玉米叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测

Tps1是生物保护物质海藻糖的关键合酶基因.构建含Tps1的玉米叶绿体表达载体,首定从玉米叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段;然后将编码酵母海藻糖合酶基因Tps1表达盒(Prrn-Tps1-TpsbA-ter)、草丁膦抗性基因Bar表达盒(RpsbApro-Bar-RpsbAter)、卡那霉素抗性基因Npt Ⅱ和绿色荧光蛋白基因Gfp构建的融和基因表达盒(Prrn-Npt Ⅱ/Gfp-RrbcLter)一起克隆到定点整合同源片段之间,构建了玉米叶绿体的稳定表达载体mTKGB.通过基因枪轰击法将mTKGB转化到玉米幼嫩叶片中,培养2 d后,在激光扫描共聚焦显微镜下脱测到玉米一些细胞的叶绿体中有很强的GFP绿色荧光,结果表明构建的载体可在玉米叶绿体中表达.     

基于转录组测序筛选乌苏里白鲑肌肉生长关键候选基因研究

为了挖掘调控乌苏里白鲑(Coregonus ussurinsis Berg)肌肉生长的关键候选基因,本研究对不同生长速度乌苏里白鲑的肌肉组织进行转录组测序,以期为乌苏里白鲑群体选育提供基础数据。首先,在同等条件下(从混合池中)随机选择乌苏里白鲑F2个体进行实验分组(快长组和慢长组)。接着分别从快长组[体重为(219.20±38.66) g]和慢长组[体重为(74.30±17.86) g]中随机选取10尾样本,取其背部肌肉进行转录组测序。以FDR (false discovery rate)<0.05且|log2(FC)|>1 (FC, fold change)为条件筛选差异表达基因并对其进行GO (gene ontology)和KEGG (Kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集分析,并通过qPCR验证转录组数据的准确性。转录组测序结果显示,共筛选出2 211个差异表达基因,与慢长组相比,快长组中583个差异基因表达上调及1 628个基因表达下调。GO功能注释结果显示,差异基因主要参与细胞过程和结合过程,差异基因显著富集到251条KEGG通路(P<0.05),其中,MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)、PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)、紧密连接(tight junction)、胰岛素信号通路(insulin signaling pathway)、糖酵解/糖异生(glycolysis/gluconeogenesis)和PPAR信号通路(PPAR signaling pathway)参与细胞生长。之后结合功能注释结果和KEGG,鉴定出肌浆/内质网钙ATP酶基因atp2a1和atp2a2、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因g6pc、生长因子结合蛋白1基因igfbp1以及肌球蛋白重链基因myh1、myh4、myh6、myh7、myh9和myh13等可能与肌肉生长密切相关的基因。本研究共筛选出10个可能与乌苏里白鲑肌肉生长相关的关键候选基因,为今后乌苏里白鲑分子标记辅助育种提供了基础数据。     

虹鳟倍性鉴定SSR标记筛选与应用研究

虹鳟(Oncorhynchus mykiss)是我国冷水性鱼类的主要养殖品种。与二倍体相比,虹鳟三倍体具有生长速度快、肉质好和不育等优点。目前,鉴定虹鳟倍性主要是通过流式细胞术进行DNA含量分析,但这种方法需要采集鱼类血液或组织样本,会对其造成伤害。为了实现利用微创方法收集样本鉴定虹鳟倍性,本研究利用PCR扩增以及电泳分离技术对153个微卫星标记(SSR标记)进行分析,其中139个SSR标记能够在二倍体和三倍体中成功扩增,筛选出132个SSR标记具有多态性,最终鉴定出7个标记在三倍体中表现出较高的变异性。通过在52个已知倍性水平的参考样本和48个未知倍性的样本上进行验证,进一步从中筛选出3个SSR标记(SSR1054、SSR1056和SSR1468)足以区分倍性水平,并且根据3个标记序列重新设计了3对具有良好稳定性的引物序列进行倍性分析应用。本研究所筛选的SSR标记解决了现有虹鳟倍性鉴定中存在的技术流程复杂、耗材昂贵的问题,并有助于不同倍性虹鳟的遗传多样性研究。     

甘油超临界水气化制氢过程参数和动力学研究

为研究甘油超临界水气化制氢过程及转化动力学,采用正交试验和单因素试验,在连续式反应器中,分析不同工艺参数对甘油超临界水气化气体产物分布和气化转化效率的影响,对气体产物进行气相色谱分析。利用集总动力学研究方法,优化甘油超临界水气化转化动力学模型,增加CO₂甲烷化反应路径,探讨甘油超临界水气化过程中动力学参数和气相产物生成及消耗路径。结果表明：甘油超临界水气化制氢的最佳工况为温度600 ℃、甘油浓度0.015 mol/L、压力27 MPa和停留时间18 s,此时H₂产量为2.411 mol/mol,气化效率为76.49 %。单因素试验结果可知,较高反应温度和压力、较低原料浓度和适当延长停留时间有利于提高H₂产量和甘油气化效率。反应速率常数随着温度的升高而增加,甘油热解路径Ⅱ和中间体蒸汽重整路径Ⅰ的活化能分别高于甘油热解路径Ⅰ和中间体蒸汽重整路径Ⅱ。H₂主要通过甘油热解和水气变换反应生成,CO₂主要通过甘油热Ⅰ和水气变换反应生成,CO₂甲烷化是H₂和CO₂消耗的主要路径。中间体热解是CO和CH₄的主要生成路径,CO的主要消耗路径是水气变换反应。     

不同药剂对樱桃番茄3种主要病虫害的防控效果评价

为了筛选出有效防治樱桃番茄灰霉病、青枯病、烟粉虱的药剂,研究了不同药剂对樱桃番茄这3种主要病虫害的药剂的防控效果。试验结果,表明复配药剂30%啶酰菌胺·咯菌腈SC 0.08g/m²对樱桃番茄灰霉病发防控效果最好,末次药后7d对叶片和果实的防效分别达到83.96%和85.89%;50%啶酰菌胺WG 0.08g/m²和50%腐霉利WP 0.15g/m²对番茄灰霉病的防效也均高于78.00%,对樱桃番茄灰霉病表现了较好的防控效果。22.4%螺虫乙酯WP 0.05mL/m²樱桃番茄烟粉虱防控效果最好,药后7d防效达83.38%,其次为50g/L双丙环虫酯DC 0.02mL/m²,防效为80.03%。生防菌剂50亿CFU/g多粘类芽孢杆菌0.3g/m²对樱桃番茄青枯病的防效较好,防效为53.51%。本研究筛选出了对樱桃番茄灰霉病、青枯病和烟粉虱具有较好防控效果的的药剂,对樱桃番茄生产具有重要的指导意义。     

不同水分处理对水芹生长及产量的影响

为了明确不同水分处理对水芹生长及产量的影响,以大叶水芹为试验材料,设置了干旱、干旱复水、湿润、水淹等4个水分处理,研究了其对水芹根系形态、抗氧化酶活性及产量的影响。结果表明,在水淹处理下,水芹株高、总叶绿素含量、类胡萝卜素含量、根系活力、地上部分干生物量以及产量均最高,分别达到36.17 cm、3.44 mg·g^-1、0.38 mg·g^-1、0.50μg·g^-1·h^-1、0.67 g、11 913.75 kg·hm^-2;在湿润处理下根系总长度、表面积、体积均最大,分别达到299.06 cm、101.61 cm²和5.46 cm³;在干旱处理下POD活性达到最高,为4 120.00 U·g^-1·min^-1。综上所述,水淹处理时大叶水芹具有较好的长势和较高的产量。     

推行生态发展模式打造机械化种养结合基地 ——农业农村部畜禽养殖机械化典型案例之二

本文概述了河南花花牛农牧科技有限公司的养殖模式.该公司采用"以养带种、以种促养,资源循环、生态发展"的发展模式,应用了智能化的饲喂管理装备,实现了青贮、饲喂、挤奶、环控和粪污处理的机械化和自动化,泌乳牛年平均单产达到国际先进水平.     

猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达

根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌（T＋Pm）toxA基因序列（AF240778）设计1对引物,从猪源D型T＋Pm中扩增出toxA基因片段（3858 bp）,再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ（1084 bp）、ZH（1092 bp）、HM（906 bp）3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。     

乡村社区化治理的基本路径

建设现代文明乡村社区既是农村社区治理的根本目标,同时也是科学统筹城乡发展,适于中国乡村社会发展的有效途径。乡村社区化治理必须开创新的思路,系统改革国家乡村社会发展战略,根本改革国家财税分配体制,加大乡村一级社会各项事业综合发展的财政投入;走乡村社区化发展道路,系统建设发展承接中国城市化影响力和辐射力的乡村社区各类公共治理平台;强力推进乡村社区公共基础设施和乡村社区社会服务保障体系的建设,着力发展乡村社区经济、乡村社区文化、乡村社区教育,保护乡村社区农业生态环境,真正实现新农村建设的美好蓝图。