猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究

RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆人pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15d血清抗体即为阳性,30d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88％以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。     

Clenbuterol诱导载酯蛋白D在猪脂肪组织中表达加强

Clenbuterol(CLB,盐酸克伦特罗),俗称瘦肉精。由于其在动物体内广泛残留,可能导致食用此类产品的人中毒而被禁止使用,但已有研究表明该制剂可显著减少猪脂肪沉积,因此,对其分子机制进行深入研究将具有重要的理论与实践价值。本研究通过对家猪饲喂高剂量clenbuterol(≥1.5mg/kg体重),提高瘦肉率10%左右。通过实时荧光定量PCR技术对脂肪组织中与脂类代谢密切相关的4个基因研究发现,饲喂clenbuterol的猪脂肪组织内载酯蛋白D(apolipoprotein D,apoD)mRNA丰度增加超过2倍,而脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,lpl)、硬酯酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-CoA desaturase,scd)和激素敏感脂酶(hormone sensitive lipase,hsl)mRNA丰度变化不明显。因此,推断clenbuterol通过改变部分脂代谢关键基因的表达来实现减少脂肪积累。载酯蛋白D可能是CLB应答基因之一。     

牛呼吸疾病综合征及其防治

牛呼吸疾病综合征是严重危害国内外肉牛养殖业的一种重要传染病,该病的致病因素复杂,包括支原体、病毒和细菌等特异性病原以及运输应激等多种因素。美国等发达国家对该病的攻关研究开始于上世纪80年代初,其研究和临床防控均已达到较高水平,但仍认为该病将是未来10～20年养牛业所面临的主要疾病。我国对该病的认识和研究尚处于起步阶段,借鉴世界上发达国家的先进经验将有助于提升我国对该病的防控水平。     

昆虫蛋白质饲料在动物生产中的应用

昆虫是最具开发潜力的动物性蛋白质饲料资源。作者就昆虫的营养价值、昆虫蛋白质饲料在畜牧业生产上的开发应用效果进行了综述,最后提出了昆虫饲料的发展前景。     

肠出血性大肠杆菌O157 ler基因缺失突变株的构建及其特性

以肠出血性大肠杆菌O157∶H786～24为始发菌株,利用自杀性载体pCVD442,根据同源重组的原理敲除了染色体上的ler基因,构建了O157∶H7 ler基因缺失突变菌株,并对其生物学特性进行了初步研究。荧光定量PCR试验结果表明,始发菌株对HEp-2细胞的平均黏附数量是突变菌株的17倍。试验也证实了ler基因对LEE致病岛毒力基因的正调控作用,这为O157∶H7基因缺失突变弱毒疫苗株的建立奠定了基础。     

电刺激疑核对TNBS诱导的IBD大鼠TGF－β表达的影响

为探讨疑核对炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）相关细胞因子TGF-β的调控作用以及在IBD的发生发展过程中发挥的作用,以三硝基苯磺酸（TNBS）诱导IBD大鼠动物模型通过Real-Time PCR和ELISA方法,利用疑核定位技术,检测急性电刺激疑核前后,细胞因子TGF-β在TNBS诱导的IBD大鼠结肠、胸腺、脾脏、外周血淋巴细胞中mRNA水平的变化和血清中蛋白浓度的变化。结果表明,急性电刺激IBD大鼠疑核后TGF-βmRNA表达水平在结肠、脾脏和外周血淋巴细胞中均显著高于对照组和假刺激组;而在胸腺中TGF-βmRNA表达降低。急性电刺激IBD大鼠疑核后血清中TGF一8蛋白浓度显著高于对照组和假刺激组。由此认为,疑核可能通过对IBD相关细胞因子TGF一8的调控,介导IBD的发生、发展过程,从而对IBD的发生、发展发挥调节作用。     

利用乳汁体细胞研究共轭亚油酸钙对奶牛乳腺基因表达的作用

8头泌乳中期的奶牛被随机分为2组,分别是对照组（每头牛：基础日粮＋棕榈酸钙200g／d）和试验组（每头牛：基础日粮＋共轭亚油酸钙200g／d）,试验期14d,检测了奶产量、乳成分,分析奶牛的血液变化,并采用荧光定量PCR对乳汁体细胞中脂蛋白脂酶（LPL）、乙酰辅酶A羧化酶（ACACA）的基因表达进行检测。结果显示,与对照组相比,试验组奶牛的乳产量、乳蛋白、乳糖和乳汁体细胞含量没有显著影响,但是显著降低了乳脂肪含量（P〈0．05）,对照组和试验组奶牛乳脂肪含量分别为0．0326g／mL和0．0244g／mL。检测血液指标发现,共轭亚油酸钙显著升高了奶牛血液中高密度脂蛋白的含量（P〈0．05）。基因分析发现,试验组奶牛乳汁体细胞中LPL、ACA—CA的基因表达显著下调,表明共轭亚油酸钙抑制了奶牛乳腺细胞脂肪酸合成酶的基因表达。     

氟对雄性小鼠生殖毒性的试验

氟是动物生长所必需的元素,适量的氟有利于机体预防龋齿、维持钙磷代谢和保持神经冲动传导,但摄入过量的氟可导致机体中毒,引起人和动物机体多系统功能损害,主要表现为氟骨症和氟斑牙,并对人和动物的健康及经济带来了巨大的损害.长期以来,氟中毒的研究主要集中于氟对骨骼、牙齿等骨相组织的损伤,而对非骨相组织的研究很少见到.     

同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒和伪狂犬病毒连接酶检测反应-PCR基因芯片检测方法的建立

为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法.首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5 -dCTP标记方法的灵敏度.结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记.利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6％～100％.该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台.     

世界草地综合顺序分类图的制作

通过对全球1961～1990年气象数据的分析与统计,将7 775个站点的气温与降水换算成草地综合顺序分类指标-＞0℃的年积温(Σθ)和湿润度(K)值,在Arc GIS平台上,配以世界行政区划图,依据综合顺序分类理论,制作世界草地综合顺序分类图.研究结果表明:可将世界陆域草地分为38类,基本符合全球气候带以及植被的分布,...