16SrⅠ-B亚组植原体越南苦楝黄化、苦楝丛枝贵州株系和苦楝丛枝云南株系在同一条进化枝上。【结论】报道了海南苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白基因序列,海南苦楝丛枝病植原体属于16SrⅠ-B。     

海南香蕉VA菌根形态结构初步观察

对海南5个地区的香蕉VA(泡囊丛枝)菌根进行了初步研究。结果表明,菌根存在香蕉的根毛区和近假茎区的皮层组织中,以根毛区最多,形成率在90%以上。用湿筛倾析要蔗糖梯度离心法,分离土壤中VA菌根真菌的孢子,初步鉴定其为球囊霉属、类球囊霉属和巨孢霉属3类。     

海南香蕉VA菌根形态结构初步观察

对海南5个地区的香蕉VA(泡囊丛枝)菌根进行了初步研究.结果表明,菌根存在香蕉的根毛区和近假茎区的皮层组织中,以根毛区最多,形成率在90%以上.用湿筛倾析一蔗糖梯度离心法,分离土壤中VA菌根真菌的孢子,初步鉴定其为球囊霉属、类球囊霉属和巨孢霉属3类.     

橡胶树内生细菌多样性初探及拮抗菌株的筛选

经过严格的表面消毒后,从成年橡胶树各组织中分离47份内生细菌.各组织中的内生细菌数量和种类由多到少分别为树根、花序、树皮、叶柄、叶片和果实.以橡胶树多主棒孢病菌Corynespora cossiicola(Berk & Curt.)Wei和炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides Penz.为指示菌,从中筛选出有较好作用的2个菌株,菌落形态观察、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析表明它们是枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和莫哈韦芽孢杆菌B.mojavensis.