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应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因 总被引:3,自引:0,他引:3
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后 ,应用间接免疫荧光试验、SDS_PAGE和Westernblot检测表明 ,GP5基因在杆状病毒系统中获得了高效表达 ,表达产物因糖基化程度差异 ,表观分子量有 2 2、2 5和 30kDa三种总计约占细胞蛋白总量的 2 6 .4%。 相似文献
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胚乳性状质量-数量遗传的极大似然鉴别方法及其应用 总被引:9,自引:1,他引:8
采用胚乳性状质量 -数量遗传的极大似然鉴别方法 ,进行质量 -数量遗传模型测验和主、微基因效应与变异估计 ,以 F2 和 F3胚乳世代为例详细演示了分析程序 ,将之应用于 3个籼稻组合直链淀粉含量的遗传分析。结果表明 ,直链淀粉含量为一典型的胚乳质量 -数量性状 ,由一个主基因和若干微基因共同控制 ;控制高、低和糯的主基因可能为一组复等位基因 ,且高对低、高对糯接近完全显性 ;微基因对直链淀粉含量的作用在不同组合可以是主基因变异尺度的1 /2~ 1 / 相似文献
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通过克隆2型猪圆环病毒(PCV2)的开放阅读框2(0RF2)基因编码其核衣壳蛋白(Cap)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针.对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后1 0×倍比稀释进行荧光定量PCR(qPCR)扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μ L,线性范围为101 ~ 109,达9个数量级,并且具有很好的特异性.对起始浓度为1.0×108、1.0× 106、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25%、0.10%和0.13%,均小于1%,说明此方法具有良好的准确性和重复性. 相似文献
135.
RT-PCR快速检测口蹄疫病毒 总被引:8,自引:0,他引:8
根据口蹄疫病毒VP1基因的序列,设计了1对引物,建立了检测口蹄疫病毒的RT-PCR方法。对FMDV各毒株检测,结果均为阳性,而对猪病毒性疾病相关病毒进行检测,结果均为阴性;检测19份已知阳性样品,检出率100%;与动物接种试验比较,符合率100%,证明该方法特异,与经典方法动物接种试验比较,其灵敏度提高100倍左右;对O3I3株的细胞毒进行检测,其敏感度达10个TCID50。初步结果表明所建立的RT-PCR技术可用于口蹄疫的诊断和流行病学调查。 相似文献
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中国番木瓜出口蒸热杀虫处理研究,包括海南产日升番木瓜鲜果内橘小实蝇(Bactrocera dorsalis(Hendel))和瓜实蝇(B.cucurbitae(Coquillett))的卵和不同龄期幼虫忍耐力比较试验,番木瓜小规模、大规模蒸热杀虫试验,以及蒸热处理对番木瓜品质的影响等。结果显示,番木瓜鲜果内2种实蝇的耐热力由强至弱的发育期依次为3龄幼虫→2龄幼虫→1龄幼虫→卵;其中,橘小实蝇的耐热力大于瓜实蝇,以橘小实蝇3龄幼虫的耐热力最强;完全杀灭番木瓜鲜果内2种实蝇的卵和幼虫(死亡率100%)的蒸热处理条件是番木瓜在蒸热室相对湿度60%~70%、约经3~3.5 h果心温度缓慢升温至41℃时,使用饱和热蒸汽(相对湿度90%~95%)25 min内快速升温至47℃后水淋冷却至常温。国产番木瓜小规模、大规模蒸热杀虫处理进一步确认和验证,在上述蒸热处理条件下,鲜果内总计数量分别为10 000头和32 000头最具耐热力的供试橘小实蝇3龄幼虫全部被杀灭,超过美国采用的机率9(Probit 9)检疫安全水平(99.9968%死亡率),完全可确保检疫安全。同时,蒸热处理后第7天的番木瓜鲜果与对照鲜果品质(包括色泽、口感,以及还原糖、蔗糖、总糖、总酸、维生素C和可溶性固形物的含量)的比较测定数据表明,除维生素C的含量有微量损失外,基本可保持鲜果的品质不变。 相似文献