Molecular cloning and functional analysis of goose interferon gamma

The cDNA for goose interferon gamma (goIFN-gamma) was cloned from PHA-stimulated goose peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) by RT-PCR. This cDNA encodes a 19-amino acid signal peptide and a 145-amino acid mature protein, which shares a high homology with duck IFN-gamma. Recombinant mature goose interferon gamma (rgoIFN-gamma) generated from both prokaryotic and eukaryotic expression systems effectively inhibited the replication of goose paramyxovirus and recombinant vesicular stomatitis virus in vitro. These antiviral activities were abrogated by rabbit anti-rgoIFN-gamma antibodies in vitro. Furthermore, rgoIFN-gamma stimulated goose peritoneal macrophages to produce nitric oxide (NO) in vitro, demonstrating its macrophage activating factor (MAF) activity. Therefore, the availability of bioactive rgoIFN-gamma and its specific antibodies provides valuable tools for studying T cell immunity in geese.     

响应面分析法优化α-环糊精的酶转化工艺

为获得较高的α-环糊精转化产率,采用单因素实验和响应面实验方法,筛选底物种类、底物浓度、加酶量、酶作用时间、作用温度和pH等多个单因素,对海洋芽孢杆菌Y112产的α-环糊精葡萄糖基转移酶产α-环糊精的条件进行了优化。然后利用Plackett-Burman实验筛选得到影响α-环糊精转化率的3个主要因素:底物浓度、温度和pH值。最终采用响应面分析法得到的最佳转化条件为马铃薯淀粉浓度为5%,加酶量200 U/g(淀粉),pH值为8.4,温度30℃,200 r/min反应6 h,α-环糊精转化率均值为28.67%,比优化前的产率提高了2.48倍。     

基于结合部动力学特性的立柱-主轴系统动力学模型研究

针对某卧式加工中心动力学特性分析的需要,论述了主要影响其动力学特性的立柱-主轴系统中导轨结合部、螺栓结合部、滚珠丝杠结合部以及轴承4类结合面分布情况,提出各类结合部动力学参数提取方法与有限元建模方法.通过试验测试与有限元分析相结合的手段识别导轨结合部刚度与阻尼,利用赫兹接触理论计算出滚珠丝杠接触刚度.在此基础上,建立了某卧式加工中心立柱-主轴系统有限元分析模型,通过测试立柱-主轴系统轴端频率响应函数验证了该有限元分析模型的准确性,并分析得出了该立柱-主轴系统导轨结合部对系统动态性能的影响情况.     

玉米抗倒性检测环境的选取方法

倒伏是玉米的重要胁迫之一,为提高玉米新品种抗倒性检测的效率,需选择倒伏胁迫高发环境作为测试环境。该文结合倒伏胁迫发生机理和大风概率统计模型,首先计算每个气象站点的因风倒伏概率,通过插值和区域统计,得到东华北、黄淮海两大玉米主产区各县区的因风倒伏概率,最后进行玉米抗倒性检验环境的选取分析。结果表明：倒伏胁迫概率超过60%的县区适宜作为玉米抗倒性检测的备选环境,只需3～5个点即可基本保证每年试验都会发生倒伏胁迫;黄淮海发生极严重倒伏胁迫的平均概率高于东华北,与实际情况吻合,两大区域可作为极严重倒伏胁迫检测环境的备选县区有54个,严重倒伏有16个,一般性倒伏有21个;本方法为测试环境选取决策提供了一种量化操作的手段,有助于提高测试环境倒伏胁迫的发生概率和新品种抗倒性检测的效率,降低应用风险。     

鳕碎肉酶解物清除羟自由基作用研究

通过测定鳕碎肉酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从海洋蛋白酶YS-894、海洋蛋白酶YS-80、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出海洋蛋白酶YS-894作为酶解鳕碎肉制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的水解酶;用正交试验L9(34)对该酶的水解条件进行优化,并确定了水解的最佳肉水比。最终工艺条件为40℃、酶解45 m in、pH 9.0、酶解质量分数0.25%、底物∶水=1∶3的条件下进行水解,水解物对羟自由基的清除效果较好,清除率为68.88%。     

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的基因克隆和序列测定

黄海黄杆菌YS－9412－130具有稳定的分泌低温碱性蛋白酶的能力。将其染色体DNA用Sau3AⅠ部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2－10Kb的DNA片段,用Klenow大片段酶半补齐,与用SalⅠ酶切且半补齐的质粒pUC19连续后,转化E.Coli.JM109,构建基因文库。且酪蛋白平板法和酶联免疫吸附（ELISA）的活性筛选方法从基因文库中筛选到一株产海洋低温碱性酶的阳性克隆（命名为pHH1）。序列测定分析表明,此重组质粒包含有长度为768bp低温碱性蛋白酶基因的完整的开放读码框架（ORF）和上游基因调控序列。此片段编码由256个氨基酸组成的酶,计算分子量为83000Dal。通过Southern杂交证实了此片段来自于黄海黄杆菌YS－9412－130基因组DNA。     

海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象，从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究。结果表明，在相同条件下，第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86．9％、70．3％、66．8％、63．4％、60．2％，再生率分别为10．5％、18．6％、17．9％、18．2％、17．8％；取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体，原生质体的形成率分别为72．1％、70．4％、60．5％，再生率为13．4％、18．9％、10．4％；溶菌酶浓度为2．5mg／mL、5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL，酶解60min，原生质体的形成率分别为40．6％、70．8％、81．8％、95．6％，原生质体的再生率为19．0％、19．2％、19．0％、10．6％；使用10mg／mL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30min、60min、90min、120min，原生质体的形成率分别为30．8％、81．3％、81．7％、82．9％，原生质体的再生率分别为19．2％、19．3％、16．9％、11．2％；在细菌培养液中添加终质量浓度为5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL和40mg／mL的甘氨酸，培养该菌16h后制备原生质体，原生质体的形成率分别为81．0％、81．1％、90．3％、90．8％、90．6％，再生率为19．1％、19．0％、19．3％、12．0％、9．0％；EDTA对原生质体的形成稍有促进作用，但作用超过30min会影响原生质体的再生；分别以0．6mol／L Kcl、0．3mol／L KCl＋0．3mol／L蔗糖、0．6mol／L蔗糖作为稳定剂，原生质体的再生率分别为10．9％、19．6％、25．9％。结论认为，YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌，在培养基中添加终质度浓度为10mg／mL的甘氨酸培养16h后，再将菌体置于含有0．05mol／LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30min，用10mg／mL溶菌酶，30℃酶解60min，再用0．6mol／L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂，比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生。这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数。     

黄海黄杆菌YS-9412-130固定化细胞产酶技术

3种不同的包埋材料固定化YS－9412－130菌体细胞,进行半连续发酵。结果表明,用2.5%卡拉胶固定化细胞,产酶效率最高;添加明胶对产酶不利而添加豆饼粉与玉米粉后,酶活力有显著提高;卡拉胶固定化细胞发酵液中游离菌体浓度随发酵时间变化略有上升,总体水平较低。发酵液酶活随菌体浓度的增大而呈上升趋势;固定化细胞半连续发酵效率远高于游离细胞分批发酵的效率。     

简单屋顶绿化的滞蓄特性

设计了模拟降雨与数据采集系统,研究了短时强降雨下简单屋顶绿化基质(配比：陶粒57.0%、草炭41.5%、保水剂1.5%)的降雨产流过程,基于37次模拟降雨实验,归纳了降雨产流的一般过程、规律和特性,分析了降雨强度、基质厚度和基质初始含水率对简单屋顶绿化滞流蓄水特性的影响。结果表明：基质厚度和基质初始含水率对简单屋顶绿化的蓄水特性有显著影响,基质初始含水率越低、基质厚度越厚时蓄水特性越佳。建立了产流时间数学模型,简单屋顶绿化降雨产流时间与降雨强度呈负相关,同时也受初始含水量和基质厚度影响。随着干湿循环次数增加,基质的厚度总体呈现下降趋势,储水性能逐渐下降,延迟产流时间逐渐缩短。     

Insecticidal activity of rhamnolipid isolated from pseudomonas sp. EP-3 against green peach aphid (Myzus persicae)

Microorganisms capable of growth on oils are potential sources of biopesticides, as they produce complex molecules such as biosurfactants and lipopeptides. These molecules have antimicrobial activity against plant pathogens, but few data are available on their insecticidal activity. The present study describes the insecticidal activity of a rhamnolipid isolated from diesel oil-degrading Pseudomonas sp. EP-3 (EP-3). The treatment of cell-free supernatants of EP-3 grown on glucose-mineral medium for 96 h led to > 80% mortality of aphids (Myzus persicae) within 24 h. Bioassay-guided chromatography coupled with matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MADLDI-TOF MS) and (1H, 13C) nuclear magnetic resonance (NMR) analyses was employed to isolate and identify the EP-3 insecticidal metabolites. Dirhamnolipid, with molecular formulas of C??H??O?? and C??H??O??, was identified as a main metabolite exhibiting insecticidal activity against aphids. Dirhamnolipid showed a dose-dependent mortality against aphids, producing about 50% mortality at 40 μg/mL and 100% mortality at 100 μg/mL. Microscopy analyses of aphids treated with dirhamnolipid revealed that dirhamnolipid caused insect death by affecting cuticle membranes. This is the first report of rhamnolipid as an insecticidal metabolite against M. persicae. Rhamnolipid shows potential for use as a pesticide to control agricultural pests.