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本文旨在建立胰脂肪酶实时荧光定量PCR检测方法的基础上研究纳米氧化铈对蛋鸡胰脂肪酶活性及基因表达的影响.试验选择26周龄健康商品蛋鸡384只,随机分为4组,每组8个重复,每个重复12只鸡.以玉米-豆粕型饲粮为基础饲粮,在基础饲粮中分别添加0(Ⅰ组)、30(Ⅱ组)、60(Ⅲ组)和90 mg/kg(Ⅳ组)的纳米氧化铈,试验期7周.结果表明:1)本试验建立的胰脂肪酶实时荧光定量PCR检测方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,可用于检测胰脂肪酶mRNA表达水平;2)Ⅲ组胰脂肪酶活性显著或极显著高于Ⅰ组和Ⅳ组(P <0.05或P<0.01),胰脂肪酶mRNA表达水平显著高于其他各组(P<0.05).由此得出,饲粮中添加60 mg/kg纳米氧化铈可显著提高蛋鸡胰脂肪酶活性,上调胰脂肪酶mRNA表达水平. 相似文献
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为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3000bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性。这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株。 相似文献
83.
蜂蟹螨(Varroa destructor)对福化利抗药性及其防治的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
建立培养皿药膜法进行蜂蟹螨福化利(Fluvalinate)抗药浓度检测方法。分别以福化利浓度为0、12.5、25、50、100mg/L进行台湾5处蜂场蜂蟹螨抗福化利剂量调查,经回归分析,计算LC50之浓度介于23.75~79.25mg/L之间,比意大利抗性螨385~857mg/L仍低很多,显示抗药性尚未大幅增加。以隔落螨法防治蜂蟹螨平均每日可捕捉44.7~49.1只。比较隔落螨法、割雄蜂蛹加隔落螨法、蚁酸加隔落螨法、福化利防治法的效果,当蜂蟹螨密度不高时,可采用隔落螨法或加割雄蜂蛹方式进行防治,蜂蟹螨密度高时,可先以福化利、蚁酸进行1~2次防治,再配合隔落螨法,将可达到长期防治效果。 相似文献
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银染mRNA差异显示方法在致突变实验中的初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
为建立在药物致突变研究中应用银染 m RNA差异显示的方法 ,试验提取未经过 /经过环磷酰胺处理的 Balb/c小鼠肝组织的总 RNA ,并以此为模板 ,采用 d T1 2 CG、d T1 2 AG、d T1 2 GG为锚定引物 ,通过反转录、差异显示 PCR反应 ,以 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带 ,回收后将其再扩增。结果表明 ,RNA投入量为 3μg、镁离子浓度为 1.5~ 2 .0 mm ol/L、退火温度为 4 0℃时 ,扩增的片段条带清晰、背景低 ,差异条带明显 ,再扩增条带单一。银染 m RNA差异显示技术可成功应用于药物致突变的研究。 相似文献
89.
ZHANG Shengying WU Xiaochun XING Xiaoyong LIU Jia YUE Yahui ZHANG Yangyang HE Jian WEN Fengqin BAO Shijun 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3149-3157
The aim of this study was to investigate the effect of P48 protein on proliferation and apoptosis of embryonic bovine lung (EBL) cells.In this study,samples which co-incubated with P48 protein and EBL cells in different concentrations at different time points were collected,the proliferation rate of the cells was detected by MTT method,and the changes in the nuclear morphology of EBL cells were observed by DAPI staining method.Meanwhile,flow cytometry was used to detect the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein.Real-time quantitative PCR was used to detect the changes in mRNA level of apoptotic marker genes,and Western blotting tested the Bax and Beclin-1 protein expressions.The results showed that under the condition of 72 h and 10 μg/mL of protein concentration treatment,P48 extremely significantly inhibited EBL cells proliferation (P<0.01),while 0.1 and 0.5 μg/mL protein concentration had no inhibitory effect (P>0.05).The nuclear morphology showed no significant change after protein induction for 12 h,but wrinkled and condensed at 24 h.The nucleus was fragmented,and a sprouted apoptotic body was appeared at 48 and 72 h.Apoptosis related genes expression showed no obvious increase at 2 and 12 h at mRNA level,but gradually increased at 24,48 and 72 h,and it showed a time-dependent manner.Accordingly,the expression of apoptosis marker proteins Bax and Beclin-1 significantly increased.Flow cytometry analysis showed that the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein was 48.44%.In conclusion,P48 recombinant protein of Mycoplasmas bovis inhibited the proliferation of EBL cells and promoted their apoptosis,which provided reference for revealing the pathogenic mechanism of Mycoplasmas bovis. 相似文献
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