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毛白杨ISSR反应体系的建立及优化 总被引:10,自引:0,他引:10
为应用ISSR技术开展毛白杨遗传变异分析、辅助育种、品种鉴定、系统进化等研究,以(GTG)6为引物,通过单因子实验分别研究了退火温度、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶用量对毛白杨ISSR-PCR反应的影响,建立并优化了适宜于毛白杨ISSR分析的扩增体系: 20 μL PCR反应体系,1×Taq DNA酶缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl, 50 mmol/L KCl, 0.1% Trion X100, pH 9.0),1.5 mmol/L MgCl2,1.0 U Taq酶,10 ng模板DNA,0.2 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTP. 引物(GTG)6的最适退火温度为61℃. 相似文献
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采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。 相似文献
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以收集于云南和四川的52株滇杨优树为试验材料,并以1株大叶杨、1株北京杨和2株黑杨做类外对照,采用AFLP分子标记技术进行基因组DNA水平检测。结果表明,筛选出的8对EcoRⅠ+3/MseⅠ+3引物组合对52株滇杨优树共扩增出264条带,其中多态性条带174条,多态带百分率为64.52%,检测到有效等位基因数(Ne)为1.184,基因多样度(H)为0.121,Shannon信息指数为0.201,平均遗传相似系数为0.877;对56份杨树样本共扩增出325条带,其中多态性条带共247条,多态带百分率为75.21 %,检测出有效等位基因数(Ne)为1.185,基因多样度(H)为0.122,Shannon信息指数为0.209,平均遗传相似系数为0.876。UPGMA聚类分析结果显示,除滇杨优树QXB007与QXJ030外,其余杨树分析样本均能够被鉴别。基于采集地和遗传相似系数的模糊聚类分析表明,52株滇杨优树除开远采集地外,丽江采集地样本与其他采集地样本之间均有交集,说明丽江可能是滇杨的分布中心和起源中心。该研究结果为滇杨人工选择育种、遗传改良、种质资源收集与保存等提供了理论依据。 相似文献
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以紫叶生菜、紫菘及紫甘蓝为试材,设置红光和蓝光2种光质(以白光为对照)进行处理,采用乙醇研磨法、蒽酮-H2SO4法、3,5-二硝基水杨酸法及碘量法,研究了3种蔬菜在不同光质下光合色素含量以及营养品质指标的变化,以期为不同种类蔬菜育苗期间光质条件提供参考依据。结果表明:3种蔬菜对不同光质的适应性存在差异,与白光相比,红蓝光可促进紫甘蓝种子萌发且红光效果较好;红光对3种蔬菜胚根、下胚轴长度、叶长和叶柄长度均具有促进作用,同时红光可增加紫叶生菜和紫甘蓝叶绿素a、类胡萝卜素、可溶性总糖及淀粉含量,但抑制维生素C合成,蓝光对3种蔬菜类胡萝卜素和维生素C合成具有促进作用。因此,可根据不同植物物种设置不同的光质条件,从而提高蔬菜的生长特性或改善其品质。 相似文献
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引进葡萄柚品种基因资源的AFLP分析 总被引:3,自引:0,他引:3
采用AFLP分子标记技术,对引进的9个葡萄柚品种基因资源进行分析,评价引进资源的遗传多样性,揭示遗传结构和品种间亲缘关系,为引进葡萄柚品种的进一步开发利用和遗传改良提供基础信息。结果表明,筛选出的7对引物共扩增出263条带,多态带比率为7.22%。多态性标记百分率、观测等位基因数、有效等位基因数、Nei’s基因多样性指数和Shannon信息指数在物种水平分别为7.22%、0.023 4、0.008 0、0.6592和0.258 5,而在品种水平它们分别为2.41%、1.024 1、1.013 2、0.008 0和0.012 2。基因分化系数Gst为0.659,表明葡萄柚的遗传差异主要来自于品种之间。9个品种间的遗传距离变幅在0.000 5~0.037 1之间,平均为0.025 8。基于UPGMA的聚类结果将9个品种分为2组,火焰、矮化、亨路比、哈路比、帕利斯和瑞路比聚为一组,里德马叙、里约红和星路比构成另一组。 相似文献
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高质量RNA的提取是开展云南栘[木衣]分子生物学研究的前提。采用OMEGA (Plant RNA Kit 50)试剂盒、TIANGEN(TRNzol-A+Reagent)试剂盒、CTAB法、Trizol法、SDS法及其改良法6种方法提取云南栘[木衣]叶片的RNA,并用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测仪及RT-PCR技术比较了6种不同方法提取的总RNA样品的质量。结果表明,2种试剂盒法和trizol法不适合云南栘[木衣]RNA提取,无法得到28S、18SrRNA条带,CTAB法和SDS法虽能得到RNA的3条带,但拖带现象严重,A260/A230的比值较低,对SDS法进行改进,提高β-巯基乙醇的量,在缓冲液中增加PVP,使用HiBind RNA Mini柱,有效地抑制多酚多糖的污染,得到了较高质量、可用于RT-PCR扩增的云南栘[木衣]的RNA。对其开展分子生物学研究提供技术支撑。 相似文献
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