DNA分子标记在植物真菌病害研究中的应用

小麦纹枯病是一种重要的土传病害,在世界各地均有发生,我国主要发生在黄淮海流域的冬小麦产区,造成巨大的产量损失。国内外均有报道小麦品种之间存在抗病性差异,但关于抗性筛选的研究较少。作者于1993～1995年通过室内接菌试验、田间接菌试验和自然病地调查,对102个常见的小麦品种(系)和育种材料进行了鉴定,结果如下。 1 材料与方法     

共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建

以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-H1基因。按常规方法克隆进pEF6V5His A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48h后进行间接免疫荧光试验,72h后用Blasticidin进行筛选,挑选出能稳定表达B7-H1的细胞株。结果表明：成功地克隆小鼠B7-H1基因并构建了用于表达B7-H1基因的真核表达载体,经间接免疫荧光试验证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经Western-blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-H1基因。     

利用90k芯片技术进行小麦穗部性状QTL定位

小麦穗部性状与产量密切相关,挖掘穗部性状基因及其关联分子标记具有重要意义。本研究以周8425B?小偃81衍生的RIL群体(F8)为材料,利用90k芯片标记构建的高密度遗传图谱对3个环境下的穗长、小穗数、不育小穗数、穗粒数、千粒重进行QTL定位。共检测到19条染色体上的71个QTL,变异解释率(PVE)范围为2.10%~45.25%,其中37个位点为主效QTL(PVE10%)。QSl.nafu-6A.2(穗长)、QSl.nafu-7A(穗长)、QSsn.nafu-2A.1(不育小穗数)、QSsn.nafu-2D(不育小穗数)和QGns.nafu-2B(穗粒数)在多个环境中被检测到,且LOD10,PVE20%。位于同一个基因簇中的QSl.nafu-6A.2(穗长)、QGns.nafu-6A(穗粒数)和QTgw.nafu-6A(千粒重)在多个环境中被检测到,且与已报道的相关位点位置相同或相近,在分子标记辅助育种中具有较大参考价值。     

双价多肽抗生素转基因马铃薯的培育

为了提高马铃薯对细菌性病害的抗性,以来源于膜翅目昆虫的新多肽抗生素Apidaecin为目的基因,以多肽抗生素Shiva-Ⅰ为对照,对多肽抗生素在马铃薯抗青枯病基因工程中的应用进行了研究。采用农杆菌介导的方法,用含有Apidaecin Shiva-Ⅰ双价基因的植物表达载体pBinPRSIHbI对马铃薯栽培品种米拉、中-5-1、Favorata和尼勒克进行了遗传转化试验,共获得卡那抗性再生植株31个,获得了最佳的植株再生分化体系和遗传转化条件。PCR检测及RT-PCR分析表明,目的基因已成功地整合到转基因植株的染色体上并在转基因马铃薯中进行了转录。     

干旱区黑果枸杞光合电子传递速率对施氮的响应

为探明干旱区栽培黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)叶片光合电子传递速率(J)对施氮的响应,进一步完善施氮对光合特性的影响机理,本试验设置5个不同施氮(尿素,N,46％)量处理(0、0.05、0.10、0.15和0.20kg·株-1),测定各处理下黑果枸杞在不同光照强度(PAR)和CO2浓度下叶片...     

螺杆菌属LAMP快速检测方法的研究

螺杆菌与人和动物多种疾病发生的相关性一直是国内外研究的热点之一,而各类螺杆菌感染日益引起人们的关注。为建立一种螺杆菌属通用的LAMP快速检测方法,根据螺杆菌属16S rRNA基因序列保守区域设计一组特异性引物,进行条件优化、特异性和敏感性试验。结果表明:在65℃反应60 min的条件下建立的螺杆菌属LAMP扩增反应最佳,并呈良好特异性,未检测到其他常见细菌。灵敏度达3 pg·μL~(-1),与PCR结果无差异,但操作上更易于完成。该方法快速、准确、灵敏,可用于螺杆菌的快速检测。     

植物青枯菌Po82菌株Ⅵ型分泌系统中hcp基因的克隆及其功能研究

Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是新近报道的细菌蛋白分泌系统。基于植物青枯菌致病力分化菌株Po82的全基因组测序结果,发现其大质粒中存在T6SS的同源基因簇。本文通过基因敲除的方法构建了Po82菌株Ⅵ型分泌系统中的核心基因—hcp基因的缺失突变株,并比对了Po82野生型菌株、突变株及互补菌株在致病性、生长速率、运动性、生物膜形成等方面的变化。结果表明,hcp基因突变株较野生型菌株致病力显著减弱,病程延长;在生长速率、运动性及生物膜形成方面,突变株较野生型无明显差异。说明植物青枯菌Po82菌株T6SS中的hcp基因参与了细菌的致病过程。     

应用PCR方法调查实验大小鼠螺杆菌感染情况

通过聚合酶链反应(PCR)对上海地区实验大鼠、小鼠的螺杆菌携带情况进行调查,并用5种啮齿动物螺杆菌特异性16SrRNA基因引物对螺杆菌属阳性样品进一步鉴定,为我国实验动物微生物等级及监测标准的制定提供参考依据。结果表明:实验大鼠阳性率为70.3%(71/101),其中清洁级、SPF级分别为69.6%(48/69)和71.9%(23/32);实验小鼠阳性率为35.8%(126/352),其中清洁级、SPF级阳性率分别为51.5%(52/101)和29.5%(74/251)。5种啮齿动物螺杆菌特异性16SrRNA基因引物进一步分析,结果显示在携带螺杆菌的107只小鼠及68只大鼠中,主要携带的是H.rodentium、H.hepaticus和H.bilis 3种。上海地区实验大、小鼠皆存在不同程度的螺杆菌感染,PCR法可用于实验大小鼠螺杆菌感染状况的初步调查和流行病学监测。     

灭鼠有方

印尼西爪哇省南安由县的威拉加南村近年来鼠患猖撅,1984年该村1/3的稻谷、80％的大豆被老鼠糟踏掉。为了消灭鼠害,该村村长1985年7月制定了村规民约:在收获季节,每一户主和将要结婚的新郎,必须交10条老鼠尾巴,拥有打谷机的户主交100条,要离     

大白鼠牙髓组织超微结构的观察

为研究大白鼠牙髓组织超微结构与牙本质组织学的联系，采用电镜对10只大白鼠牙髓组织及牙本质的超微结构进行观察；并对牙齿硬组织的固定、脱钙方法进行探讨。结果，（1）全牙组织固定保持牙髓与牙本质的原位、原貌，使其呈现正常解剖关系。（2）选用50mL/L硝酸乙醇脱液，可维持牙髓组织细胞内外环境渗透压的相对平衡，使组织细胞接近于正常生物特性。（3）牙髓组织中含有成牙本质细胞，其胞质伸入牙本质基质中，且有细胞器存在，核周围有明显的高尔基复合体，胞质中出现电子密度高的圆形颗粒；牙髓细胞有丰富的细胞器及扩张的粗面内质网，其腔内有着色均匀的电子密度中等的絮状物质，在牙髓细胞之间有呈颗粒状细丝物质含有胶原原纤维及柯夫（Von kroff）纤维，此外尚有组织细胞及未分化的间叶细胞。提示，大白鼠的牙髓及牙本质的组织结构具有人牙髓的一般生物性质，可作为人工龋及牙周组织疾病发病机理的研究及临床防龋药物及口腔充填材料的易感实验动物。