羊白细胞介素-18成熟蛋白的酵母表达和生物学活性研究

为了研究重组羊白细胞介素(gIL)-18在酵母系统中的高效表达,进一步阐明该重组蛋白的生物学活性,以含有gIL-18基因的重组质粒为模板进行PCR扩增,构建重组表达质粒pPICZ-gIL-18,转化于毕赤酵母GSll5,以甲醇诱导表达,经sDS-PAGE和western blot分析证实了重组蛋白的表达,分泌的重组gIL-18表达量为100 mg/L.经纯化后用MTT法和MDBK-VSV法检测表达的重组IL-18体外生物活性,利用免疫试验检测了重组蛋白对羊痘疫苗的免疫增强作用.实验结果表明,该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性,比活性为1.5×105 u/mg.体外具有增强羊痘疫苗的活性.毕赤酵母分泌表达的重组gIL-18具有良好的生物学活性,为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的大规模应用奠定了基础.     

《动物微生物学》实验教学模式的探讨

以《动物微生物学》课程整合和建设国家精品课为契机,加强实验教学。从引导学生树立安全节约、无菌操作、实事求是、学以致用的＂四种观念＂入手,培养＂四步学习＂方法,并以此为基础进行＂四层次＂教学,为锻炼学生实验技能提供合适平台,为个性发展提供充足空间。希望通过该教学模式改革与尝试,使动物医学专业的毕业生能够更准确、扎实地掌握各项微生物学实验操作技术,培养其解决实际问题和科技创新能力,为后续课程的学习以及就业或进一步深造奠定一定基础。     

虫草素预防肥胖及通过ADORA1介导GH3细胞中泌乳素分泌研究

为了研究虫草素是否具有预防肥胖的作用及其可能机制,试验利用高脂饮食诱导肥胖型高脂血症大鼠动物模型,并给予高、中、低不同剂量（50、25、12.5 mg/（kg·d））的虫草素,连续灌胃35 d后观察大鼠体重、脂肪系数、血脂水平的变化;体外培养大鼠脑垂体瘤细胞（GH3）,通过CCK8、Western blotting、ELISA等方法检测虫草素对GH3细胞的增殖毒性,以及腺苷受体A₁（ADORA₁）的表达和对泌乳素分泌量的影响。体内试验结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠体重、脂肪系数和血脂水平（高密度脂蛋白（HDL）除外）均极显著升高（P<0.01）;虫草素高、中、低各剂量组均能极显著或显著降低大鼠体重、脂肪系数及总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平（P<0.01;P<0.05）,但HDL水平仅在虫草素高剂量组中显著升高（P<0.05）,而虫草素中、低剂量组均无显著变化（P>0.05）;体外试验结果显示,虫草素浓度低于25 μg/mL时对GH3细胞增殖无影响;虫草素能够诱导GH3细胞ADORA₁表达升高;虫草素和ADORA₁激动剂（R-PIA）单独作用能显著或极显著降低泌乳素的分泌量（P<0.05;P<0.01）,虫草素与ADORA₁抑制剂（DPCPX）联合作用时能够在一定程度上阻断虫草素对泌乳素的抑制作用。结果表明,虫草素具有预防肥胖和降血脂的作用,其可能的作用机制是通过诱导ADORA₁表达抑制泌乳素的分泌,该研究结果将为虫草素作为一种潜在的减肥降脂药物的开发提供一定依据。     

裂区设计下分析影响欧洲菊苣产量的因素

在裂区设计下,分析影响欧洲菊苣（Cichorium intybus cv.Europ）产量的7个因素,结果表明：播种季节对株高、产量有显著性影响;播种方式对株高、茎粗、密度、盖度、产量5个指标均有显著影响。进一步通过因子分析得出欧洲菊苣产量最佳组合为撒播、密度在50～59株·m^-2、盖度为94%～100%。     

一种高寒草地草产量快速测定工具的设计和试验

为解决青藏高原天然草地在草产量测定过程中费时、繁琐、草地破坏严重以及对工作人员的潜在危害较大等问题,利用植物群落草层高度、盖度、密度等综合指标与天然草地草产量间的相关性,建立函数关系,并制作成简易的测草杖进行草产量的快速测定。结果表明,与传统的样方法相比,该测草杖可节约时间75%左右,节省劳动力50%左右,降低50%~80%左右成本,同时也保障了工作人员的健康。     

全株饲用大麦品系筛选及赤霉素对其产量的影响

大麦（Hordeum vulgare L.）是耐盐、耐寒的优良作物,筛选全株饲用大麦品种（系）进行青刈利用有助于提高盐碱土地利用率、增加春季青绿饲草供应。本研究选用27个常规大麦品系,测定株高、茎粗和叶茎比等农艺性状,并于抽穗期刈割,分别测定产量、可溶性碳水化合物（WSC）、粗蛋白（CP）、中性洗涤纤维（NDF）和干物质体外消化率（IVDMD）等饲用品质性状,进行农艺性状与产量、饲用品质性状相关分析,筛选产量高、饲用品质优良的大麦品系;利用6个不同类型品系进行外源赤霉素（GA）的喷施试验,研究GA对全株饲用大麦产量的影响。结果表明：R150,R153,R287,R143,R295适宜整株青饲;分蘖数、茎粗和株高可作为辅助选择适宜整株青饲大麦品系（种）的依据。苗期喷施GA对不同类型大麦品系产量的影响不同,R154、R159、R171的产量显著增加（P<0.05）,R195产量增加不显著,R134产量降低。对于R169来说,仅60 g·hm^-2喷施浓度的处理高于对照。因此应结合大麦品种特点选择适宜的GA喷施时间和浓度。     

家蚕细胞色素P450基因CYP9A22的克隆及在中肠和脂肪体的诱导转录

细胞色素P450对昆虫的生长发育、环境适应性以及抗药性具有重要作用。为了探讨氯氰菊酯对家蚕(Bombyxmori)细胞色素P450基因转录的诱导作用,采用RT-PCR技术和cDNA末端快速扩增(RACE)策略,从家蚕5龄幼虫克隆到细胞色素P450基因CYP9A22(GenBank登录号:EF535804)。CYP9A22基因的cDNA编码区长1 596 bp,编码531个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为61 kD,等电点为7.71。将该基因的cDNA和家蚕基因组序列比对,有9个内含子;与已知的CYP9家族的棉铃虫(Helicoverpa armigera)CYP9A14基因的相应氨基酸同源性达到62.3%。用半定量RT-PCR方法分析氯氰菊酯诱导家蚕CYP9A22表达水平,结果表明:CYP9A22的mRNA转录表达具有组织特异性,在中肠的表达量高于脂肪体;氯氰菊酯诱导家蚕24 h,在其脂肪体的表达量是未诱导家蚕脂肪体的3.1倍,初步推测CYP9A22的过量表达可能与抗药性有一定关系。     

茧层量差异家蚕品种后部丝腺细胞和血液组织的蛋白质表达谱分析

为了研究家蚕茧层量性状的分子调控机制,采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,分析了遗传背景基本相同,而结茧性状和茧层量具有明显差异的正常茧、薄皮茧、裸蛹3个家蚕品种的丝腺细胞和血液组织的蛋白质表达与茧层量的关系。结果表明:裸蛹品种的丝腺细胞蛋白斑点与正常茧品种的蛋白斑点的匹配率仅在65%左右,且存在35%左右的特异蛋白斑点,暗示裸蛹性状可能是主效基因控制的微效多基因遗传;3个品种后部丝腺细胞特异蛋白斑点、匹配蛋白斑点按等电点划分的分布规律具有明显差异,而血液组织相应的分布规律非常相似,暗示丝腺细胞中的蛋白及其基因对家蚕茧层量性状的作用要大于血液组织中的蛋白及其基因;正常茧、薄皮茧和裸蛹3个品种后部丝腺细胞中特异蛋白斑点及上调和下调蛋白斑点中,可能分别存在着与家蚕高茧层量性状、结薄皮茧性状以及不结茧性状有关的蛋白质。     

Effect of Fagopyrum dibotrys (D.Don) Hara on Growth Performance,Immune Function and Intestinal Structure of Broilers

This experiment was conducted to investigate the effects of Fagopyrum dibotrys (D.Don) Hara on growth performance,immune function and intestinal structure of broilers. A total of 270 one-day-old healthy Tiejiaoma broilers were chosen and randomly divided into 3 groups with 6 replicates per group and 15 broilers per replicate.Control group was fed with the basal diet,group Ⅱ was fed with basal diet adding 8% flavomycin 60 mg/kg +15% aureomycin 270 mg/kg and group Ⅲ was fed with basal diet adding 1% Fagopyrum dibotrys (D.Don) Hara. The trial period lasted for 21 days. The results showed as follow:① At 21 days of age,the average daily feed intake of group Ⅲ was significantly lower than that of groups Ⅰ and Ⅱ (P<0.05).However,there was no significant difference in the average daily gain and F/G among the three groups (P>0.05).②At 21 days of age,the thymus and bursa of Fabricius indexes of groups Ⅱ and Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ (P<0.05);But the spleen index were not significantly different among the three groups (P>0.05).③ At 21 days of age,the content of IgA and IgM in serum of groups Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ (P<0.05),and the content of IgG in serum of groups Ⅱ and Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ (P<0.05).④At 21 days of age,the content of IL-2,TNF-α and sIgA in intestinal mucosa of groups Ⅱ and Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ (P<0.05),and the content of IL-6 in intestinal mucosa of group Ⅲ were significantly higher than that of groups Ⅰ and Ⅱ (P<0.05).⑤At 21 days of age,the villus height of jejunum in groups Ⅱ and Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ (P<0.05),the villus height/crypt depth of jejunum in group Ⅱ was significantly higher than that of groups Ⅰ and Ⅲ (P<0.05). However,the crypt depth was not significantly different among the three groups (P>0.05).In conclusion,that Fagopyrum dibotrys (D.Don) Hara could not affect the growth performance of broilers,but it could improve the development of immune organs,increase the secretion of serum immunoglobulin, promote the immune function of intestinal mucosa and intestinal morphology of jejunum.     

母鸡饲粮添加肌苷酸对种蛋品质、1～21日龄子代肉鸡生长性能和血清生化指标的影响

本试验旨在研究母鸡饲粮中添加不同水平肌苷酸(IMP)对种蛋品质、1~21日龄子代肉鸡生长性能和血清生化指标的影响。选取20周龄健康爱拔益加(Arbor Acres)肉鸡480只,随机分为对照组(基础饲粮)、Ⅰ组(基础饲粮+0.2%肌苷酸)、Ⅱ组(基础饲粮+0.5%肌苷酸)和Ⅲ组(基础饲粮+1.0%肌苷酸)。出壳后的子代肉鸡随机选取480只,根据其母鸡饲粮中肌苷酸添加情况相应分为对照组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,每组6个重复,每个重复20只鸡。试验期21 d。结果表明:与对照组相比,各试验组32周龄末母鸡的种蛋品质指标、1~21日龄子代肉鸡的生长性能指标和血清蛋白质代谢及酶活性相关指标均无显著差异(P0.05)。与对照组相比,Ⅲ组21日龄子代肉鸡的血清高密度脂蛋白胆固醇(HLD-C)含量显著升高(P0.05),各试验组的血清总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量无显著差异(P0.05)。与对照组相比,Ⅱ组和Ⅲ组21日龄子代肉鸡的血清三碘甲状腺原氨酸(T_3)含量显著升高(P0.05),Ⅱ组的血清甲状腺素(T4)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量显著升高(P0.05),各试验组的血清生长激素(GH)含量无显著差异(P0.05)。与对照组相比,Ⅲ组21日龄子代肉鸡的血清免疫球蛋白M(Ig M)、白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)含量有上升趋势(P0.05)。以上结果表明,母鸡饲粮添加肌苷酸增强了子代肉鸡体内的脂质代谢,提高了子代肉鸡血清生长与免疫相关激素水平和免疫因子含量;综合种蛋品质、生长性能及血清生化指标,母鸡饲粮添加0.5%~1.0%肌苷酸效果最佳。