小麦高产栽培集成技术

经过2年试验示范,总结了小麦高产栽培集成技术。     

海门山羊GDF9基因的RFLP分析

采用PCR-RFLP技术,对120只海门山羊生长分化因子9(GDF9)基因的G8位点进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),探寻与产羔数相关的遗传标记.结果表明:PCR扩增产物均被切成2个片段,表现出1种基因型,无多态性现象,推测GDF9基因对海门山羊的繁殖性能无显著影响.     

羊传染性脓疱诊断方法的建立

利用MDBK细胞从青海某养殖户发病羊唇部痂皮中分离获得一株病毒,通过临床症状、PCR检测以及组织病理学观察等方法对该株病毒进行了鉴定,证实分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf Virus,ORFV),命名为ORFV-QHMH01。参照GenBank中ORFV F1L基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,对ORFV-QHMH01株F1L基因进行了克隆、测序,并推导出其氨基酸序列。序列分析表明,分离株F1L基因片段长987bp,编码328个氨基酸,与AF097215、AY040081、AY040082、AY040083、AY040084、AY040085、FJ808075、HM133903、HQ221964、JQ271535株的核苷酸序列同源性分别为:96.7%,95.6%,96.1%,96.2%,97.5%,97.2%,96.5%,48.6%,95.3%,98.3%。系统发育进化树结果表明,ORFV-QHMH01分离株与参考毒株JQ271535和AY040084的亲缘关系较近,这表明不同地区分离株的F1L基因具有较好的保守性。     

15～30kg陆川猪能量和粗蛋白质水平的研究

选择80头健康、胎次相近,体重接近15kg的陆川猪阉公猪。随机分为4组。每组设2个重复,每个重复10头。研究日粮中不同营养水平对生长期陆川猪生产性能、屠宰性能和肉质性状的影响,以确定陆川猪在生长阶段所需能量,粗蛋白的最佳水平。结果表明：1）不同营养水平对平均日采食量、平均日增重和料重比均无显著影响。2）随着营养水平的提高,可使眼肌面积增大、瘦肉率提高。3）随着营养水平的降低,降低肉色评分、增加大理石纹评分和提高肌内脂肪含量。在生长期,陆川猪适宜的消化能为12．55MJ／kg,粗蛋白水平为15．50％。     

一起山羊巴氏杆菌病的诊疗报告

2010年2月20日,我县马坡镇雄鹰村一山羊养殖户的羊群出现腹泻、死亡。经临床诊断和实验室检验,诊断为山羊巴氏杆菌病。经治疗,病情得到控制,现报告如下：     

青海省西宁地区藏獒巴贝斯虫病的血清学检测

用基于重组的犬吉氏巴贝斯虫P50蛋白作为ELISA诊断抗原,对来自青海省西宁地区的5个藏獒养殖基地的118份藏獒血清,进行犬巴贝斯虫病的血清学诊断,共检出阳性血清12份,阳性率为10.17%。结果初步表明西宁地区部分藏獒养殖基地中存在犬吉氏巴贝斯虫的感染。     

乌骨鸡传染性法氏囊病并发大肠杆菌病的诊制

青海省某特禽养殖场饲养的2000多只乌鸡中，于1999年5月发生传染性法氏囊病并发大肠杆菌病。1发病情况　　1999年5月15日，西宁地区某养殖场饲喂的2000多只乌鸡(分别饲喂在4栋鸡舍中)，未进行鸡传染性法氏囊病疫苗的免疫。15日在4号乌鸡舍内零星发现几只鸡饮食减少、闭目呆立、羽毛蓬乱、打堆、拉白色和绿色水样稀便。饮用卡那霉素后，仍未控制死亡，至18日早晨，各鸡舍中一半左右的乌鸡都出现了上述症状。2临诊症状　　病鸡精神不振，食欲下降或废绝，怕冷，扎堆，羽毛粗乱，走路摇摆、呆立或卧地不起，瞌睡。后期表现弓背、蹲伏，部分乌鸡…     

青海省海北地区牦牛源贾第虫检测与基因型分析

为研究青海省海北地区牦牛贾第虫的感染情况及虫种基因型,对青海省祁连县、海晏县和刚察县的297份牦牛粪样采用蔗糖密度梯度离心法纯化,之后用免疫荧光方法对贾第虫进行鉴定,对阳性及疑似阳性样品采用基于18SrRNA和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因的套式PCR扩增,并对扩增产物进行测序。将测序结果与GenBank中的贾第虫序列进行比对分析。免疫荧光抗体试验结果显示,共检出24份贾第虫阳性粪样,总阴性率为8.1%。套式PCR扩增结果显示,24份阳性样品中18SrRNA基因扩增阳性22份,gdh基因扩增阳性18份,产物大小分别为292bp和432bp。序列分析表明,分离的虫种均为牦牛源肠贾第虫,基因型为集聚体E,未发现人畜共患基因型。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的融合表达及兔抗血清的制备

以鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)Gt株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP2基因,经EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的pET30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及序列鉴定正确的阳性重组子转化E. coli DE3菌,经IPTG诱导,表达的VP2蛋白通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,并对其进行间接ELISA、IFA和Western blot分析.SDS-PAGE分析表明,在IVFG诱导下成功表达了约为50 kDa的His-VP2融合蛋白;间接ELISA检测制备的兔抗血清效价在1:25 600以上;IFA及Western-blot分析结果表明,其可特异性结合真核表达的VP2蛋白以及IBDV全病毒.研究结果提示,免抗VP2血清可用于VP2蛋白及病毒的检测,为进一步研究IBDV分子生物学功能提供了物质基础.     

绵羊肺炎支原体诊断方法的建立

从青海省海晏县发生胸膜肺炎的绵羊群中采集3份肺组织病料,进行病原的分离培养和特异性PCR检测。结果从3份肺组织中均分离到支原体,经鉴定为绵羊肺炎支原体,表明建立的PCR方法能对绵羊肺炎支原体做出正确诊断。