规模化畜禽养殖场粪便中多重耐药菌分离鉴定及其耐药特征

为了解禽畜粪便中多重耐药菌的污染特征,本研究对鸡粪、牛粪、猪粪和有机肥这4种不同样品中多重耐药菌进行了计数分析,并对不同来源的多重耐药菌株进行了分离和纯化,进一步开展了基于16S rDNA序列比对的分子生物学鉴定以确定其种属地位,以及基于药敏试验的耐药性特征分析。结果表明:不同养殖动物粪便中四环素、恩诺沙星、磺胺甲恶唑和泰乐菌素4种抗生素多重耐药菌的绝对数量和相对数量排序均为鸡粪>猪粪>牛粪,粪源有机肥中可培养的多重耐药菌的绝对数量和相对数量在堆肥后均有所下降。通过对耐药菌株鉴定和分类学分析,发现禽畜粪便中多耐药菌的菌门集中分布在Proteobacteria、Firmicutes和Actinobacteria,多重耐药菌的优势菌属为Escherichia、Corynebacterium、Kurthia;而有机肥样品中多重耐药菌的优势菌属为Staphylococcus、Glutamicibacter。菌株的药敏试验表明,3类动物粪污中的多重耐药菌都对红霉素、四环素有着较高的耐药率,均高于80%,而对阿米卡星这种抗生素表现出较好的敏感性,其耐药率低于30%。通过对Ⅰ、Ⅱ类整合子基因盒的扩增,发现PCR产物的大小从0.8 kb到1.8 kb不等,基因盒ad A2、dfr A17、dfr A1及sat2在养殖场粪污中检出率均较高。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及中药药敏试验

从数例疑似副猪嗜血杆菌病猪的肺脏和心包积液中分离到3株革兰氏阴性细小杆菌,经涂片镜检、生化试验和PCR鉴定,确定分离的3株菌为副猪嗜血杆菌.中药药敏试验结果表明,副猪嗜血杆菌对金银花及其组成的复方敏感,且复方作用效果优于单方.     

鸡TIGAR基因真核表达质粒的构建及其抗凋亡功能评价

【背景】 TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR）是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和去除活性氧（Reactive oxygen species,ROS）并降低由活性氧诱发的细胞凋亡水平。【目的】 构建鸡源TIGAR基因的真核表达质粒,并检测TIGAR基因在DF1细胞中的抗凋亡作用,为建立稳定表达鸡TIGAR基因的细胞系做准备。【方法】根据GenBank（登录号：XM_417232.6）中预测基因设计引物,利用RT-PCR的方法从SPF鸡脾脏中扩增鸡TIGAR基因,将扩增产物克隆至载体（Flag-CMV14）后送公司测序验证;随后构建进化树对鸡TIGAR基因与其他哺乳动物及水生动物的TIGAR基因进行同源性分析。将重组质粒（Flag-TIGAR）转染入DF1细胞24 h后,使用新城疫病毒诱导细胞凋亡,利用Western Blot检测重组质粒表达情况以及Poly ADP-Ribose Polymerase（PARP）裂解情况。此外还将重组质粒（Flag-TIGAR）转染入DF1细胞,并于收样前2 h使用Staurosporine刺激细胞发生凋亡,分别在转染后24、48 h收集样品,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】 RT-PCR扩增TIGAR基因,在843 bp处出现目的条带与预测相符,构建的TIGAR真核表达质粒（Flag-TIGAR）经测序,结果显示其序列与GenBank上预测的基本一致。Western Blot结果显示在30 h、36 h收集的样品中PARP均被裂解且转染重组质粒（Flag-TIGAR）的实验组与未转染质粒（MOCK）组或转染空载体（Flag-CMV14）组的样品相比,裂解的PARP表达量明显降低,且差异极显著（P<0.01）。流式结果显示：24 h 检测转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为11%（早期凋亡7.8%,晚期凋亡3.2%）,而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率仅为4%（早期凋亡3.7%,晚期凋亡0.3%）,转染Flag-CMV14的早期凋亡率和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR组,且差异显著（P<0.05）。48 h转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为20.3%（早期凋亡14.3%,晚期凋亡6.0%）,而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率为6.4%（早期凋亡4.8%,晚期凋亡1.6%）,转染Flag-CMV14组的细胞早期凋亡和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR的组,且差异极显著（P<0.01）。【结论】成功扩增出鸡TIGAR基因,并构建了其真核表达质粒,通过Western Blot和流式实验均证实过表达TIGAR后可降低细胞的凋亡程度并有利于细胞存活。     

利用野猪改良台系杜洛克猪生产性能的研究

台系杜洛克猪具有良好生产性能,已成为浙江省猪三元杂交的主要终端父本品种,但在长期生产实践中也暴露一些不足之处,影响它的推广利用.我们拟导入野猪血液,来克服台系杜洛克猪的缺点以进一步提高它的生产性能,使它在浙江省乃至全国的养猪生产中发挥更大作用.本研究是全面测定导入12.5%野猪血液的台系杜洛克猪的生产性能和一些重要生物学特性,了解它是否能作为选育台系杜洛克新品系的基础.通过以肥育性能对比试验为核心的6个方面35个项目的测定,基本明确:导入12.5%野猪血液的台系杜洛克猪保持了原台系杜洛克猪的体型结构和产仔数水平(头胎9.4头/胎),继承了台系杜洛克猪的生长快(日增重699g)、胴体瘦肉率高(65.99%)等优点,吸取了野猪的饲料利用率高(全程料重比2.47:1)、屠宰率高(72.6%),肌纤维细(56.85 μm)、肌纤维间隙大(21.08 μm)、肌肉失水率低(17.31%)、肌肉营养成分含量高(粗蛋白23.3%,成人7种必需氨基酸总量8.35%)、抗病力强(球蛋白含量39.69/L,淋巴细胞数量11亿个/L)等特点,使台系杜洛克的性能得到进一步完善和提高,作为一个较好的杂交组合,可作为选育台系杜洛克新品系的基础.此外,我们在研究中还发现野猪在杂交改良中,在肉质性状和抗病力性状上是以中间遗传方式传递其遗传特性,杜洛克猪的只要在肌纤维未"老化"前的适当年龄屠宰利用,也可使其食用品质处于良好状态.纠正过去认为杜洛克猪肉粗老不好吃的片面观念,这对食品行业很有意义.     

集约化养鸡场空气环境中生物气溶胶特点研究

为了给北京地区不同类型养鸡场空气环境中生物气溶胶的危害评价提供基础数据,对蛋鸡和肉鸡两种养殖方式下,鸡舍内外空气环境中生物气溶胶的浓度和粒径分布进行检测,并对大肠菌群和抗生素抗性菌进行了分析。结果表明,北京郊区(县)蛋鸡舍内,所调查的五种生物气溶胶(细菌、真菌、大肠菌群、四环素和红霉素抗性菌)浓度高于同地区肉鸡舍(P<0.05)。蛋鸡舍内空气中约50%的细菌气溶胶分别具有四环素和红霉素抗性;大肠菌群、四环素抗性大肠菌群和红霉素抗性大肠菌群的平均浓度分别为7.32×103、2.87×103CFU·m-3和3.31×103CFU·m-3。两种养殖方式下细菌和真菌气溶胶粒径分布规律有所差异,导致其在细颗粒物中所占比例不同。     

超声波辅助提取荆芥叶中总黄酮的方法研究

本试验运用超声波辅助技术提取荆芥叶中的总黄酮,用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮的含量。通过单因素试验、正交试验、对照试验,确定荆芥中总黄酮提取的最佳方案:超声功率700 W,荆芥质量2.00 g,温度45℃;物料比1∶60,乙醇浓度70%,提取时间为15 min。最后得荆芥中总黄酮的最大提取率为1.592%。     

立秋正值管葱时

大葱幼苗缓慢生长,渡过炎夏,迎来了凉爽的秋天.立秋后(8月上旬),天气渐凉,昼夜温差逐渐加大,大葱生长进入旺盛期,立秋至秋分(9月中下旬)前,是葱白形成决定产量的阶段.此期管理应追好发棵肥、浇好灌浆水、防治病虫害.