应用电镜技术快速检测传代细胞中的污染因子：—传代细胞污染细菌的快速检测

应用电镜技术检测传代细胞中的细菌污染，即快速又准确。根据细菌的形态及其鞭毛、噬菌体等指标的其中一项均可以判定细菌的污染，该检测结果为传代细胞的应用提供了可靠地保证。     

猪内源氨基酸测定技术评述

氨基酸的真消化率是评价饲料蛋白质生物学效价的重要指标,而要测定氨基酸的真消化率,就必须对内源氨基酸排泄量进行估测。本文就目前内源氨基酸的测定方法进行了综述,并对各种方法的优缺点进行了评述。在内源氨基酸的测定方法中,以传统方法(无氮日粮法、回归外延法和完全可消化蛋白源或静脉灌注平衡氨基酸法)最为常用,但存在种种缺陷。为克服传统方法的缺陷,学者们提出了新的估测内源氨基酸的方法,如同位素标记法、高精氨酸法、肽营养超滤技术、氨基糖测定法以及体内体外结合测定法,但这些方法也存在或多或少的缺陷,还有待于改进。     

黄芪多糖对人工感染IBDV雏鸡红细胞免疫功能的影响

将由未免疫接种腔上囊病疫苗鸡的种蛋孵化而来的160只1日龄海兰白雏鸡随机分为A、B、C和D共4组。A组为对照组，B、C和D组于26日龄时按每只0．3mL的剂量用IBDV攻毒。A、B组未用黄芪多糖（APS）处理，C、D组从攻毒当日起连续胸肌注射APS6d，剂量分别为每只鸡5mg和10mg。分别在21、29、32、35、38日龄时心脏采血1～3mL，测定E—C3bRR、E—ICRR、ERER和ERIR。结果显示，雏鸡感染IBDV后可使E-C3bRR和ERER显著降低（P〈0．01）；APS处理组E-C3bRR、E-ICRR、ERER均高于A、B组（P〈0．01），其中D组最高，而ERIR则与A组相似。证实，雏鸡感染IBDV后红细胞免疫功能低下，而APS可显著提高其红细胞免疫功能。     

猪腺病毒3型Protease蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗体制备

试验旨在研究猪腺病毒3型（PADV3） Protease蛋白在大肠杆菌中的表达,并制备该蛋白的多克隆抗体。利用PCR扩增PADV3 Protease基因,构建重组原核表达载体pET28a-PADV3-Protease和真核表达载体pEGFP-PADV3-Protease,采用双酶切和测序鉴定;将原核表达载体pET28a-PADV3-Protease转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞得到重组原核表达菌株,经IPTG诱导收集蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定,将目的蛋白纯化后与佐剂乳化制备免疫原免疫家兔,制备Protease蛋白多克隆抗体;将真核表达载体pEGFP-PADV3-Protease转染HEK293细胞经G418筛选建立稳定表达EGFP-Protease融合蛋白的细胞系,以该稳定表达细胞系为包被抗原,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）检测抗体的免疫活性与抗体滴度。结果显示,Protease基因开放阅读框（ORF）为615 bp,原核表达系统中Protease蛋白以包涵体形式存在,分子质量大小为23 ku,与真核细胞表达的Protease蛋白分子质量一致,该蛋白在细胞核与细胞质中均有分布,制备的Protease蛋白多克隆抗体能与EGFP-Protease融合蛋白稳定表达真核细胞系发生特异性的反应,与对照细胞无反应。本试验构建了Protease蛋白原核表达菌株和真核表达细胞株,制备的PADV3-Protease蛋白多克隆抗体免疫活性良好,为进一步研究Protease蛋白的生物学功能和PADV3的血清学诊断提供了基础材料。     

山东省首起野生天鹅H5N8高致病性禽流感疫情的紧急调查及处置

2021年1月12—19日,山东黄河三角洲国家级自然保护区大汶流管理站出现35只死亡的野生疣鼻天鹅.经现场调查,市级和省级实验室检测,诊断为疑似H5N8亚型高致病性禽流感,经国家禽流感参考实验室进行病毒分离鉴定,最终确定为H5N8亚型高致病性禽流感疫情.疫情发生后,通过现场调查、座谈及实验室检测等方式,对此次疫情开展了...     

山东省部分规模猪场非洲猪瘟防控成本与效益调查

为了解山东省规模猪场非洲猪瘟防控成本和效益变化情况,2020年上半年从母猪繁殖性能、育肥猪生产性能、仔猪及饲料购买费用、医疗技术投入费用、防控成本以及收入和利润等方面,对抽检的19家规模养猪场开展问卷调查,并对调查结果分别与2019年和非洲猪瘟疫情发生前年份(以下简称正常年份)进行统计对比.结果显示:2020年上半年规...     

断奶前马驹与母马粪便菌群多样性分析

试验旨在探究断奶前马驹和母马粪便菌群多样性,为丰富此阶段马驹肠道菌群多样性提供依据。选取5匹5岁（2胎）、平均体重（453.34±54.23）kg、健康的纯血马母马,以及母马所生的5匹马驹,出生日期相近（±5 d）,平均体重（185.65±9.54）kg,3公2母。母马和马驹在相同环境下饲养,母马日粮组成及营养水平相同,马驹除哺乳外采食的粗饲料和精料补充料相同。马驹6月龄断奶,在断奶前1周用灭菌收粪袋采集母马和马驹的粪便样品。结果显示,母马粪便中菌群α多样性Chao1和ACE指数显著高于马驹（P < 0.05）,分别比马驹高18.94%和15.62%;母马与马驹共有的菌种数为1 399个,母马与马驹特有的菌种数分别为150和68个;在门水平,母马与马驹粪便中排在前十的菌分别是厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门、放线菌门、广古菌门、疣微菌门、螺旋体菌门、Unidentified_Bacteria、纤维杆菌门和无壁菌门,母马粪便中厚壁菌门丰度显著高于马驹（P < 0.05）;拟杆菌门母马比马驹高33.93%,差异不显著（P > 0.05）。由此可见,母马粪便菌群多样性显著高于断奶前马驹;母马与断奶前马驹粪便主要菌是厚壁菌门、拟杆菌门和变形菌门,母马粪便中厚壁菌门和拟杆菌门丰度均高于断奶前马驹。     

乙型脑炎病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定

为鉴定乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白I,II结构域抗原表位,本研究设计了一系列针对E蛋白的I、II结构域(1aa～296aa)部分重叠短肽,分别进行GST融合表达,用JEV阳性血清进行western blot和ELISA反应性筛选,获得了5个线性抗原表位分别为:E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS16)、E10-4(77TGEAHNEK84)、E11-2(83EKRADSS YVCKQ94)、E19(145GTTTSENHGNYSAQVG160)和E33(257SQEGGLHHALAGAIVV272)。除E10和E19外,其它表位均为第一次通过实验方法确定的。将这5个融合蛋白对小鼠进行免疫,获得了高滴度的针对5个融合短肽的抗血清,研究证明了这些表位具有良好的免疫原性。本研究为乙型脑炎特异性诊断试剂及表位疫苗的开发奠定了基础。     

地塞米松和饲粮能量水平对肉仔鸡能量采食及神经肽Y基因表达的影响

本试验旨在探讨注射地塞米松(DEX)模拟应激状态下,应激和饲粮能量水平对肉仔鸡能量采食的影响。选取体重相近的180只23日龄的雄性爱拔益加(AA)肉鸡随机分成6组,每组3个重复,每个重复10只鸡。试验采用2×3析因设计,因素为DEX[处理(注射DEX2 mg/kg)、未处理(注射等剂量生理盐水)]和饲粮能量水平[高能(HE)、低能(LE)以及高能、低能自由采食(H-LE)]。预试期5 d,正试期7 d。结果表明:1)DEX处理极显著降低了肉仔鸡的采食量和体增重(P<0.01),极显著提高了耗料增重比、耗能增重比、腹脂率以及血浆葡萄糖、甘油三酯和尿酸的浓度(P<0.01),显著提高了肠道指数(P<0.05)。2)采用LE饲粮体增重(P<0.05)、腹脂率(P<0.01)显著低于其他2种饲粮,耗料增重比显著低于HE饲粮(P<0.05);采用HE饲粮耗能增重比极显著高于其他2种饲粮(P<0.01);采用H-LE饲粮神经肽Y(NPY)基因表达量显著高于LE饲粮(P<0.05)。3)DEX、饲粮能量水平对耗料增重比(P<0.05)和耗能增重比(P<0.01)的影响存在显著的互作效应。结果提示,DEX应激可使肉仔鸡血浆中葡萄糖、尿酸和甘油三酯的浓度升高;DEX应激和HE饲粮均能增加脂肪在腹部沉积,提高耗料增重比和耗能增重比;H-LE饲粮能上调肉仔鸡下丘脑NPY基因表达。     

白藜芦醇和褪黑素对绵羊胎儿成纤维细胞转染及卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率。将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R^-5、R^-6、R^-7)3种浓度组及白藜芦醇和褪黑素联合添加组(R^-5M^-5、R^-6M^-7),通过电转效率和细胞凋亡情况确定电转体系优化方案;通过对细胞周期、线粒体膜电位及活性氧(ROS)的检测研究其作用机制。将绵羊卵母细胞分为对照组及白藜芦醇和褪黑素(R^-5M^-5、R^-6M^-7)联合添加组,通过绵羊卵母细胞体外成熟后卵丘细胞扩展、第一极体排出及体外受精胚胎的卵裂率检测其对卵母细胞体外成熟的作用。研究结果显示,分离的绵羊胎儿成纤维细胞P3代增殖旺盛,细胞生长曲线呈典型的S型;与对照组相比,所有试验组胎儿成纤维细胞的电转效率均显著提高(P<0.05),R^-5M^-5组电转效率最高;R^-6M^-7组显著降低细胞凋亡率(P<0.05),R^-5、R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组均显著促进细胞增殖(P<0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组G1期细胞增加,S期细胞相对减少,但差异均不显著(P>0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组成纤维细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05),R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组线粒体膜电位均显著增加(P<0.05);R^-6M^-7组显著促进绵羊卵丘细胞扩展、提高卵母细胞第一极体排出率和体外受精胚胎发育能力(P<0.05)。综上,白藜芦醇和褪黑素可以优化绵羊胎儿成纤维细胞电转体系,提高卵母细胞体外成熟效率,为白藜芦醇和褪黑素在转基因动物生产中的应用提供参考依据。