利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究

利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。     

不同培养方法及培养密度对绵羊腔前卵泡发育的影响

通过对绵羊腔前卵泡培养方法的研究,能够探索出适宜绵羊腔前卵泡生长发育的培养条件,以及为进一步揭示绵羊卵泡生长发育的规律奠定一些基础。试验一通过使用微滴法和琼脂培养基法培养腔前卵泡,观察其对绵羊腔前卵泡生长的影响;试验二通过绵羊腔前卵泡单独培养与群体培养,探讨不同培养密度对绵羊腔前卵泡生长的影响。试验结果显示,使用微滴法与琼脂培养基法培养的绵羊腔前卵泡,在培养3天时,卵泡直径增加值和存活率差异均不显著(P0.05);但培养6天时,琼脂培养基法培养的腔前卵泡的直径增加值和存活率均极显著高于微滴法培养的腔前卵泡(P0.01);在使用琼脂培养基培养的条件下,对绵羊腔前卵泡进行单独培养和群体培养,在培养的6天时间内二者卵泡直径增加值和存活率差异均不显著(P0.05)。试验结果表明,琼脂培养基法是较为适宜的绵羊腔前卵泡体外培养方法;培养密度对绵羊腔前卵泡体外培养并无显著影响。     

犬隐睾症中双氢睾酮水平及其合成酶的表达

【目的】探明单侧犬隐睾症中阴囊睾丸与腹腔睾丸组织内5α-还原酶1型(5α-reductase 1, 5α-red1)、5α-还原酶2型(5α-reductase 2, 5α-red2)与雄激素受体(Androgen receptor, AR)的表达模式。【方法】应用HE染色观察阴囊睾丸和腹腔睾丸的组织形态变化,利用免疫组织化学技术分析5α-red1、5α-red2和AR在阴囊睾丸和腹腔睾丸中的表达定位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定双氢睾酮(Dihydrotestosterone, DHT)浓度在单侧犬隐睾症中阴囊睾丸与腹腔睾丸中的水平变化。同时,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析5α-red1、5α-red2和AR的转录和翻译水平。【结果】结果显示腹腔睾丸组织中胶原纤维增多,曲精小管内精原细胞和成熟精子消失,同时5α-red1、5α-red2和AR在腹腔睾丸和阴囊睾丸中的间质细胞、支持细胞中均有表达。腹腔睾丸中DHT水平显著降低,5α-red1、5α-red2及AR转录水平和翻译水平在阴囊睾丸中的表达均显著高于腹腔睾丸。【结论】单侧...     

整合素αvβ3在人工受精奶牛受孕前后表达规律研究

本试验通过对10头荷斯坦奶牛在受孕前后的整合素αvβ3表达变化规律与奶牛早期妊娠关系的研究,筛选早期妊娠检测标志性因子,从而提高奶牛的繁殖效率。试验表明,选取的10头荷斯坦奶牛中有7头受孕3头未受孕,检测发现,10、13、16、19d,αv基因和β3基因转录及整合素αvβ3表达水平在受孕奶牛血液中的表达量均高于未孕奶牛,特别是输精后第16d受孕奶牛的表达量显著高于未孕奶牛。因此,αvβ3检测可将早孕检测的时间窗口提前到人工输精后第16d。     

不同分离方法及培养方式对绵羊腔前卵泡发育能力的影响

研究的目的在于分析用不同的方法分离绵羊腔前卵泡以及用不同的培养方式对分离得到的腔前卵泡进行培养,对于绵羊腔前卵泡存活和发育能力的影响。实验分两部分进行：实验1为分离卵巢皮质,分别用显微分离法和胶原酶法分离腔前卵泡。实验2是在实验1的基础上,将较优方法获得的腔前卵泡分别进行单独培养和群体培养。结果显示,显微分离法与胶原酶法相比,在获得的腔前卵泡数量上差异不显著,但显微分离法获得的腔前卵泡基膜完整率显著高于胶原酶法（P<0.05）。获得的腔前卵泡使用单独和群体两种方式进行培养,其直径增加值在第三天和第六天差异不显著,但单独培养法在第三天和第六天的存活率显著高于群体培养法（P<0.05）,且有卵泡腔形成。研究显示使用显微分离法分离腔前卵泡与胶原酶法相比具有优势,相对简单,廉价并且对卵泡的损害很小。经显微分离法获得的腔前卵泡,使用单独培养法进行培养能够促进卵泡的生长发育。     

舍饲绵羊同期发情效果观察

试验采用阴道埋置孕酮海绵栓 肌肉注射PMSG法和肌肉注射PG法对具有正常发情周期和未知发情周期的舍饲绵羊进行同期发情处理.结果表明,两种方法均可使母羊在1～2 d内集中发情,但具有正常发情周期活动的母羊同期发情率好于未知发情周期的正常母羊,且PMSG注射剂量以200 IU好于240 IU;一次PG处理效果显著.     

利用水平微注射技术制备转基因兔的研究（英文）

利用常规微注射系统进行原核胚转基因时,由于其透光性能较差,操作不便等原因,使外源基因导入效率很低,另外其开放构造也易造成污染。为了解决这些问题,本研究有针对性地设计了新型的水平微注射系统,利用此系统,可明显缩短常规注射原核胚的平均时间,注射后原核胚的分裂率、8～16细胞胚胎发育率也明显提高。此外,利用该系统还可在低倍镜下（×100）将DNA常规注射量减半注射,提高了原核胚注射后的成活率,其注射胚的外源基因整合率亦明显提高。采用水平微注射系统,以pMT-hIGF-1为目的基因,在移植产下的24只仔兔中,有5只经Southern blot检测,证明为整合外源基因的转基因兔。     

E2通过p38MAPK及PI3K/Akt信号通路调控奶牛子宫内膜上皮细胞中COX-2的表达

为了探究p38 MAPK及PI3K/Akt信号通路是否参与雌二醇(E2)对奶牛子宫内膜上皮细胞中COX-2的表达及PGF2α分泌的调节,通过体外培养妊娠早期奶牛子宫内膜上皮细胞,并添加E2单独或联合p38 MAPK抑制剂SB203580和PI3K抑制剂LY294002处理奶牛子宫内膜上皮细胞.通过Western Blo...     

咖啡因和维生素E对小尾寒羊精液冷冻保存的影响

研究冷冻稀释液中分别添加不同浓度的咖啡因和维生素E后对小尾寒羊精液冷冻保存的影响。将不同浓度的咖啡因和维生素E分别添加于冷冻前的小尾寒羊精液稀释液中,用精子活率、顶体完整率和畸形率,作为判定精子冷冻品质的指标,初步确定2种稀释液添加成分对小尾寒羊精液品质的影响。当添加维生素E的浓度为0.4mg/mL时,冷冻后的精子活率较高,畸形率较低,且精子顶体完整率也较高;添加5mg/mL咖啡因能显著提高精子的解冻后活率,其活率为0.35,对精子畸形率和顶体完整率无显著影响。在冷冻精液稀释液中添加适当浓度维生素E可以减缓冷冻对精子的伤害,提高小尾寒羊冷冻精子活率,改善冷冻精液的品质;当添加5mg/mL的咖啡因于稀释液中冷冻时,解冻后精液活率显著提高,但不影响精子畸形率和顶体完整率。     

硒代蛋氨酸对种公鸡精液品质及精浆抗氧化能力的影响

[目的]探究日粮中添加硒代蛋氨酸对种公鸡的精液品质和精浆抗氧化能力的影响。[方法]试验选取120只健康、体况相近的378日龄罗曼褐蛋用种公鸡,随机分为2组,对照组饲喂基础日粮,处理组在基础日粮中添加硒水平为1 mg/kg的硒代蛋氨酸,预饲期7 d,正试期28 d,每周采集精液,进行精液品质以及精浆抗氧化能力的测定。[结果]与对照组相比,处理组种公鸡精液量差异不显著(P>0.05),处理组精子密度、精子活率和精子活力极显著提高(P<0.01);与对照组相比,处理组谷胱甘肽过氧化物酶活性和超氧阴离子清除自由基能力显著提高(P<0.05),总超氧化物歧化酶活性和羟自由基清除能力极显著提高(P<0.01),但丙二醛含量差异不显著(P>0.05)。[结论]日粮添加硒含量为1 mg/kg的硒代蛋氨酸可以显著提高精液品质和精浆抗氧化能力,为后续提高种公鸡繁殖性能的营养调控提供理论支撑。