猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,而常规RT-PCR方法只能检测到1.53×103拷贝/μL。对37份现地病料的检测结果也表明该法(检出17份)比常规RT-PCR方法(检出12份)和TGEV抗原快速检测试剂盒(免疫层析法,检出10份)的敏感性高。     

猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的检测

为了解猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的流行状况和分子特性,分析整合子在细菌多重耐药中的作用,采用PCR方法检测75株多重耐药大肠杆菌中整合酶基因和整合子基因盒。结果显示,猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子流行普遍,75株猪源大肠杆菌中检出Ⅰ类整合子56株,检出率为74.7%;检出Ⅱ类整合子4株,检出率5.3%;未检出Ⅲ类整合子。共检出5种Ⅰ型整合子,各种Ⅰ型整合子整合不同种类、不同数目的耐药基因盒。这表明Ⅰ型整合子对细菌多重抗药性的产生和传播起着重要作用,整合子是介导细菌多重耐药性的重要分子机制。     

冠状病毒核衣壳蛋白细胞核定位特征的研究进展

冠状病毒属于尼多病毒目(Nidovirales),冠状病毒科(Coronaviridae),冠状病毒属(Coronavirus)成员,为单股正链RNA病毒,根据其基因组和抗原性的特征又分为3个群:第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒(Transmissiblegastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)和人冠状病毒229E(Humancoronavirus 229E,HcoV-229E);第Ⅱ a群主要有小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV),第Ⅱ b群主要有严重的急性呼吸综合征冠状病毒(Severe acute respiratory synd-rome coronavirus,SARS-CoY);第Ⅲ群主要包括鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,my)、人冠状病毒0C43(Human coronavirus NL63,HCoV-NL63)[1,2].     

猪轮状病毒重组VP7蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立

本研究以纯化的原核表达的猪轮状病毒VP7抗原表位区域为抗原,建立了检测猪轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他7种常见猪病病毒（TGEV、PEDV、CSFV、PCV2、PRRSV、PPV、PrV）的阳性血清不发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％;对来自不同猪场的血清的检测结果表明,该ELISA方法与中和试验检测结果符合率达94．8％。本试验建立的ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和轮状病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

正链RNA病毒感染性克隆的构建策略及影响因素

利用全长cDNA构建感染性克隆是拯救RNA病毒的基础和关键,也是反向遗传技术的核心。文章综述了构建正链RNA病毒感染性克隆的基本思路和关键技术,总结了影响克隆感染性的因素,并对感染性克隆技术的应用做一简述。     

南方地区新型羊舍环境评价及对山羊日增重的影响

为了研究新型羊舍夏季小气候环境以及设计合理的饲养密度,在夏季检测了新型羊舍和西南地区常见的双坡顶漏缝地板有窗封闭式羊舍的空气环境参数,同时测定了不同饲养密度羊舍对羊体增重的影响。结果表明：①新型羊舍日平均温度和日最高温度极显著低于有窗封闭羊舍（P＜0.01）;有窗封闭羊舍与新型羊舍相比,相对湿度显著较高（P＜0.05）,同时羊舍内湿度极显著高于外界湿度（P＜0.01）;②通过称重比较,试验期间低密度组羊只的体增重极显著高于中密度组和高密度组,当饲养密度增加一倍时,羊只的体增重极显著降低（P＜0.01）。综合分析认为,新型羊舍夏季小气候环境明显优于有窗封闭羊舍;在合适的饲养密度下,羊舍羊群增重效果好,羊群发病率低。     

A群猪轮状病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

To prepare the monoclonal antibodies against VP7 protein of group A porcine rotavirus (PoRV) serotype G11,VP7 gene of PoRV serotype G11 was cloned into the vector pGEX-6P-1. The recombinant plasmid was transformed into E.coli competent cells DH5α and induced by IPTG. Hybridomas were produced by fusing SP2/0 cells with spleen cells from mouse immunized with GST-VP7 recombinant protein. One hybridomas secreting MAb against VP7 protein was identified by indirect ELISA. Western blotting analysis showed that the MAb could recognize the recombinant VP7 protein and authentic VP7 protein of PoRV,and the specific immunoflurescence was detected in PoRV infected MA104 cells by indirect immunoflurescence assay.The result of MTT method showed that the MAb had the neutralizing activity. The subtype of the MAb was IgG2b. The results showed that VP7 protein was successfully expressed in E.coli, one MAb was preparated and identified,and it could be used for further study of prevention,diagnosis and treatment of porcine rotavirus disease.     

猪源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性以及耐药基因的检测

为指导临床合理用药,根据耐药表型和基因型研究耐氨基糖苷类药物猪源大肠杆菌的流行情况,采用K—B法检测大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类药物的耐药基因以明确其基因型。结果显示,60株临床分离菌中,耐氨基糖苷类抗生素菌株54株,耐药率为90％;aac（3）-Ⅰ基因PCR扩增均为阴性;aac（3）-Ⅱ基因检出阳性28例,阳性率为46．7％;aac（6’）-Ⅰ基因检出阳性54例,阳性率为90％。结果表明,耐氨基糖苷类药物的大肠杆菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ为主。     

赤芝、紫芝和鹿角灵芝醇提物的活性成分及生物活性研究

赤芝、紫芝和鹿角灵芝是三种常见的灵芝。对这三种灵芝的乙醇提取物所作的抗氧化活性比较结果,鹿角灵芝提取物中多酚含量最高,具有较强的抗氧化活性。在提取液0.5~2.0 mg/mL的浓度范围内,赤芝、紫芝和鹿角灵芝的醇提物显示出一定的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,且未显现浓度的依赖性。     

猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白抗原间接ELISA抗体检测方法的建立

本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原，建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法，将其命名为mTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应。批内和批间重复性试验的变异系数均小于15％；对仔猪免疫后不同时间的血清检测结果表明mTGE-ELISA与纯化病毒ELISA符合率达95．0％；mTGE-ELISA相对于VN试验的敏感性为96．3％、特异性为92．2％：现地试验中，mTGE-ELISA与Svanova TGEV／PRCV antibody diagnosis Kit的符合率达87．0％，通过中和试验复核结果表明，mTGE-ELISA的假阳性低于Svanova TGEV／PRCV antibody diagnosis Kit。本试验建立的mTGE-ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性，为免疫猪群抗体监测和TGE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。