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31.
设计植物EXP扩展蛋白简并引物,以砂梨果实cDNA为模板,克隆得到EXP基因cDNA片段,该片段长465 bp。根据该片段序列,分别设计2条5’和3’末端扩增的特异引物,利用RACE技术,获得了该片段的5’端和3’端序列。用DNAMAN5.22软件对3个序列进行拼接和分析,获得了该基因的cDNA全长,命名为Pyp-EXP。该cDNA全长为1 395 bp,5’端起始密码子ATG始于72 bp,3’端终止子TAG止于830 bp,Ploy+(A)从1 363~1 395 bp。该基因已在GenBank基因数据库注册,注册号为EF602031。Pyp-EXP核苷酸序列有一个759 bp完整的开放阅读框,编码区与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃的同源性分别为96%,96%,94%和86%;该cDNA推导编码252个氨基酸,含有1个组氨酸(His_Phe_Asp,HFD)功能域,与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃中相应序列同源性分别为98%,97%,95%和93%。该基因的克隆为研究扩展蛋白的时空表达及其在果实发育和成熟过程中的作用奠定了基础。 相似文献
32.
藤稔葡萄主枝环剥对果实着色及相关基因表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
对藤稔葡萄主枝环剥促进其果实着色的效果以及对花青苷合成相关重要基因的表达等进行了分析。研究结果表明,主枝环剥不仅可提高果肉中可溶性固形物的含量,并且明显改善果实着色,使外观颜色加深,果皮花青苷含量增加,果面光泽明亮度(L*值)和颜色组分b*值下降,颜色组分a*值以及红色葡萄果实颜色指数(CIRG值)增大。环剥处理还明显促进了UFGT、MYBA1和MYBA2的表达,MYBA1和MYBA2于环剥处理后的第2周(花后63 d)表达水平明显上调,相对表达量达到最高值。UFGT的表达水平与花青苷的积累趋势具有很好的一致性,环剥处理使UFGT的相对表达高峰提前1周左右。 相似文献
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gD糖蛋白是IBRV感染细胞的主要分子,在病毒吸附和侵入宿主细胞中发挥着重要作用。利用IBRV基因组DNA为模板,经生物学软件DNAstar分析主要抗原区,PCR扩增gD基因786bp片段,定向连接到pET32a(+)表达载体中,筛选阳性克隆转化BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达部分可溶的重组蛋白。Ni-NTA非变性纯化系统纯化蛋白,纯化的蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,利用间接ELISA法检测抗血清效价为1∶6400;同时以该血清进行血清中和病毒实验,中和指数为1∶640,显示该抗血清具有良好的抗病毒能力,为进一步开发牛传染性鼻气管炎(IBR)的诊断检测试剂和疫苗奠定了重要基础。 相似文献
38.
采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因0RF7,并将其克隆到pMDl8-T载体,构建成重组质粒pMDl8-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAVNC-002532株的同源性为99%。表明0RF7是EAV基因组内的保守序列,将0RF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21(DE3),诱导表达后SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶(GST)下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础。 相似文献
39.
为了对羊源捻转血矛线虫(H.contortus)15 ES抗原基因进行原核表达,本研究利用RT-PCR技术从黑龙江省羊源H.contortus成虫总RNA中扩增得到相对分子质量15Ku ES蛋白基因(H15 ES),序列分析表明,其核苷酸序列与国外已发表的15 ku排泄分泌抗原基因的同源性为99.78%.将H15 ES克隆至pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-H15 ES,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达蛋白相对分子质量约为35.2 ku.本研究为H.contortus病诊断抗原和保护性抗原的大量制备及H.contortus核酸疫苗的研究奠定了基础. 相似文献
40.
种鸡场鸡白血病净化的研究(Ⅲ)-ALV检测不同样品种鸡场净化效果的比较 总被引:4,自引:0,他引:4
应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (DAS- EL ISA)在种鸡白血病的净化中 ,针对同一种鸡群 ,同时采用蛋清和肛拭作为试验材料 ,实验反映的结果不同 ;将产第一枚蛋为阳性的鸡隔离饲养 ,检测其以后蛋中 AL V的状况 ,结果发现 :在随后的 2 5天左右的每一枚蛋清中都能检测到 AL V:在不同种鸡场分别采用蛋清、蛋清和肛拭同时作试验样品进行净化 ,跟踪结果发现 :在不同种鸡场中 ,AL V阳性感染率都有不同幅度的下降。另一方面 ,检测雏鸡的胎粪 ,淘汰阳性者 ,到其产蛋期抽检蛋清 ,该群鸡 AL V阳性率有所下降 相似文献