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选择覆盖肾综合征出血热病毒(HFRSV)膜蛋白(MP)基因的保守区核苷酸序列合成2对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提RNA,建立了RT-PCR检测鼠体恙螨及游离恙螨体内HFRSV-RNA的方法,扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示,HFRSV抗原阳性鼠体恙螨50只组、10只组、游离螨50只组,HFRSV抗原阳性鼠肺1000mg、500mg组经RT-PCR检测为阳性;HFRSV抗原阳性鼠体恙螨5只组,HFRSV抗原阴性鼠体恙螨50只和10只组,游离螨10只和5只组,鼠肺HFRSV抗原阳性100mg组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录-聚合酶链反应(NestedRT-PCR)检测,在RT-PCR未测出HFRSV-RNA的各组中均检测有HFRSV-RNA。结果表明NestedRT-PCR具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量HFRSV-RNA,为确认恙螨作为HFRSV的传播媒介提供了分子生物学证据。 相似文献
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一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立 总被引:1,自引:3,他引:1
建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。 相似文献
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干番茄渣可用于反刍动物的替代营养饲料。据有限的文献资料显示,用干番茄渣代替豆粕会降低瘤胃发酵和微生物合成能力。在本试验中,用装瘤胃瘘管的肉牛来验证用干番茄渣代替豆粕是否会对采食、瘤胃发酵和氮代谢造成影响。用拉丁方设计饲喂试验,受试牛分别饲喂混入3.2%、8.0%和11.2%干番茄渣的全混日粮。结果发现,用干番茄渣代替饲料中豆粕不影响采食量,但是改变了瘤胃发酵指标,即增加干番茄渣摄入量导致瘤胃pH值升高和氨浓度增加,并且呈摄入量依赖性增加,但是挥发性脂肪酸浓度和瘤胃微生物数量并未改变;饲料中添加高水平干番茄渣使血液中尿素浓度呈线性、剂量依赖性增加。很明显,胃肠道对中性和耐酸纤维的总消化率并未受番茄渣的影响。饲喂番茄渣增加了粪氮的排泄,从而降低了尿氮的排泄量。用干番茄渣代替豆粕影响肉牛瘤胃发酵和氮的代谢,但是实际上对反刍动物生产性能的影响还不能确定。 相似文献
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为研制均匀、稳定的猪瘟病毒(CSFV)核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为(5.1±0.7)×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。 相似文献
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奶牛子宫内膜炎是引起奶牛不孕的常见疾病之一。我县一规模奶牛场共存栏奶牛约980头,其中成年适繁母牛460头,均为全年舍饲饲养。2010年该场奶牛子宫内膜炎发病率高达55%以上,严重影响了本场的生产和发展。该实验从我县一规模奶牛场中共收集病例100头,分成4组,每组25头,经过2个疗程的治疗和对比试验,结果表明使用宫净康进行子宫内灌注治疗奶牛子宫内膜炎效果非常好。 相似文献