全文获取类型
收费全文 | 15416篇 |
免费 | 897篇 |
国内免费 | 1634篇 |
专业分类
林业 | 1418篇 |
农学 | 1707篇 |
基础科学 | 1208篇 |
2152篇 | |
综合类 | 5819篇 |
农作物 | 929篇 |
水产渔业 | 820篇 |
畜牧兽医 | 2209篇 |
园艺 | 785篇 |
植物保护 | 900篇 |
出版年
2024年 | 103篇 |
2023年 | 264篇 |
2022年 | 651篇 |
2021年 | 745篇 |
2020年 | 668篇 |
2019年 | 653篇 |
2018年 | 468篇 |
2017年 | 743篇 |
2016年 | 584篇 |
2015年 | 823篇 |
2014年 | 786篇 |
2013年 | 961篇 |
2012年 | 1220篇 |
2011年 | 1324篇 |
2010年 | 1171篇 |
2009年 | 1105篇 |
2008年 | 1005篇 |
2007年 | 935篇 |
2006年 | 686篇 |
2005年 | 627篇 |
2004年 | 306篇 |
2003年 | 213篇 |
2002年 | 182篇 |
2001年 | 214篇 |
2000年 | 198篇 |
1999年 | 187篇 |
1998年 | 155篇 |
1997年 | 143篇 |
1996年 | 140篇 |
1995年 | 144篇 |
1994年 | 102篇 |
1993年 | 90篇 |
1992年 | 64篇 |
1991年 | 71篇 |
1990年 | 50篇 |
1989年 | 41篇 |
1988年 | 43篇 |
1987年 | 16篇 |
1986年 | 16篇 |
1985年 | 8篇 |
1984年 | 4篇 |
1983年 | 3篇 |
1982年 | 5篇 |
1981年 | 7篇 |
1980年 | 4篇 |
1978年 | 3篇 |
1975年 | 4篇 |
1966年 | 2篇 |
1964年 | 2篇 |
1962年 | 2篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
131.
为建立一种特异、快速的媾疫锥虫检测方法,本研究通过PCR方法从马媾疫锥虫动基体基因组中扩增得到395 bp的特异的保守序列,将其克隆到pMD-18T载体中构建重组质粒标准品,以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立马媾疫锥虫荧光定量PCR的检测方法。结果表明:该方法的检测灵敏度可达到1拷贝/μL,并且与马属动物其他传染病无交叉反应。其组间及组内变异系数分别小于3.183%和3.842%。该方法的建立为快速及特异性检测马媾疫锥虫提供了有效的方法。 相似文献
132.
利用RAPD分子标记技术对14份来自内蒙古中东部草原的贝加尔针茅(Stipa baicalensis Roshev.)、大针茅(S.grandis P.Smirn.)和克氏针茅(S.krylovii Roshev.)进行遗传多态性分析。筛选出16个引物,扩增出223条DNA片段,其中多态性片段为184条,多态性比率为82.51%。结果表明:14份材料呈现出明显的种间相似性,同一种针茅首先聚在一起;每一种针茅都获得了其特有的RAPD条带。 相似文献
133.
134.
135.
O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立 总被引:1,自引:2,他引:1
为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒(FMDV)抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带,各部件按顺序装配形成快速诊断试纸条。如果待检样品中含有O型FMDV,它将与玻璃纤维上的胶体金探针和兔抗O型FMDV抗体形成夹心复合物,并在检测带被固定,沉集反应形成肉眼可见的红色条带。在田间试验中,53份试验样本分别用试纸条和反向间接血凝试验进行检测,2种方法的阳性率分别为95.45%和90.91%。评价试验证实,本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快速,具有良好的特异性和敏感性,非常适于基层兽医实验室诊断时使用。 相似文献
136.
为研究冬虫夏草采挖区与非采挖区的土壤生态化学计量学特征,本研究以青海省7个地区冬虫夏草生长地土壤样本为试验材料,分别采用重铬酸钾-外加热法、凯氏定氮法、碱熔法、碳酸氢钠浸提-比色法、酸溶法、1 mol·L-1乙酸铵浸提-火焰光度计法、碱解-扩散法、邻菲啰啉比色法、火焰原子吸收分光光度法对土壤样本的养分与理化指标进行了测定,并对其化学计量特征进行了分析。结果表明,除XH(青海省海南藏族自治州兴海县)地区采挖区与非采挖区在全氮含量上存在显著性差异(P<0.05),其他各地区采挖区与非采挖区在土壤各指标含量上均无显著性差异,不同地区采挖区与非采挖区C∶N的范围是18.24~32.79,C∶P是155.53~562.78,N∶P是4.85~24.00,C∶K是4.51~11.52,K∶N是2.55~7.17,K∶P是31.44~81.86;采挖区与非采挖区的C∶P与N∶P之间均具有极显著相关性(P<0.01)。因此,本研究发现采挖冬虫夏草对其生长环境的土壤化学性质无显著性影响,为冬虫夏草采挖对生态环境的影响评估提供数据支撑。 相似文献
137.
试验采用3种冷冻载体(麦管、开放式拉长麦管和半麦管)对猪卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的影响进行研究,以探讨采用自制半麦管作为载体对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的影响.结果发现,采用半麦管法、OPS法玻璃化冷冻的猪卵母细胞的形态完整率、存活率、卵裂率分别为90.85%、60.07%、20.43%和84.15%、55.71%、14.71%,无显著差异(P>0.05),但采用半麦管法的结果好于OPS法;与麦管法的形态完整率、存活率和卵裂率(分别为60.06%,39.64%和0)均有显著性差异(<0.05).结论为采用半麦管法玻璃化冷冻猪卵母细胞可以稍微提高其冻后发育能力. 相似文献
138.
根据传染性造血器官坏死病毒(IHNV)基因序列,设计了IHNV最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了IHNV焦磷酸测序检测方法。对所构建的IHNV焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测。结果表明,所建立的方法特异性好,在8种鱼类病毒中能够特异性检测出目的病毒,检测方法灵敏度高,最低检出核酸量为10pg/μL。对建立的焦磷酸测序检测方法进行了实际应用研究,选取国内采集与进口的鱼类样本共计80批次进行IHNV检测。结果显示,焦磷酸测序检测方法可以有效的检出常规RTPCR不能检出的假阴性样本和弱阳性样本,该方法的灵敏度和特异性可以满足水生动物疫病检测的需要。 相似文献
139.
H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立 总被引:4,自引:0,他引:4
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NSl基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明,融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。 相似文献
140.
采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。 相似文献