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研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A (CctA)基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a (+),双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍(Ni)柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为:抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1:8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D450 nm值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。 相似文献
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添加尿素和糖蜜对甘蔗尾打捆青贮品质的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
试验采用单因子设计研究不同水平的尿素、糖蜜及糖蜜与尿素混合处理对甘蔗尾打捆青贮品质的影响。试验共分5组,其中1组为对照组,甘蔗尾经揉搓后直接青贮,2~5组为试验组分别添加0.6%尿素、1.0%的尿素、5%糖蜜和0.6%尿素+5%糖蜜,每个处理3个重复,青贮期90 d。试验结果表明,添加0.6%、1%的尿素及0.6%尿素+5%糖蜜均能显著提高青贮饲料的粗蛋白质含量(P<0.05),但3个组间差异不显著(P>0.05);单独加尿素的两组青贮料pH较对照组和其它试验组高,外观品质有所下降;添加5%的糖蜜和0.6%尿素+5%糖蜜均能显著降低青贮料的粗纤维含量,增加可溶性糖的含量,青贮料的pH及外观品质较好;综合营养成分和外观品质, 甘蔗尾用尿素与糖蜜混合处理其青贮料的品质最好。 相似文献
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日粮中精料和牧草比例对舍饲山羊增重的影响 总被引:9,自引:0,他引:9
报道了在四川省洪雅县进行的一项山羊舍饲试验。试验分3个阶段、4个分组,每组8只5月龄的波尔×成都麻羊杂交公羔(去势),按不同精料与牧草配比饲喂。在舍饲条件下,无论以哪种牧草为基础日粮,随着补饲精料比例的增加,总的干物质采食量相应增加,而牧草采食量有所下降。以牛鞭草为基础日粮时,如果不补饲精料,山羊日增重很低,补饲精料可明显提高日增重。在牛鞭草日粮的基础上增加苜蓿干草,最初阶段因试验羊不太适应,导致日增重降低,但是经过约2周的适应之后,山羊日增重显著提高,但苜蓿干草成本较高,用于饲养山羊并不划算。以多花黑麦草为基础日粮时,山羊增重效果最好,依补饲精料比例的不同(12%~43%),山羊日增重130~189g,10月龄时的胴体重为17.56~25.23 kg。以黑麦草为基础日粮结合补饲精料虽可以提高山羊日增重,但增加精料导致成本过高,净收入降低。综合比较,在黑麦草基础上添加10%精料(干物质基础)的配比最好,每只羊每日可通过增重获得0.64元净收入。 相似文献
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猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
为了解猪链球菌2型(SS2)菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子(EF)抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128~1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104~1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。 相似文献
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用薯莨提取液对真丝织物染色增重的最佳工艺及金属离子后处理的改性效果 总被引:1,自引:1,他引:1
采用天然染料改善真丝性能有利于环保和人体健康。研究了以天然薯莨提取液为染料,应用汽蒸染色方法对真丝织物进行染色增重的最佳工艺,比较了分别用Fe3+、Cu2+、Cr6+3种金属离子进行后处理的改性效果。薯莨提取液对真丝增重的最佳工艺是:汽蒸温度110℃、湿度85%,汽蒸8次,汽蒸时间4 min,带液率180%、含固量6.28%。用Fe3+、Cu2+、Cr6+金属离子后处理的最佳质量浓度分别为12、10、10 g/L。Fe3+、Cr6+后处理的真丝织物其增重率随离子浓度的增加逐渐增大,而Cu2+后处理的真丝织物增重率在离子浓度上升到一定程度后有所降低。用Fe3+后处理的真丝织物颜色最深,呈红黑色;用Cu2+后处理的真丝织物颜色偏深,色相在红黄之间;用Cr6+后处理的真丝织物偏暗黄色。3种金属离子用于染色真丝织物的后处理,均在一定程度上提高了薯莨提取液染色增重真丝的色牢度和拒水性能,能明显提高真丝织物的紫外屏蔽性能,其中经Cr6+后处理的真丝织物拒水性能和紫外屏蔽性能最为显著。 相似文献
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通过在饮水中添加不同量的复合酸,研究不同pH饮水对断奶獭兔肠道形态及内脏器官发育的影响。40只体重相近的35日龄美系白色断奶獭兔按公母各半随机分为4组,每组10只,A组为对照组,饮用自来水;B组饮水中添加0.55%复合酸,pH 5.0;C组饮水中添加0.85%复合酸,pH 4.3;D组饮水中添加3.3%复合酸,饮水pH 3.6。结果表明,与对照组相比,pH 4.3饮水能显著增加脾脏重和脾脏指数(P<0.05);酸化饮水能提高断奶獭兔其他内脏器官重,改善内脏器官指数,但和对照组相比差异不显著(P>0.05)。酸化饮水可以改善断奶獭兔肠道形态,增加绒毛高度、降低隐窝深度,饮水酸度pH 4.3时可显著增加十二指肠绒毛高度(P<0.05),并降低空肠肠壁厚度(P<0.05);饮水酸度pH 3.6时可显著降低回肠肠壁厚度(P<0.05);酸化饮水对空肠、回肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度和肠壁厚度也有一定改善,以pH 4.3饮水酸度改善最好,但差异不显著(P>0.05)。结果显示,酸化饮水可以在一定程度上改善断奶獭兔内脏器官发育和肠道形态,其中以pH 4.3改善效果最好。 相似文献