Cloning,Expression of Clostridium perfringens α-toxin Gene and Preparation of its Antisera

One pair of primers had been designed and synthesized based on the α-toxin gene of Clostridium perfringens.The complete α-toxin gene fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR), and then was cloned into pGEM-T Easy vector to construct pGEM-T-α.Digested with EcoRⅠ and Hind Ⅲ, a fragment of 1125 bp was cloned into the expression plasmid vector pET-28a(+).The recombinant plasmid was transformed into the BL21(DE3)plys and induced by 1.0 mmol/L IPTG at 37 ℃.The expression product was found to be 46.1 ku as expected one identified by SDS-PAGE, and confirmed by Western blotting with Clostridium perfringens type A antisera, indicating similar reactivity with native α-toxin.Recombinant α-toxin protein was simultaneously found in culture supernatant, postsonic supertanant and inclusion bodies, most protein was expressed in inclusion bodies, which indicated recombinant α-toxin protein was expressed in the extracellular, periplasm and cytoplasm.Recombinant α-toxin protein in postsonic supertanant could not make mice die, indicating its non-toxicity.Toxin-antitoxin neutralization test showed that antisera of recombinant α-toxin protein were specific to α-toxin.Upon immunization of rabbit with the recombinant α-toxin protein, antisera with high antibody titer neutralizing 100 MLD toxin per 1 mL were prepared.     

罗非鱼养殖技术之三北方地区罗非鱼当年养成技术

在自然条件下,罗非鱼在我国北方地区适宜生长时间只有4-5个月,在冬季只能依靠电厂余热水或地热资源越冬,随着热电厂的逐步改造和地热资源的减少,利用电厂余热水帮助罗非鱼越冬将越来越困难,罗非鱼越冬成本有所增加。近几年,随着休闲渔业的发展,罗非鱼品质优良且又     

励珂健喷剂对10日龄内仔猪腹泻和免疫力的影响

为研究励珂健喷剂（主要成分：杨树花提取物）对10日龄内仔猪腹泻和免疫力的影响,将18头PIC母猪随机分成3组,每组6头,分别为蒸馏水组、土霉素组和励珂健喷剂组,蒸馏水组仔猪1、3、5日龄时皮肤喷洒蒸馏水1 m L/头/d,土霉素组仔猪3、7日龄时分别肌肉注射20%长效土霉素注射液0.2 m L/头/d、0.5m L/头/d,励珂健喷剂组仔猪1、3、5日龄时皮肤喷洒励珂健喷剂1 m L/头/d。结果表明,励珂健喷剂可有效降低10日龄内仔猪的腹泻率和发病率,且励珂健喷剂组腹泻仔猪的治愈速度快于土霉素组和蒸馏水组。由此证明：励珂健喷剂对10日龄内仔猪腹泻有防治作用,并且还可以增强仔猪的免疫力。     

An improved method of fluorescein diacetate determination for assessing the effects of pollutants on microbial activity in urban river sediments

Journal of Soils and Sediments - The fluorescein diacetate (FDA) method has been widely used to quantify microbial activity rapidly and sensitively. However, due to high silt–clay ratios and...     

圈养黇鹿对北方4种常见苗木叶片适口性浅析

为研究鹿科动物食性,探讨树叶用作鹿科动物饲料的可能性,以黇鹿为试验对象,选取北方常见榆树、刺槐、垂柳及毛白杨等4种树种新鲜叶片作为饲料,对其适口性进行分析。结果表明,黇鹿对4种叶片喜食程度依次为榆树叶、刺槐叶、垂柳叶和毛白杨叶;通过对叶片粗蛋白质含量(CP%)、酸洗纤维(ADF%)、中洗纤维(NDF%)等7种生化指标测定发现叶片中的CP含量(P=0.001)、ADF含量(P=0.025)及NDF含量(P=0.032)是影响其对叶片选择的关键因素。     

金黄色葡萄球菌处理对奶牛乳腺上皮细胞外泌体表征的影响

【目的】本研究旨在从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus,以下简称金葡菌)处理奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)上清中分离外泌体,探究金葡菌与BMEC数量比值(MOI)和处理后培养时间对外泌体总浓度的影响,并对金葡菌诱导BMEC释放的外泌体进行分离和鉴定。【方法】采用金葡菌临床分离菌株以MOI＝1和MOI＝10分别处理BMEC 3 h,对已处理的BMEC继续无外泌体培养9、12、24 h,同时设空白对照组,通过扫描电镜观察金葡菌处理对BMEC造成的超微结构损伤。采用超速离心法分离金葡菌诱导的BMEC上清液中的外泌体,分别用透射电镜、纳米颗粒追踪分析技术及Western blotting法对外泌体形态、颗粒大小和特异性标志蛋白进行分析鉴定。通过检测外泌体总蛋白浓度评估不同MOI和处理后培养时间对外泌体总量的影响,明确金葡菌诱导BMEC释放外泌体的最佳条件。【结果】通过扫描电镜观察发现,金葡菌处理BMEC后,细胞微绒毛脱落,细胞骨架破坏。透射电镜观察分离的外泌体为圆形的双层膜囊泡,直径在30~150 nm,形态均一。通过检测外泌体总蛋白浓度显示,在MOI＝10时,培养9、12和24 h金葡菌诱导BMEC释放外泌体蛋白浓度均高于MOI＝1,而培养12 h时释放外泌体蛋白浓度最高。对金葡菌诱导BMEC释放的外泌体进一步鉴定,其平均直径约为116 nm;Western blotting检测结果显示外泌体标记物CD9、CD81和TSG101表达阳性。【结论】本研究从形态学和分子生物学特征等方面证实获得的分离物为外泌体;金葡菌可以诱导BMEC释放外泌体,当MOI＝10时,金葡菌处理细胞3 h后继续无外泌体培养12 h,收获的细胞上清中外泌体蛋白含量最高。     

超声波处理对牛乳浓缩蛋白水溶性的影响

经贮藏后的牛乳浓缩蛋白(milk protein concentrate,MPC)的水溶性会下降,而MPC的水溶性直接影响其应用价值.本实验利用超声波技术处理新鲜和贮藏后的MPC,研究不同超声波处理条件对贮藏后的MPC水溶性的影响.结果表明:超声处理(50、300、600 W分别处理5 min; 300 W分别处理3、5、10 min)贮藏后的MPC85,其水溶性显著下降;而超声处理(300 W或600 W分别处理3、5、10 min)新鲜MPC70后在50℃条件下贮藏30 d,其水溶性下降较缓慢且300 W处理10 min的水溶性下降得最慢.因此,在MPC生产过程中进行超声处理,可以在一定程度上减缓MPC贮藏过程中水溶性下降程度.     

辽南滨海黄土的粒度分维值及其环境意义

以Mastersizer2000激光粒度仪测出的粒度数据为基础,应用分形理论计算得出:七顶山马兰黄土的粒度分维值介于2.2085～2.3184之间,平均值为2.2744,相关系数为0.8835;离石黄土粒度分维值介于2.2748～2.4237之间,平均值为2.3467,相关系数为0.8920。全剖面粒度分维值在2.2085～2.4237之间,平均值为2.3187,相关系数达0.88以上,粒度分布具有分形特征(0.76μm～263.75μm的标度范围内)。分维值的大小对黄土的形成环境有良好的指示意义。本区马兰黄土比离石黄土的分维值低,说明马兰黄土沉积时东亚冬季风强盛,气候寒冷干燥,次生成壤作用弱,分选系数偏小,分选性比离石黄土稍好,自组织程度低,分维值偏低且变化幅度小;离石黄土沉积时夏季风较冬季风强盛,气候温暖湿润,后期的成壤改造作用强,分选较差,分选系数稍大,自组织程度高,分维值偏高且变化幅度大。经对比分析得出:粒度分维值反映的环境演变与磁化率、粒度所反映的环境演变一致。     

山东省区柳蚕的生物学特性与饲育初报

对山东省区柳蚕的形态特征和生活习性进行野外观察和室内室外人工饲养试验.发现柳蚕在野外自然环境条件下1年完成2个世代,以蛹态滞育越冬,幼虫取食柳树、枫杨等的树叶,幼虫期4眠5龄.柳蚕茧调查结果,全茧量5.89g,茧层量0.42g,茧层率7.14％,蛹重为5.38 g.